高油脂中药木香的33种农残测定分析

木香为菊科植物木香的干燥根，含大量油脂类成分。这些成分对GC/MS/MS色谱柱污染较为严重，易造成目标保留时间漂移和丢峰，常规的固相萃取法一、固相萃取法二、固相萃取法三都不能很好的净化。因此纳谱分析根据木香油脂成分特点，在优化填料的同时优化了木香的提取方式。优化后的方案可以有效地减轻木香GC/MS/MS分析中存在的问题，降低了样品中油脂成分对色谱柱的污染和基质效应。今天，我们来看看木香项目的前处理效果吧。适用范围本方法参考中国药典2020版2341第五法中的快速样品处理法（QuEChERS）法。实验讨论通过以上实验对比数据可以看出，上述方案搭配SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管净化后的木香样品溶液颜色较浅，且各化合物出峰较为良好，目标物保留时间漂移也得到了有效减弱，减少了污染GC/MS/MS柱前端的风险。SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管针对木香中油脂类成分去除效果良好，联合上述解决办法有效地提高了实验效率，也为木香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。高油脂中药木香的33种农残测定分析 背景 木香为菊科植物木香的干燥根，含大量油脂类成分。这些成分对 GC/MS/MS 色谱柱污染较为严重，易造成目标保留时间漂移和丢峰，常规的固相萃取法一、固相萃取法二、固相萃取法三都不能很好的净化。因此纳谱分析根据木香油脂成分特点，在优化填料的同时优化了木香的提取方式。优化后的方案可以有效地减轻木香 GC/MS/MS分析中存在的问题，降低了样品中油脂成分对色谱柱的污染和基质效应。 今天，我们来看看木香项目的前处理效果吧。 木香 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的快速样品处理法 (QuEChERS) 法。 实验步骤 1.对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含 1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.11ng的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取木香空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液 1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40'C水浴浓缩至约0.6mL，分别加入混合对照品溶液10 pL、20pL、50pL、100pL、150pL、200 pL， 加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。 2.供试品溶液的制备 2.1.1 GC/MS/MS 样品提取 (QuEChERS法)： 取木香粉末(过3号筛)3g， 精密称定，置50 mL 聚苯乙烯具塞离心管中，加入水15mL， 涡旋使药粉充分浸润，放置30 min， 精密加入乙腈15 mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/分) 5 min，加入 QS-002盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3 min， 于冰浴中冷却10分钟，离心(4000转/分)5分钟，待净化。 2.1.2净化 SPE 净化管： Q-15A06 SelectCore QuEChERS 净化管 15 mL， Pesticide Residue A06 (含色素挥发油中药农残Q法) 净化：取上述提取液上清液9mL 置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全，离心(4000转/分)5分钟，即得。 2.1.3分析 GC-MS/MS测定：精密吸取上清液1mL，置氮吹仪上于35℃水浴浓缩至约0.4mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0mL，涡旋混匀，再加入 0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 im滤头，上机分析。 2.2.1 LC/MS/MS样品提取 (QuEChERS 法)： 取木香粉末(过3号筛)3g，精密称定，置50 mL 聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30 min， 精密加入乙腈15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟，加入QS-002盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(4000转/分)5分钟，待净化。 2.2.2净化 Q法净化管： Q-15A06 SelectCore QuEChERS 净化管 15 mL， Pesticide Residue A06 (含色素挥发油中药农残Q法) 净化：取上述提取液上清液9 mL 置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全，离心(4000转/分)5分钟，即得。 2.2.3分析 LC-MS/MS测定：精密吸取上清液5mL，置氮吹仪上于35℃水浴浓缩至约0.4mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0mL， 涡旋混匀，再加入0.3mL水， 混匀，过0.22im滤头，上机分析。 3.气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS-TQ8040NX) 色谱条件 色谱柱： NanoChrom BP-50+MS， 30 m×0.25mm×0.255pm； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持 1 min； 以10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃，保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：：不分流进样； 恒压模式：146 kPa： 进样量： luL。 