果蔬中六氯苯残留检测方案(自动进样器)

2 吕建霞 余翀天赛默飞世尔科技(中国)有限公司 有机氯农药曾经被广泛使用，其化学性质稳定，在环境中难以进行化学和生物降解，残留期长，有生物蓄积作用，在我国从1980年开始禁用，但至今仍存在于自然界中，可通过食物途径对人类造成危害。作为有机氯农药的替代品之一，拟除虫菊酯类农药在农业生产中得到了广泛应用，这类农药施用量较小、易生物降解、残留期较短，但由于其对病菌、害虫、杂草等具有更强的杀伤作用，因此对哺乳动物的伤害不容忽视。 目前世界许多国家都对有机氯及拟除虫菊酯农药的最高残留限量作了严格的规定，其中最严苛拍应该是日本的肯定列表制度“，设定了进口食品、农产品中可能出现的734种农药、兽药和饲料添加剂的近5万个暂定标准，对没有涉及到的产品，设定了一律标准0.01mg/kg。因此有必要建立一个前处理过程简单、检测灵敏度高的方法来测定果蔬中的有机氯农药和拟除虫菊酯类农药。 仪器 Trace1310气相色谱仪，配 ECD 检测器(Thermo Scientific)； AS1310自动进样器 (Thermo Scientific)高速均质仪离心机天平旋转蒸发仪耗材色谱柱：TG-5MS(30 mx0.25 mm×0.25 pm) 标准品(α-六六六，β-六六六，y-六六六，88-六六六，六氯苯，氯硝胺，西玛津，莠去津，五氯硝基 苯，百菌清，敌稗，乙烯菌核利，七氯，艾氏剂，腐霉利， o，p'-DDD， o，p'-DDT， p.p'-DDE， p.p'-DDD， p，p'-DDT， 硫丹，丁草胺，狄氏剂，乙酯杀螨醇，异狄氏剂，三氯杀螨醇，异菌脲，胺菊酯，联苯菊酯，甲氰菊酯，高效氯氟氰菊酯，氯菊酯，氟氯氰菊酯，氯氰菊酯，氟氰戊菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯，氟胺氰菊酯)由百灵威公司提供，乙腈、甲苯等有机试剂为 Fisher 公司提供。其他未注明试剂均为分析纯，由国药集团试剂有限公司提供。 标准溶液的制备 储备液：准确确取10.0mg农药标准品，用正己烷稀释，逐一配制成 100mg/L单一农药标准储备液，储存在冰箱中备用。 混合标准中间液：将38种农药逐一吸取1mL的单个农药储备液分别注入同一容量瓶中，用正己烷稀释定容至100mL， 得浓度为 1mg/L的混合标准中间液。 称取经磨碎的试样20.00g， 加入40mL 乙腈均质提取1min，加入5.0g氯化钠，继续均质 1min。然后以 10000rpm的速度离心10min，取上清液20mL 旋旋转蒸发瓶中蒸至近干。待固相萃取净化。 于 PC/NH2-SPE 小柱(500mg， 6mL)上层添加1cm高无水Na，SO； 先用8mL乙十+甲苯(3+1，体积比)淋洗层析柱，小柱淋洗后下面接上旋转蒸发瓶接收溶液，再将浓缩后的提取液用6mL乙腈+甲苯(3+1，体积比)分三次洗涤旋蒸瓶，转移至层析柱内，然后用25mL 乙腈+甲苯(3+1，体积比)混合溶剂洗脱，洗脱液旋转蒸发浓缩近干后，用甲苯定容至 1.0mL 待上机分析。 色谱柱： TG-5MS (30mx0.25mmx0.25 pm)；柱温：60℃(1 min)， 15℃ /min 到 180℃ (3 min)，5℃ /min 到230℃(1min)， 最后20℃ /min 至280℃(20 min)； 进样模式：不分流进样，不分流时间为 1min； 进样量：1pL。 进样口温度：280℃； 载气：氮气(99.999%)，恒流模式，1 mL/min。 检测器温度：300℃；尾吹气：氮气，流速：15mL/min。 取 20 pg/L标准溶液，按照上述色谱条件测定，得到的色谱图如下： 图1.20 ug/L标准溶液色谱图 配制38种农药组份的混合标准溶液，各浓度分别为：20.0、40.0、100.0、200.0、400.0 pg/L， 采用上述方法分别进样分析，考察各组分在 20.0-400 pg/L 浓度范围内的线性。方法回收率和重现性的考察：：甘蓝和水果黄瓜样品分别进行加标回收实验，加标水平为10 pg/kg，做3个平行样品， 计算回收率和精密度。以三倍信噪比计算各组分的方法检出限。结果表明，38种农药组分线性关系良好，回收率在71.3%~113.6%之间，精密度(RSD 值， n=3)在 2.7%~9.9%之间，检出限在 0.1-2.0 ug/kg 之间，仪器检测灵敏度高(结果见表1和表2)。 表1.