头孢类化合物中4种化合物检测方案(液相色谱柱)

Mar 27， 2018No.22， HLS Business Park， 14 kechuangStreet.Economic Technological Development Zone， LC Application Lab， SanyofineChina Beijing， China 100176 Phone 400 801 3103 4种头孢中间体的共同分析 _-7-ADCA、△-2-7-ADCA、苯乙酸及扩环酸的分析 客户提供了 7-ADCA (7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸)， △-2-7-ADCA、苯乙酸及扩环酸原料，希望本实验室依据客户所提供的色谱条件筛选合适的C18色谱柱，实现以上4种化合物的稳定良好分析。 本实验室参考客户提供的色谱条件，首先尝试使用经过聚合物包被处理的中等性色谱柱——CAPCELL PAK C18 MGII 对客户所提供样品进行分析，使用PDA检测器进行检测。如图1，在高浓度大体积进样的情况下，各色谱峰发生严重过载现象，出现平头峰；如图2，降低进样体积至5uL可得到相对良好峰形，且各组分间能够得到良好分离，分离度均在10.0以上(结果详见表1)。 图1 CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱分析结果(进样量：50pL) 图2 CAPCELL PAK C18 MGII 色谱柱分析结果(进样量：5pL) 表1 CAPCELL PAK C18 MGII 分析结果详表(进样量： 5uL) Retention Time Theoretical plates (USP) Resolution (USP) 8.287 123501 0.00 1.23 9.662 104159 12.84 1.14 11.663 83218 14.22 1.13 18.025 159138 37.15 1.13 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGII S5； 4.6 mm i.d. ×250 mm (A4AD12217) 流动相： A：磷酸盐缓冲液 B：乙腈 B% 0% (0min) ->0% (2min) ->20% (10min) ->25% (15min) -> 0%(15.1min) ->0% (15.1min) 流速： 1.0 mL/ min 柱温： 30°C 进样量： 50 pL、5 pL PDA 220 nm 检 样 7-ADCA、△-2-7-ADCA、苯乙酸及扩环酸均为 0.3 mg/mL((稀释液*溶解稀释) 注：①磷酸盐缓冲液*：1.248g磷酸氢二钾和 5.98 g磷酸二氢钾溶于1000mL 水中 ②稀释液*：磷酸氢二钠 2.86g， 加水 100 mL溶解，用磷酸调 pH至6.95 为使客户有更多色谱柱选择，本实验室也尝试了能够在纯水系流动相下稳定使用的高极性色谱柱一CAPCELL PAK C18 AQ 进行分析。如图3，几种头孢中间体的整体保留有所增强，而高浓度上样仍会出现 与 MGII 色谱柱相似的过载现象；如图4，降低进样体积进行分析，可得到良好结果，同时发现扩环酸有一定程度的拖尾(见表2)。 图 3 CAPCELL PAK C18 AQ 色谱柱分析结果(进样量：50pL) 图4CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析结果(进样量：5uL) 表 2 CAPCELL PAK C18 AQ分析结果详表(进样量：5uL) Retention Time Theoretical plates (USP) Resolution (USP) Asymmetry (10%) 8.782 80599 0.00 1.32 10.153 89788 10.58 1.28 12.155 62953 12.16 1.30 18.682 72396 27.68 1.57 HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5；4.6 mm i.d.×250 mm (A4AD12217) 流动相： A：磷酸盐缓冲液* B：乙腈 流1.0 mL/min速：柱 30°℃ 进样量： 50 pL、5 pL 检PDA 220 nm 样7-ADCA、△-2-7-ADCA、苯乙酸及扩环酸均为 0.3 mg/mL((稀释液*溶解稀释) 注：①磷酸盐缓冲液*：1.248g磷酸氢二钾和5.98g磷酸二氢钾溶于1000 mL水中 ②稀释液*：磷酸氢二钠2.86g， 加水 100 mL溶解，用磷酸调 pH至6.95 综上实验结果，使用中等极性色谱柱 CAPCELL PAK C18 MGII S5； 4.6 mm i.d. × 250 mm和高极性色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQ S5； 4.6 mmi.d.×250 mm， 以磷酸盐缓冲液(pH 6.0)-乙腈为流动相体系，在 30℃柱温条件下进行梯度分析，均能够实现7-ADCA、△-2-7-ADCA、苯乙酸和扩环酸的良好分离，其中， CAPCELL PAK C18 MGII 色谱柱所得峰形更佳。 使用经过聚合物包被处理的中等极性色谱柱——CAPCELL PAK C18 MGII对客户所提供7-ADCA、△-2-7-ADCA、苯乙酸、扩环酸样品进行分析，使用PDA检测器进行检测，在指定条件下得到了良好保留与分离结果。同时，尝试使用能在纯水相条件稳定使用的高极性色谱柱AQ进行分析，同样能得到良好结果。其中，MGII色谱柱所得峰形更佳。