LCMS-9050快速筛查保健品中非法添加物

本文利用岛津公司LCMS-9050超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱联用仪，结合《保健品非法添加二级质谱库》快速对7个保健品样品中非法添加物进行筛查。结果显示：7个保健品样本中定性出13种非法添加物，所有定性出的化合物的二级碎片与质谱库匹配良好。通过7个保健品样本的测试验证，该方案可以实现一针进样，快速完成目标物的定性筛查，判定保健品中可能的非法添加物，具有一定的实际应用价值，供相关人员参考。SSL-CA23-239 Excellence in ScienceLCMS-QTOF-060 LCMS-9050 快速筛查保健品中非法添加物 LCMS-QTOF-060 摘要：本文利用岛津超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱仪，结合《保健品非法添加 QTOF 质谱库》建立了一种对保健品中非法添加物质的快速筛查方法。对7个样本中的非法添加物质进行定性分析，其结果显 示：在7个样本中共筛查出13种添加化合物，二级碎片与数据库匹配度高。使用该方法，可通过一针进样，快速完成目标物的定性筛查，结果准确可靠。 关键词：四极杆飞行时间串联质谱仪保健品 非法添加 技术特点： 心利用《保健品非法添加 QTOF 质谱库》可实现保健品中非法添加物的快速定性 必 Insight Explore 具有多样品批量搜库的功能，提高筛查效率。 随着社会的发展，越来越多的人关注保健，在生 活中也常服用保健品。为了追求利益，部分不法生产 者会在一些保健食品中非法添加各种药物以达到宣传 的效果，吸引消费者长期购买。然而长期食用这种食 品，可能会给消费者造成严重的身体健康问题。 对于保健品中非法添加物的检测一直是相关部门 重点关注的领域。但是，由于保健品的种类繁多，需 要针对每一类的保健品收集所需的标准品后才能建立 对应的检测方法，工作量大且效率低。因此，非常需 要一种灵敏、高效的检测方法能够快速对多种类的样 品以及非法添加物进行检测。 本文使用岛津LCMS-9050 超高效液相色谱-四 极杆飞行时间串联质谱仪，建立了一种对保健品中非 法添加物快速定性的分析方法。对7个样品进行了分 析， 可快速筛查出样品中的非法添加成分，该方法准 确可靠，可为保健品的检测提供帮助。 实验部分 1.1仪器 岛津 LCMS-9050 超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱联用仪，具体配置为： 柱 温 箱：：(CTO-40S 输 液 泵LC-40B X3×2系统控制器：CBM-40自动进样器：SIL-40C飞行时间质谱仪： LCMS-9050在线脱气机：DGU-405 色谱工作站：：LabSolutions Ver. 5.118； LabSolutions Insight Ver.4.0SP2 1.2分析条件 液相色谱条件 色 谱 柱：：GIST-HP_C18-AQ (150 mm×2.1 mm.， 1.9 um(岛津((上海)实验器材有限公司， P/N： 227-30807-03) 流 动 相目： A相-5mM乙酸铵(0.1%甲酸) B相-乙腈 流 速束： 0.3 mL/min 进样体积： lpL 柱 温 40℃ 洗脱方式： 梯度洗脱，B相初始浓度为15%，洗脱程序见表1。 表1梯度洗脱时间程序 Time (min) Module Command Value 0.50 泵 B.Conc 15 9.50 泵 B.Conc 75 20.00 泵 B.Conc 95 30.00 泵 B.Conc 95 30.10 泵 B.Conc 15 30.00 控制器 Stop 质谱条件 离 子 源：ESI(+/-) 加热模块温度： 400°C雾化气流速-3.0 L/min - L 温 度： 250°℃加热气流速：--10.0L/min 儿接口温度： 300℃-- 干燥气流速： 10.0 L/min 扫描模式：MS Scan(m/z 100-1000)， DDA MS/MS (m/z 100-1000) 1.4样品前处理 1.4.1提取溶液配制 分别配置以下3种提取溶液各500mL。 提取溶液1：乙腈：甲醇：10mM 乙酸铵=10：55：35 提取溶液2：乙腈：甲醇：10mM乙酸铵(含0.1%甲酸)：=10： 55：35 提取溶液3：乙腈：甲醇：0.2%三乙胺水溶液=40：30：30 1.4.2样品溶液配制 取样品研细，称取0.3 g， 置于50mL容量瓶中，分别加入上述提取液适量，超声10 min 使其溶解，放置 冷却至室温，加提取液稀释至刻度，摇匀。