中药中有效成分含量分析检测方案

Shanghai Nano Instrument Co.，Ltd. 高效液相色谱法测定骨康口服液中补骨脂素和异补骨脂素的含量 【摘要】 目的 建立骨康口服液中有效成分的含量测定方法。 方法 采用 HPLC 法测定骨康口服液中有效成分含量。 结果 补骨脂素和异补骨脂素两种成分均达到良好分离，在测定范围内线性良好，回收率均在99%~101%之间。结论所建立的定量方法简便可行、重复性好，可作为骨康口服液的质量监控。 【关键词】 骨康口服液补骨脂素异补骨脂素高效液相色谱法 Abstract： Objective To establish a method of HPLC for determining psoralen andisopsoralen in Gukang Oral Liquid. MethodsThe effective components in GukangOral Liquid were determined by HPLC. ResultsThe resolution and the linearity werefine with the rate of recovery of psoralen 99.96%，RSD=1.16%； the recovery rate ofisopsoralen was 100.09%，RSD=0.60%.ConclusionThe quantitative method fordetermining the ingredients of Gukang Oral Liquid is simple， feasible and repeatable，and can be used for quality control of Gukang Oral Liquid. Key words：Gukang Oral Liquid； Psoralen： Isopsoralen； HPLC 骨康口服液由补骨脂、淫羊藿、肉苁蓉、白芍、黄芪等10味药材组成，具有补肾壮骨，活血通络，健脾益气的功效， 临床上主要用于治疗妇女更年期引起的骨质疏松症。骨康口服液复方共煎，有利于补骨脂素与异补骨脂素的煎出1，2]，故采用水提醇沉工艺制备31。鉴于补骨脂素、异补骨脂素可相互转化4，21，原标准采用 TLCS 法测定补骨脂素、异补骨脂素两者的总量51.。但TLCS法变异大，故选用 HPLC 法同时测定骨康口服液中补骨脂素与异补骨脂素的含量。现将研究结果报道如下： 1仪器与试药 DIONEX SUMMIT 高效液相色谱仪 (PDA-100 检测器、STH585柱温箱、P680 HPLC泵、ASI-100 自动进样器)，Chromeleon 色谱工作站；补骨脂素(供含量测定用，110739-200309)、异补骨脂素(供含量测定用，110738-200410)，均由中国药品生物制品检定所提供；骨康口服液(批号：20061009，20061012，20061015)，由广州中医药大学新药开发研究中心提供；乙腈为色谱纯(Merck， 1192230)其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱： Phenomenex luna C18柱(250 mmx4.60 mm， 5pm)；流动相：以乙腈为流动相A， 以0.1%冰醋酸为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长：246 nm；流速：1.0 ml·min-1；柱温：25℃；进样量：10ul；理论塔板数均不低于3000。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，分别置 25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，以此作为对照品贮备液。精密吸取上述各对照品贮备液适量，加甲醇制成每毫升含补骨脂素35 pg， 异补骨脂素44 pg的混合溶液，摇匀即得。 2.2.2供试品溶液的制备 取本品10支，混匀，精密吸取药液10ml，加乙醚提取4次，10ml/次，分取乙醚层，60℃挥干乙醚，用甲醇溶解残渣，并转移至5ml容量瓶中，用甲醇加至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。 2.2.3 阴性对照溶液的制备 取处方中除补骨脂外的其余成分制成缺补骨脂阴性对照品，按2.2.2项下的供试品制备方法处理得缺补骨脂阴性对照液。 2.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10，14ul进行色谱测定，按上述色谱条件测定基线构成之面积称峰面积。A=xoxh=2.507oh=1.064 Wh/2h>峰面积，并以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归，补骨脂素在 70~490 ng 范围内呈良好线性关系，异补骨脂素在88~616ng范围达呈良好线性关系，回归方程分别为：补骨脂素：：Y=8224.5X-48.1326， r=0.999 9；异补骨脂素：：YY=7 371.7X-52.475 2， r=0.999 9. 2.4 精密度实验 精密吸取上述补骨脂素和异补骨脂素对照品溶液 10 pl连续进样5次，测得峰面积积分平均值补骨脂素为3211.929， RSD 为 0.07%；异补骨脂素为3676.707， RSD 为 0.16%，表明分析方法精密度良好。 