阿莫西林中主要成分含量及杂质检测方案(液相色谱柱)

阿莫西林及其杂质的液相分析 首先参考客户提供液相条件，对客户提供的阿莫西林样品进行分析尝试。 由于梯度条件水相较高，故使用可在100%水相条件下稳定使用的资生堂高极性 Ci8 色谱柱 CAPCELL PAKAQ；同时，为提高杂质间分离度，我们选择柱效更高的3um粒径色谱柱进行实验条件的优化。 实验中发现，柱温对阿莫西林杂质B与杂与D2， 杂质G与杂质E1， 以及杂质H与杂质F间的分离有较大影响，结果如图1所示。 图1不同温度下分离情况比较 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3；4.6 mm i.d.×250 mm 流动相：A：磷酸缓冲盐*、*EB：磷酸缓冲盐*/乙腈=80/20 25°CB% 0%(0min)→0%(10min)→100%(40min)→100%(45min)→0%(45.1min)→0%(55min)30°CB% 0%(0min)→0%(10min)→80%(40min)→80%(45min)→0%(45.1min)→0%(55min)35°CB% 0%(0min)→0%(10min)→70%(40min)→70%(45min)→0%(45.1min)→0%(55min) 流速：：11.0 mL/ min温检浓 度：25℃、30℃、35℃ 测： PDA254nm 度：客户提供 进样量： 20pL *注：磷酸缓冲盐：0.05mol/L磷酸二氢钾，用2mol/L 氢氧化钾调节pH为5.0 由图1，温度越高，杂质 D2保留时间越短，在35℃时杂质 D2与杂质A、杂质B得到了完全分离；杂质G和杂质E1 在35℃时亦得到良好分离；而杂质H与杂质F在35℃条件下反而重合在一起，无法分离。 经过多番考量，最终选择在柱温31℃条件下对梯度条件进行优化，得到图2结果，同时通过图3单标定位和客户参考谱图共同参考，标定杂质峰序(因有杂质出多个峰，指定仅供参考)。 Minutes 图2阿莫西林对照品及放大谱图 (图中显示数字为分离度) 图3阿莫西林对照品及单标谱图 表1阿莫西林对照品峰表 峰号-峰指认 保留时间 分离度 峰面积 理论塔板数 1-I 3.08 0 451249 10003 2-D1 10.2 34.88 112273 20389 3 11.94 5.20 17974 15647 4-D2 14.46 6.39 205235 20160 5-A 15.21 1.80 52406 20873 6-B 16.36 2.82 379545 27000 7-主峰 18.59 6.06 21885994 48787 8-G 26.88 29.7 332570 235751 9-E1 27.31 1.89 222767 221407 10 28.4 4.64 28367 224798 11 29.13 3.18 89210 286049 12-E2 30.68 7.30 116565 348282 13 32.74 7.66 23470 158794 14-C 33.37 2.29 467342 367317 15-E3 34.77 6.29 203291 378457 16 35.64 3.81 54564 37956 17-H 36.36 3.25 203291 483029 18-F 36.69 1.52 5088846 422063 19 37.26 2.83 73735 662998 20 38.11 4.71 41138 733298 21-J 38.56 2.53 437130 803430 22 38.9 1.62 77505 394215 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3； 4.6 mm i.d. ×250 mm 流动相：A：磷酸缓缓盐*B：磷酸缓冲盐*/乙腈=80：20 B%0%(0min)→0%(10min)→50%(30min)→100%(40min)→0%(40.1min)0% (50min)速：1.0 mL/ min 流温度：31℃检浓 测： PDA254nm 度：客户提供 进样量：20pL *注：磷酸缓冲盐：0.05mol/L 磷酸二氢氢，用2mol/L 氢氧化钾调节 pH 为5.0 综上所述，使用资生堂CAPCELL PAK C18 AQ S3； 4.6 mm i.d.×250 mm 色谱柱对阿莫西林对照品及其杂质进行分析，经过柱温和梯度条件调节基本可达到所有物质基线拆分。由于该体系样品成分复杂，在不同仪器系统上可能出现分离情况略有不同的现象，可根据实际分离进行条件微调，以得到更好分离结果。 阿莫西林及其杂质的液相分析 首先参考客户提供液相条件，对客户提供的阿莫西林样品进行分析尝试。由于梯度条件水相较高，故使用可在100%水相条件下稳定使用的资生堂高极性C18色谱柱CAPCELL PAK AQ；同时，为提高杂质间分离度，我们选择柱效更高的3μm粒径色谱柱进行实验条件的优化。实验中发现，柱温对阿莫西林杂质B与杂质D2，杂质G与杂质E1，以及杂质H与杂质F间的分离有较大影响，结果如图1所示。图1 不同温度下分离情况比较由图1，温度越高，杂质D2保留时间越短，在35℃时杂质D2与杂质A、杂质B得到了完全分离；杂质G和杂质E1在35℃时亦得到良好分离；而杂质H与杂质F在35℃条件下反而重合在一起，无法分离。经过多番考量，最终选择在柱温31℃条件下对梯度条件进行优化，得到图2结果，同时通过图3单标定位和客户参考谱图共同参考，标定杂质峰序（因有杂质出多个峰，指定仅供参考）。图2阿莫西林对照品及放大谱图（图中显示数字为分离度）图3 阿莫西林对照品及单标谱图表1 阿莫西林对照品峰表综上所述，使用资生堂CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱对阿莫西林对照品及其杂质进行分析，经过柱温和梯度条件调节基本可达到所有物质基线拆分。由于该体系样品成分复杂，在不同仪器系统上可能出现分离情况略有不同的现象，可根据实际分离进行条件微调，以得到更好分离结果。