质谱条件 电离方式：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70Ev： 接口温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：：多反应监测模式(MRM)； 溶剂延迟：10 min。 GC/MS/MS 监测目标物注意事项：：样品浓度为0.2g/mL；前加标建议加300 pL混合对照品提取，浓度为标准曲线第二个浓度点浓度(20L/mL)。由于样品浓度较低，建议分析前重新调谐检查灯丝能量后再进行分析，仪器灵敏度过低可能导致对硫磷丢峰或分析结果不准确。 氟虫腈和氟虫腈亚砜保留时间往后漂移 1.8 min左右(参考) 目标物 定量离子 CE电压 参考离子 CE电压 地虫硫磷 245.90>137.00 5 245.90>109.00 15 甲基对硫磷 263.10>109.00 13 125.00>47.00 10 4 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides， 2.6 im，2.1×100mm 流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L 甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有 5 mmol/L 甲酸铵)=95：5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：2HL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：：多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0 L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气： N，10L/min LC/MS/MS 监测目标物注意事项：地虫硫磷、治螟磷参考 GC/MS/MS 结果； 目标物 定量离子 CE 电压 参考离子 CE 电压 保留时间(参考) 水胺硫磷 291.00>231.00 -15 291.00>121.00 -30 5.106 挥发油基质样品自动进样器托盘温度不宜过低，否则个别样品会出现分层，导致分析结果不准确，建议20℃为宜。 表1木香中33种农药残留的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 84.1% 苯线磷亚砜 82.7% 3-羟基克百威 79.1% 甲基对硫磷 93.5% 地虫硫磷 89.4% 涕灭威 90.7% 对硫磷 89.4% 硫线磷 90.4% 涕灭威砜 91.2% 久效磷 86.7% 蝇毒磷 92.7% 涕灭威亚砜 88.5% 磷胺 88.2% 治螟磷 93.3% 灭线磷 91.7% 1-六六六 79.1% 特丁硫磷 89.0% 氯唑磷 77.4% β-六六六 83.3% 特丁硫磷砜 86.7% 水胺硫磷 86.8% Y-六六六 78.0% 特丁硫磷亚 砜 85.5% a-硫丹 89.3% 8-六六六 79.5% 甲基硫环磷 90.4% β-硫丹 88.1% 2，4-滴滴涕 69.5% 甲磺隆 84.7% 硫丹硫酸酯 88.8% 4，4'-滴滴滴 65.3% 氯磺隆 79.0% 氟虫腈 91.5% 4，4'-滴滴涕 64.3% 胺苯磺隆 77.6% 氟虫腈砜 92.3% 4，4'-滴滴伊 61.3% 甲拌磷 83.6% 氟虫腈亚砜 90.7% 杀虫脒 88.9% 甲拌磷砜 80.9% 氟甲腈 92.2% 除草醚 84.7% 甲拌磷亚砜 79.6% o，p'-三氯杀螨 醇 75.1% 艾氏剂 79.2% 甲基异柳磷 92.8% p，p'-三氯杀螨 醇 77.6% 狄氏剂 77.4% 内吸磷-O 81.4% 硫环磷 81.5% 苯线磷 85.6% 内吸磷-S 83.3% 苯线磷砜 80.4% 克百威 85.4% 5.处理后溶液的颜色比对 木香样品液净化后颜色对比 木香基质加标 GC/MS/MS 部分化合物分析结果对比 a-硫丹(左为直接提取法 HLB 净化， 右为 QuEChERS 法Q-15A06净化) β-六六六(左为直接提取法 HLB净化，右为 QuEChERS 法Q-15A06 净化) 8-六六六(左为直接提取法 HLB净化， 右为QuEChERS 法Q-15A06 净化) p，p'-三氯杀螨醇(左为直接提取法 HLB 净化，右为 QuEChERS 法Q-15A06净化) Y-六六六(左为直接提取法 HLB 净化，右为 QuEChERS 法Q-15A06净化) 对硫磷(左为直接提取法 HLB净化， 右为QuEChERS 法Q-15A06 净化) 甲基对硫磷左为直接提取法 HLB 净化，右为QuEChERS 法Q-15A06净化 水胺硫磷左为直接提取法 HLB 净化， 右为QuEChERS 法Q-15A06 净化 木香基质加标 GC/MS/MS 地虫硫磷出峰情况 木香基质加标 LC/MS/MS 部分化合物分析结果对比 水胺硫磷左为直接提取法 HLB 净化， 右为QuEChERS 法Q-15A06净化 6实验讨论 通过以上实验对比数据可以看出，上述方案搭配 SelectCore QuEChERS Q-15A06 净化管净化后的木香样品溶液颜色较浅，且各化合物出峰较为良好，，目标物保留时间漂移也得到了有效减弱，减少了污染 GC/MS/MS 柱前端的风险。SelectCore QuEChERS Q-15A06 净化管针对木香中油脂类成分去除效果良好，联合上述解决办法有效地提高了实验效率，也为木香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。 纳谱分析纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com NanoChrom 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com