达替肝素钠中硫酸根检测方案(离子色谱仪)

400 6505118(支持手机用户) Ion chromatography； conductivity； lonPac AS11； Dalteparin sodium； sulfate 引言 低分子肝素(low-molecular-weight heparin，LMWH)是近年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物，其抗血栓作用优于肝素，而抗凝血作用低于肝素，且具有皮下注射吸收良好、生物利用度高、体内半衰期长、出血倾向小等优点，目前已广泛应用于临床。根据LMWH的来源、生产工艺、末端结构的不同， LMWH 分为许多不同的种类，如达替肝素钠、依诺肝素钠、那曲肝素钙、帕米肝素钠、汀肝素钠等。达替肝素钠 (Dalteparin Sodium)是低分子肝素的一种，由亚硝酸降解肝素得到，重均分子量5600~6400，峰位分子量6000，硫酸化程度为2.0~2.5/双糖单位。 本实验使用高效阴离子交换色谱法测定游离硫酸根含量，灵敏度高、选择性好、快速。 仪器： ICS 1500； 分析柱： lonPac AS11， 250×4mm； 保护柱： lonPac AG11， 50×4mm； 柱温：30℃C； 淋洗液：3.0mmol/L碳酸钠溶液； 流速：1.50mL/min； 定量环：25pL 抑制器： ASRS300 4mm， 自循环模式，电流为23mA检测方式：抑制型电导 样品前处理 精密称取达替肝素钠20mg，加水溶解并稀释至10mL，过0.22um滤膜。 结果和讨论 样品浓度的选择 达替肝素钠为多糖，在实验条件下保留在色谱柱上，不能被洗脱。样品浓度为2mg/mL时，连续进样10次，硫酸根保留时间可提前0.3min。为提高实验的稳定性，延长色谱柱使用时间，可在满足定量限的前提下，适当降低达替肝素钠的浓度。 色谱柱的选择及淋洗液梯度条件优化 样品中尽含有氯离子和硫酸根离子，非常易于分离。本实验选用lonPac AS11色谱柱、3.0mmol/L碳酸钠溶液作为淋洗液，操作简单。 图1.样品分离谱图 重现性、线性和灵敏度 取达替肝素钠样品，平行处理六份，在选定的色谱条件下进行分离分析，硫酸根的重现性较好，峰面积、保留时间、峰高的相对标准偏差(RSD)均低于5%。选择一个样品重复六次进样，硫酸根的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差(RSD)均低于5%，其结果见表1。 表1.达替肝素钠样品中硫酸根的重现性结果 项目 RSD(%) 保留时间 峰面积 峰高 平行处理10份重现性 0.1 3.1 3.0 7次进样重复性 0.1 1.3 2.5 在选定色谱条件下配制适宜浓度范围的离子标准曲线，硫酸根在0.1~40mg/L范围内具有良好的线性关系，其线性相关系数r=0.9995。在本实验条件下，基线噪音约为1.0nS，根据三倍基线噪音计算出方法对硫酸根的定量限为31.7ug/L，折合样品中硫酸根含量0.00015% 实际样品分析及加标回收 取达替肝素钠样品测定并进行加标实验，硫酸根的加标回收率依次在99~102%之间。样品检测结果见表2。 表2.实际样品检测结果及其加标回收率 样品检测 加标量 加标后检测 回收率 结果* 结果* mg/L % mg/L mg/L 1 2.9752 102.2% 1.9536 5 6.9181 99.3% 10 12.1205 101.7% 结论 采用本方法可以方便、快捷、准确检测达替肝素钠中的硫酸盐，操作较为简单，方法重现性较好，结果可靠。本实验所使用的色谱柱AS11同时可用于肝素钠其它检测项目如多硫酸软骨素等项目的检测。 ( 参考文献 ) ( [1] L I Jing( 李 京 ) ， FAN Hui-hong( 范慧红)， XU Kang-sen(徐康森). St u dy on the current statusand the quality standard of low -molecular- weight heparin( 低分子肝素药用现状及质量标准 概况). C hin J Biochem Pharm (中国生化药物杂志)， 2 004，2 ) 免费服务热线：800810 5118