饮料中着色剂检测方案

LC-5500 高效液相色谱仪检测合成着色剂 北京东西分析仪器有限公司 摘要：本文根据 GB-T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》建立了利用我公司高效液相色谱 LC-5500测定五种合成着色剂(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝)的方法：色谱柱：XBP-CI8柱；流动相：甲醇-乙酰胺溶液；流速： 1.0mL/min梯度洗脱；进样量：20pL；紫外检测器，波长254nm。五种着色剂在4.0 pg/mL 到12.0pg/mL之间线性良好，精密度高，重复性好。该方法适用于测定五种合成着色剂的常规检测。 关键词：LC-5500高效液相色谱；着色剂；饮料 人工合成色素作为食品添加剂被广泛用于食品生产加工，它可以增加食品的感官美和提高人们的食欲。我国准许使用的人工合成色素有11种，最常见的有柠檬黄、 苋菜红、 胭脂红、日落黄、靛蓝1等。过量使人工合成色素会对人体产生有害作用，因而我国国标GB2760-2007《食品添加剂使用卫生标准》中规定了人工合成色素的使用限量。目前人工色素的检测方法有薄层色谱法、示波极谱法、 高效液液色谱法[2]等。本文根据 GB/T5009 .35-2003中的高效液相色谱法对饮料中的五种人工合成色素：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝进行分析。 1实验部分 1.1 仪器及试剂 1.1.1试剂 1.1.1.1甲醇(色谱纯) 1.1.1.2乙酸(沐析纯) 1.1.1.3乙酸铵(0.02mol/L)：称取乙酸铵 1.54g，加水溶解至1000mL，用溶剂过滤器过滤后 1.1.1.4聚酰胺粉(尼龙6)：过200目筛； 1.1.1.5氨水溶液：量取2mL氨水，加水至100mL，混匀； 1.1.1.6氨水-乙酸铵溶液(0.02mol/L)：量取氨水 0.5mL。加乙酸铵溶液(0.02mol/L)至1000mL， 混匀。 1.1.1.7甲醇-甲酸溶液：体积比6：4 ； 1.1.1.8无水乙醇-氨水-水溶液：体积比7：2：1； 1.1.1.9五种合成着色剂(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝)标准系列混合溶液：分别称取五种合成着色剂，用水溶解，再配成浓度为4、6、8、10、12pg/mL的混合标准溶液。 1.1.2仪器 LC5500 高效液相色谱仪(具紫外可见剑测器、单泵、柱恒温箱、脱气机等)； 溶剂过滤器； G3砂芯漏斗； 0.45um 滤膜。 1.2 仪器条件 色谱柱：C18柱(粒径5um， 250 mmx4.6mm) 流动相：甲醇、乙酸铵溶液(PH=4， 0.02mol/L) 流速：1.0mL/min。 检测波长：254nm。 进样量：20pL。 梯度洗脱表 时间(min) 0 5 12 18 甲醇(%) 20 35 98 98 1.3 样品处理过程 称取样品20.0g~40.0g，放入100mL烧杯中，(如样品为碳酸饮料，须先除去CO2)，然后加柠檬酸溶液调 pH值到6后，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃pH=4的水洗涤3次~5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次~5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次~5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经0.45pm滤膜滤滤， 取20pL进高效液相色谱仪。 2结果与讨论 2.1 标准曲线的绘制 将五种合成着色剂混合标准溶液注入液相色谱仪中，得到色谱图，如图1所示。以峰面积积纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，如图2、3、4、5、6所示. 图1五种合成着色剂混合标准溶液色谱图 Tel：010-88393500 [浓度(Ⅱg/ml)] 图2柠檬黄标准曲线 [浓度(ug/ml)] 图3苋菜红标准曲线 图4胭脂红标准曲线 北京东西分析仪器有限公司 [浓度(Hg/ml)] 图5日落黄标准曲线 图6亮蓝标准曲线 2.2 样品分析及结果 将试样待测液进行色谱测定。记录组分色谱峰面积，根据标准曲线计算出试样待测液中五种人工合成着色剂的浓度。 3结论 实验表明，根据 GB/T5009.35-2003中提供的高效液相色谱法测定五种人工合成着色剂(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝)，分离度良好，线性良好，精密度高，重复性好。该方法操作简便适用于测定五种合成着色剂的常规检测。 参考文献及标准： ( East & W est Analytical Instruments， Inc.Building A2， 6th F loor， No. 5 Plaza，#9 Che Gong Z huang S t，Western District， Beijing， China， 100044 ) ( [1 ] 聂静，齐兴娟.食用合成色素研究动态[]].中国卫生检验杂志， 2002，14(1)： 58-60. ) ( [2]吴玉萍，高广智，袁静.高效液相色谱法测定食品中的着色剂[]].中国公共卫生，2003， 19(5)： 602. ) ( East & W est Analytical Instruments， Inc.Building A2， 6th F loor， No. 5 Plaza，#9 Che Gong Z huang S t，Western District， Beijing， China， 100044 ) ( T el ： 010-88393500 ) East & West Analytical Instruments， Inc.Building A， th Floor， No. Plaza，# Che Gong Zhuang St，Western District， Beijing， China， 京东西分析仪器有限公司Tel：ax： eb： www.ewai-group.comMicroblog： e.weibo.com/dongxifenxi北京市西城区车公庄大街号 East & West Analytical Instruments， Inc.Building A， th Floor， No. Plaza，# Che Gong Zhuang St，Western District， Beijing， China， 京东西分析仪器有限公司Tel： ax： eb： www.ewai-group.comMicroblog： e.weibo.com/dongxifenxi北京市西城区车公庄大街号