化合物保留时间、线性及方法检出限 16 21.24 pp-DDE p，p'-DDE 20-400 0.9984 0.1 LOD ug/kg 1 13.87 a-BHC a-BHC 20-400 0.9990 0.1 2 14.16 六氯苯 hexachlorobenzene 20-400 0.9988 0.1 3 14.23 氯硝胺 dicloran 20-400 0 . 9 95 3 0.2 4 14.34 西玛津 simazine 20-400 0.9959 2.0 5 14.51 莠去津 atrazine 20-400 0.9946 2.0 6 14.73 b-BHC b-BHC 20-400 0.9967 0.5 7 14.97 r-BHC r-BHC 20-400 0.9943 0.1 8 15.15 五氯硝基苯 pentachloronitrobenzene 20-400 0.9958 0.1 9 15.76 d-BHC d-BHC 20-400 0.9959 0.1 10 15.94 百菌清 chlorothalonil 20-400 0.9952 0.1 11 16.78 敌稗 propanil 20-400 0.9930 0.2 34 29.58，29.75，29. 氯氰菊酯 cypermethrin 20-400 0.9987 0.5 89.29.97 38 33.38， 34.00 溴氰菊酯 deltamethrin 20-400 0.9988 0.5 0.5 LOD pg/kg 0.2 35 30.34 氟氰戊菊酯 flucythrinate 0.9952 20-400 0.9997 0.5 36 31.49 氰戊菊酯 fenvalerate 20-400 0.9963 0.9992 0.5 27 25.70 异菌脲 iprodione 20-400 0.9995 0.5 0.9988 0.9983 28 25.80 胺菊酯 tetramethrin 20-400 0.9981 0.5 29 25.95 联苯菊酯 bifenthrin 20-400 0.9983 0.2 30 26.09 甲氰菊酯 fenpropathrin 20-400 0.9995 0.2 表2.方法回收率和重复性 黄瓜添加水平 10pg/kg 甘蓝添加水平 10pg/kg 化合物 平均回收率 RSD(n=3) 平均回收率 RSD(n=3) 氟氯氰菊酯 92.1 4.7 98.4 6.8 氯氰菊酯 105.1 6.7 106.3 4.8 氟氰戊菊酯 110.3 5.7 104.2 6.5 氰戊菊酯 81.3 6.6 110.6 5.6 氟胺氰菊酯 100.2 6.4 98.5 5.4 溴氰菊酯 81.1 5.6 105.7 5.5 实际样品测试 采用样品加标，观察各色色峰出峰情况(见图2)。对实际 样品测试，也未出现色谱峰干扰情况。标准溶液、样品、 样品加标谱图见图2。 图2.标准溶液、样品、样品加标谱图(如图中标注：蓝色为标准溶液，紫色为样品，黑色为样品加标的谱图) 结论 质干扰，方法简单，自动化程度高，净化效果理想。 采用赛默飞世尔新型的气相色谱仪检测果蔬中的农药残留，准确定量目标物， RSD 值小，灵敏度高，无杂质峰干扰。石墨碳/氨基复合固相萃取小柱能够去除果蔬中的基 SCIENTIFIC 有机氯农药曾经被广泛使用，其化学性质稳定，在环境中难以进行化学和生物降解，残留期长，有生物蓄积作用，在我国从 1980 年开始禁用，但至今仍存在于自然界中，可通过食物途径对人类造成危害。作为有机氯农药的替代品之一，拟除虫菊酯类农药在农业生产中得到了广泛应用，这类农药施用量较小、易生物降解、残留期较短，但由于其对病菌、害虫、杂草等具有更强的杀伤作用，因此对哺乳动物的伤害不容忽视。目前世界许多国家都对有机氯及拟除虫菊酯农药的最高残留限量作了严格的规定，其中最严苛的应该是日本的肯定列表制度 [1]，设定了进口食品、农产品中可能出现的734 种农药、兽药和饲料添加剂的近 5 万个暂定标准，对没有涉及到的产品，设定了一律标准 0.01mg/kg。因此有必要建立一个前处理过程简单、检测灵敏度高的方法来测定果蔬中的有机氯农药和拟除虫菊酯类农药。采用赛默飞世尔新型的气相色谱仪检测果蔬中的农药残留，准确定量目标物，RSD 值小，灵敏度高，无杂质峰干扰。石墨碳 / 氨基复合固相萃取小柱能够去除果蔬中的基质干扰，方法简单，自动化程度高，净化效果理想。