葡萄糖、果糖、蔗糖、棉子糖等标准品中主要成分含量检测方案(液相色谱仪)

SHIMADZUAPPLICATION NEWS色谱分析NO.LC-004岛津国际贸易(上海)有限公司http：//www.shimadzu.com.cn岛津应用技术咨询电话(分析中心)北京(010)85252416/2417/2352上海(021)64156604 广州(020)87108613 前言 糖是自然界分布最广泛的有机化合物群之一，是生物的能源，具有非常重要的作用。糖主要分布在植物、食品中，是决定食品风味的最主要的成分之一，因此，糖类的分析具有非常重要的意义。目前，糖类分离的手段主要是采用液相色谱，检测手段主要为示差折光检测器。 糖的种类非常的庞大，从分子量来看，有从分子量仅为180的单糖到分子量为几百万的多糖，即使同样的单糖，还包含各种各样的不同糖类，如葡萄糖，氨基糖，山梨糖醇，糖醛酸等，而且它们还有多种异构体。因此，分析糖类有不同的分离方法和检测方法。多糖主要采用凝胶色谱法分离单糖和低聚糖主要采用分配色谱法和配位体交换色谱法。检测手段绝大部分为示差折光检测器。本实验采用了比较便宜的分离柱氨基柱Asahipak NH2-50 4E为分离手段，并研究了该方法的稳定性。 HPLC分析条件 仪器： LC-VP系统 包括脱气机 DGU14A；泵LC-10ADvp)((1台)； 自动进样器SIL-HTC；高压混合器；柱温箱CTO-10Avp；示差折光检测器 RID-10A 分析柱： Asahipak NH2-50 4E(内径4.6mm×长250mm)保护柱： Asahipak NH2-50G 4A(内径4.6mm×长10mm) 流动相： 乙晴：水(7：3) 流量： 0.8mL/min 柱温： 40℃ RID池温： 40℃ 检测时间： 15min 进样体积： 10L 标样： 葡萄糖，果糖，蔗糖，棉子糖 标样配制： 将葡萄糖，果糖，蔗糖，棉子糖标样溶解于水中，配制成25mg/mL、20mg/mL、15mg/mL、10mg/mL和5mg/mL的混标液。各进样10cL，各重复2次。分别制作各组分的标准曲线。并计算各组分的相关系数和最低检出限。结果见表1。 精密度试验： 取15mg/mL的混标样，进样10。，连续测定6次，色谱图如图1。各组分保留时间和面积的相对标准偏差见表2。 实际样品分析： 称取样品大枣提取液50mg，溶解于1mL水中，0.45om膜过滤后，进样10cL，重复3次。色谱图见图2。 结果讨论： 实验可以看出，该方法的稳定性良好，对实际样品进行检测也得到了很好的结果。 图1糖标准样品的色谱 图2实际样品色谱图 表1糖标准样品线性及最低检出限 组分名称 回归方程 相关系数 最低检测限LOD(mg/mL) 果糖 Y=1.46×104X-0.035 0.9997 0.18 葡萄糖 Y=1.89×10-X-0.14 0.99996 0.57 蔗糖 Y=1.946×104X-0.26 0.99991 0.03 棉子糖 Y=0.31×104X+0.12 0.99997 0.14 表2精密度实验结果 重复性 果糖 葡萄糖 蔗糖 棉子糖 保留时间 1 5.804 6.875 8.299 12.035 2 5.797 6.878 8.296 12.014 3 5.785 6.859 8.280 12.026 4 5.772 6.848 8.272 12.026 5 5.862 6.933 8.267 11.943 6 5.862 6.874 8.283 12.067 平均 5.813 6.876 8.283 12.014 RSD/% 0.668 0.429 0.152 0.314 面积 1 869505 801027 918445 747302 2 887332 829150 935894 772964 3 870326 812294 921689 756541 4 880015 809956 919942 770132 5 875419 814235 932021 759981 6 869991 802516 923510 760213 平均 875431 811529 925250 761189 RSD/% 1.44 2.44 1.33 2.39