通过EV研究揭示甲肝病毒的作用机制

甲肝病毒（HAV）是一种经典的非包膜病毒，却主要以准包膜的形式（eHAV）作用于宿主细胞，并且在eHAV的衣壳表面还有一种病毒蛋白pX。为了探究病毒蛋白pX在甲肝病毒作用于宿主细胞过程中的功能，研究人员建立一种简化模型，将病毒蛋白pX融合表达到eGFP的C端，获得eGFPpX。免疫共沉淀（co-IP）实验已经证实病毒蛋白pX与凋亡相关蛋白ALIX之间存在相互作用关系。研究人员借助ZetaView，先在散射光模式下，检测人肝癌细胞Huh7-eGFP和Huh7-eGFPpX来源的2种EVs，发现2种EVs的粒径分布曲线基本一致（如下图右），peak在100nm附近，这说明病毒蛋白pX融合与否，并未影响EV的产生；然后研究人员在荧光模式下继续检测2种不同来源的EVs，结果发现荧光模式下仅能检测到Huh7-eGFPpX来源的EV，检测不到Huh7-eGFP来源的EV，这说明病毒蛋白pX直接决定了eGFPpX与ALIX的结合。随后研究人员又通过截短、敲除等方式，进一步发现pX蛋白C端部分和ALIX的改变都会直接导致两者无法结合。研究人员通过这一系列严谨的实验设计，证明了病毒蛋白pX在甲肝病毒（HAV）作用于宿主细胞时起到了必不可少的作用，同时也展示了ZetaView如何在用户巧妙的实验设计下帮助用户挖掘重要的数据信息。Wang Jiang, Pengjuan Ma, Libin Deng, Zhi Liu, Xu Wang, Xiyu Liu & Gang Long (2020) Hepatitis A virus structural protein pX interacts with ALIX and promotes the secretion of virions and foreign proteins through exosome-like vesicles, Journal of Extracellular Vesicles, 9:1,1716513