2.5重复性实验 按照拟定的含量测定方法，对同一批样品(批号：20061009)制备供试品溶液，平行操作6份，结果测得补骨脂素平均含量为 0.075 mg.g-1， RSD为2.39%；异补骨脂素平均含量为 0.072 mg'g-1， RSD 为 2.54%，表明本测定方法具有较好的重复性。 2.6 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液10 ul， 在0，2，4，8，12h分别进样，记录峰面积并计算 RSD，结果：：补骨脂素平均峰面积为1330.393， RSD 为0.46%；异补骨脂素平均峰面积为1056.411， RSD为1.6%，表明样品中补骨脂素和异补骨脂素在12h 内稳定。 2.77专属性实验 取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液，按本色谱条件各进样10pl。结果见图1。结果显示，在本色谱条件下，阴性对照无干扰。 2.8 加样回收率实验 精密吸取已知含量的同一批样品(20061009)10ml，分别精密加入一定量的补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，按供试品溶液制备方法制备并测定，按公式回收率(P)(%)=(测得量-加入量)/样品量×100%计算回收率。结果见表2。表明本方法具有良好的回收率。表1 骨 康口服液中补骨脂素、异补骨脂素的 HPLC测定梯度洗脱条件(略)表2.加样回收率实验结果(略)表3样品中补骨脂素、异补骨脂素含量测定结果(略) 2.9 样品测定 取骨康口服液3批，照上述方法处理后测定，记录峰面积，代入回归方程计算样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量。结果见表3. 3讨论 3.1 提取溶媒的选择 本品处方由多味中药组成，且由水煎煮浓缩制得，活性成分多，极性强，影响鉴别的干扰因素较多。笔者曾用水直接稀释样品进样分析，结果杂质峰较多，分离效果差。考虑到补骨脂素与异补骨脂素为呋喃香豆素类成分，因此采用乙醚提取。实验结果表明，该法可使样品中的补骨脂素与异补骨脂素提取完全。 3.2流动相的选择 目前《中国药典》2005年版和文献报道中 HPLC 法测定补骨脂素与异补骨脂素大多采用甲醇-水体系[6~9]，但经过实验发现，这些体系均不适用于该制剂的分析，本文选用乙腈-0.1%醋酸溶液梯度洗脱，可以同时测定补骨脂素与异补骨脂素的含量，且获得较好的分离效果，且峰形更佳。本法操作简便，精密度高，，1重现性好，是控制骨康口服液内在质量的有效方法。 ( 【 参考文献 】 ) [1]苏子仁，刘庆思，徐必达，等.方药配伍对温补肾阳方君药补骨脂素、异补骨脂素煎出的影响[J].中国实验方剂学杂志，1996，2(5)：8. [2]苏子仁，徐必达，刘庆思，等.磷脂对骨康方补骨脂素、异补骨脂素煎出增溶作用探讨[J].中国实验方剂学杂志，1997，3(3)：5. ( [3 ] 吴雪茹，苏子仁，施佳平，等 . 骨康口服液工艺优化研究[J].中成 药， 1999， 21(5) ： 218. ) [4]苏子仁，徐必达，刘庆思.补骨脂素、异补骨脂素在骨康提取精制过程中化学转化的研究[J].中国实验方剂学杂志，1997，3(6)：1. [5]曾惠芳，苏子仁，刘庆思.骨康口服液中补骨脂素，异补骨脂素的含量测定[J].中药新药与临床药理， 1999，10(4)：237. ( [6] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部 [ S ]. 北 京：化学工业出版社，2005：1 29 ， 2 2 9，577. ) ( [7]陆蓓，吴韶铭.HPLC法测定益肾灵颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量[J ] .中国药 品标准，2002 ， 3(4) ： 2 3. ) ( [8]王锦红，孙传梅.高效液相色谱法测定长寿长乐补酒中补骨脂素和异补骨脂素含量[ J ] 中国药业，2 006，15 ( 11) ：42 . ) ( [9]李学松，范兴东.补肾益脑胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定[J].中成 药， 2 0 0 6 ， 2 8 ( 6 )：81 0. ) 纳诺仪器 田岛津 nano instrument Shanghai Nano Instrument Co.，Ltd.SHIMAOZU上海纳诺仪器有限公司 日本岛津苏州产品上海地区总代理上海市闵行区莲花南路 1388弄8号碧恒广场1503-504 室电话：Tel： 0086-21-61131051；61131031传真： Fax： 0086-21-61131052电子邮件：Mail： info@nano-instru.com 网 址：：Website： http：//nanoinstru.instrument.com.cn 提供日本岛津产品主机销售、售后服务、配件销售 常规分析的理想选择-气相色谱质谱联用仪 GCMS-OP2010SE 性价比最高进口品牌原子吸收分光光度-----AA-6300C 常规分析的首选气象色谱-性价比之佼佼者----GC-2014C The best solutions for research， development and application. LC；LCMS； GC； GCMS； TOC； UV； IR； RF；AA； ICP； TA； SALD； 三= www.nanoinstru.com