乳制品中三聚氰胺、双氰胺检测方案

[应用纪要]THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE.双氰胺线性范围0.5ppb~50ppb Waters 同时检测乳品中双氰胺和三聚氰胺的沃特世解决方案 丁娟娟纪英华赵嘉胤庄淑萁 沃特世科技(上海)有限公司 摘要：2008年，三鹿奶粉被爆检出对人体有害的三聚氰胺，一时间震惊全国。自此，国家一直在加强对奶粉中三聚氰胺的监管。2013年初，新西兰牛奶及奶制品被检测出含有低含量的有毒物质双氰胺，新西兰政府已经下令禁售含有双氰氨的奶类产品。 沃特世 (Waters)公司一直致力于保障人类的健康生活，第一时间开发了奶粉中双氰胺和三聚氰胺同时检测的方法，以提高检测分析的有效性。 二氰二氨(双氰胺)， 缩写DICY或DCD。是氰胺的二聚体，也是胍的氰基衍生物。化学式C，HN4。白色结晶粉末.可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，几乎不溶于醚和苯。 NH， N 分析难点： 对于同时分析奶粉中双氰胺和三聚氰胺，其主要难点在于虽然两者均为极性物质，都需要使用HILIC色谱分离模式，但根据之前的经验，三聚氰胺在BEH HILIC色谱柱上保留和峰形较好，而双氰胺在BEH Amide色谱柱上保留和峰形较佳。因此需要建立一个统一的LCMSMS方法用于分析双氰胺和三聚氰胺，并获得更好的峰形和灵敏度。 另一方面，传统的三聚氰胺方法是采用OasisMCX这种反相和阳离子交换的复合SPE模式，然而这种方法完全不适用于双氰胺；而Sep-Pak~AC2小柱虽然可以用于双氰胺的净化和富集，但仍需开发一个更为快速的前处理方法。 三聚氰胺，俗称密胺、蛋白精，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。微溶于水，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚 H2N NH， 类，对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物。 实验方法： 仪器： Waters ACQUITY UPLC with XevoTQ-S 色谱柱： ACQUITY BEH Amide column， 1.7pum，2.1*150mm 流动相A：5mM甲酸铵0.1%甲酸水溶液 流动相B：乙腈 流充：0.4mL/min 柱温：35℃ 进样体积：5pL 梯度曲线： 流动相A 流动相B 曲线 0 min 3 97 2 min 3 97 6 3.2 min 20 80 6 4.2 min 30 70 6 4.5 min 3 97 6 7min 3 97 6 质谱参数： 毛细管电压： 2.5kv 脱溶剂气温度：500度 脱溶剂气流速：800L/Hr 碰撞气流速： 0.15mL/min 双氰胺 ESI+ 85>43 0.25 20 25 85>68 0.25 12 25 三聚氰胺 ESI+ 127>68 0.25 25 40 127>85 0.25 17 40 样品前处理方法： 为达到快速、高效的检测目的，本实验采用Waters DisQuE样品制备试剂盒。 Waters DisQuE样品制备流程如下： 本实验在未添加同位素内标的情况下，空白基质添加1ppb样品浓度，测得双氰胺平均回收率为83%，三聚氰胺平均回收率为71%。 实验结果： 基质加标1ppb时双氰胺信噪比 (S/N) 基质加标1ppb时三聚氰胺信噪比 (S/N) 图Calibration： 01 Mar 2013 18：07：25 三聚氰胺线性范围0.1ppb~10ppb 结论： 本文采用沃特世超高效液相色谱UPLC与高灵敏度三重四极杆Xevo TQ-S， 开发了同时分析奶粉中双氰胺和三聚氰胺的检测方法，此方法建立在HILIC机理的BEH Amide色谱柱上。对于基质中添加1ppb的待测物，经过DisQuE基质分散样品制备盒净化后进样，不但峰形良好、不受基质干扰影响，灵敏度也完全满足检测要求。 为了达到快速、高效的分析目的，本文采用DisQuE基质分散样品制备盒，样品经简单的蛋白沉淀后加入到DisQuE试剂盒中净化，之后直接进样即可，无需挥干复溶。方法简单、快速，尤其对于大批量样品的检测，该方法可以大大提高分析效率。 在LCMSMS方法开发中，杂化颗粒的HILIC模式色谱柱起到了很大作用，首先两种待测物均为极性化合物，反相色谱 无法保留， HILIC提供了一个互补的选择。其次在众多HILIC模式色谱柱中， BEH Amide色谱柱为杂化颗粒技术， pH耐受范围广 (pH 1-10)，为方法开发提供了更大的空间，且BEH Amide在此应用中具有更好的选择性和峰形。 订购信息： 方法包 订货号 描述 乳品中双氰胺和三聚氰胺UPLC分析方法包，包括： 186004802 BEH Amide，1.7um， 2.1x150mm 186004830 DisQuE 2mL基质分散净化管 乳品中双氰胺和三聚氰胺HPLC分析方法包，包括： 186006724 XBridge Amide XP，2.5um， 2.1x150mm 186004830 DisQuE 2mL基质分散净化管 过滤膜和样品瓶： WAT097962 GHP过滤膜 186000307C LCMS 认证样品瓶 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 2013年沃特世公司。印制于中国。2013年03月 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-6156 2666 广州：020-2829 6555 成都：028-65545999 香港：852-29641800 ( 免费售后服务热线：800(400)8202676 WWW.waters.com )