放置过夜，取上清液适量，高速离心(10000 r/min)，精密吸取上 清液1mL， 至于进样小瓶中；每种样品分别用上述三种提取液提取。 结果与讨论 分别使用 DDA(+/-) 模式对每个样品经过三种不同提取后的溶液进行采集，结合《保健品非法添加二级质谱 库》，使用 Insight Explore 软件的批量搜库功能，对每个样品中的非法添加进行快速筛查。数据处理步骤如下： 2.1导入化合物信息 将 DDA 数据导入 Insight Explore 软件，在““Edit Method”项下的“Compounds”列表中添加需要筛查的 非法添加物的名称以及m/z信息。 图1 Insight Explore 软件截图 2.2导入保健品二级质谱库 在“Edit Method”项下的“(MSn)Library”中添加《保健品非法添加二级质谱库》。如图2所示，添加了 保健品中非法添加物的二级数据库，同时设置了搜索相同的前体离子等条件。 图2 Insight Explore 软件截图 2.3编辑“Flags” 在 “Edit Flags”项下编辑结果判定的依据。如图3所示，本文中添加了两个判定依据，分别是“Lib Compound Name”和“Min. Library Similarity Index”，对于不满足其中任一条件的结果，会有“小旗”图标显示。 图3 Insight Explore 软件截图 2.4批量搜库及结果说明 对导入的数据使用“Search Library”。如图4所示，批量对导入的三个数据进行搜索。 图4 Insight Explore 软件截图 搜索结果如下图5所示，化合物列表中的名称“吡唑N-去甲基西地那非”二级碎片与数据库中质谱图匹配 良好，匹配度大于70， 故“Lib. SI”没有蓝色填充，但是名称与通过二级碎片比对得到的化合物名称不对，故 在名称那一栏显示了红色，“Flag ID”显示了 Name；“西地那非N-氧化物”二级碎片与数据库中质谱图匹配 良好，匹配度大于70，且与数据库中名称一致，故没有 Flag 显示。 图5 Insight Explore 软件截图 2.5样品结果 利用上述方式进行批量搜库，7个样本的结果汇总如下表所示。 表213种化合物在7个样品中的检出结果(面积值) 序号 化合物名称 样品1 样品2 样品3 样品4 样品5 样品6 样品7 1 西地那非 2769373 2714488 2717451 3384771 8664063 8483894 19569747 2 他达拉非 1921641 1767011 2562125 1450922 N.D. N.D. 1392645 3 脱硫伐地那非 13431 12999 31523 ND 789323 765683 15615 4 N-去乙基伐地那非 189833 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. 5 N-去甲基西地那非 515718 438505 364713 355004 N.D. N.D. 417011 6 吡唑N- 去甲基西地那非 63472 58470 54230 98954 1417040 1342914 76381 7 异丁基西地那非 84509 77690 152554 116668 2711682 2596266 96092 8 西地那非N-氧化物 3089885 2948318 2977523 2316950 54638 77938 2534576 9 双去碳西地那非 25523 23882 25478 95905 219525 227367 26553 10 对乙酰氨基酚 N.D. N.D. N.D. 73844 N.D. N.D. N.D. 11 羟基豪莫西地那非 N.D. N.D. N.D. 19930 N.D. N.D. N.D. 12 去甲基哌嗪基西地那非磺酸 N.D. N.D. N.D. 14699 50303 49254 N.D. 13 氨基西地那非 N.D. N.D. N.D. N.D. 15201 15492 N.D. 注： “N.D.”表示未检出。 结论 本文利用岛津公司 LCMS-9050 超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱联用仪，结合《保健品非法添加二级质 谱库》快速对7个保健品样品中非法添加物进行筛查。结果显示：7个保健品样本中定性壮13种非法添加物，所有定性出的化合物的二级碎片与质谱库匹配良好。通过7个保健品样本的测试验证，该方案可以实现一针进样，快速完成目标物的定性筛查，判定保健品中可能的非法添加物，具有一定的实际应用价值，供相关人员参考。 岛津应用云