莪术中农残测定检测方案(亲水亲脂平衡SPE柱)

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法二，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。实验结论通过以上实验数据可以看出，莪术使用SelectCore HLB-C 500mg/6mL中药农残专用柱处理对其色素类成分、挥发油吸附良好，有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；使用SelectCore HLB 500mg/6mL固相萃取柱处理的莪术LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了莪术中农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为莪术的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。中药莪术的33种农残测定分析 背景 莪术为姜科植物蓬莪术、广西莪术、温郁金的干燥根茎，含有大量挥发油和色素类成分，这些成分极易造成 GC-MS/MS 分析中六六六类目标物和特丁硫磷干扰大、对硫磷类目标物丢峰，同时也会造成LC-MS/MS分析中地虫硫磷和甲拌磷砜丢峰、3-羟基克百威响应变低等问题，导致分析结果不准确。纳谱分析推出的HLB-C 中药农残专用柱，特别适用于重色素和重油脂的中药材农残测定。今天，我们来看看莪术项目的前处理效果吧。 莪术 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的固相萃取法二，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。 实验步骤 1 对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL，置 20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1 ng的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)， 置氮吹仪上，40'C水浴浓缩至约0.6mL，分别加入混合对照品溶液10 pL、20pL、50pL、100 pL、150uL、200pL，加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。 2 供试品溶液的制备 2.1提取(直接提取法) 精密称取 5g样品(3号筛)，加氯化钠1g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50 mL 乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL左右，加乙腈定容至10mL，摇匀，置冰箱冷藏2小时，取出离心1分钟，取上清液至新的离心管内，放置至室温待净化。 3 净化 GC-MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB-C 中药农残专用柱 500mg/6mL 净化：取SelectCore HLB-C 固相萃取柱，加乙腈5mL活化，再取莪术提取液2mL置已活化的SelectCore HLB-C 固相萃取柱中，收集样品液，待所有样品液进入柱体填料后，取5mL乙腈洗脱，合并样品液与洗脱液，置40℃水浴氮吹至2 mL 即得。 GC-MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1mL，氮吹至0.6mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1mL，再加入 0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 .m尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液 1mL 加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22pm 尼龙针式过滤器，上机分析。 LC-MS/MS 样品净化： SPE柱： SelectCore HLB 固相萃取柱500mg/6mL 净化：量取上述莪术提取液4mL， 过 SelectCore HLB 固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。 LC-MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1mL氮吹至 0.6 mL 加入混合对照品液，乙腈定容至1mL， 再加入0.3mL水，混匀，过0.22im尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1mL加入 0.3 mL水，混匀，过0.22 pm尼龙针式过滤器，，上机分析。 4 气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS -TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： NanoChrom BP-50+MS气相柱，30m×0.25mm， 0.25.m； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持1 min； 以10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃，保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：：不分流进样； 恒压模式：：146kPa： 进样量：：11uL。 质谱条件 电离方式：：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：：70Ev： 接口温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应监测模式(MRM)； 溶剂延迟：：10.0 min。 5 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100mm， 22.6pm) 流动相：A：0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有 5mmol/L甲酸铵)=95：5 流速：0.3 mL/min 柱温：40℃ 进样量：2HL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气：： N10L/min 6 注意事项 GC-MS/MS：久效磷参考 LC-MS/MS 分析结果；内吸磷参考LC-MS/MS分析结果；特丁硫磷参考LC-MS/MS 分析结果；采集条件参考下表；；甲拌磷参考LC-MS/MS分析结果。 LC-MS/MS： 地虫硫磷参考 GC-MS/MS分析结果；采集条件参考下表；水胺硫磷参考 GC-MS/MS 分析结果；如遇个别目标物回收率低于60%可将上柱净化量增加到5mL。 目标物 监测模式 监测离子对 电压(CE) 特丁硫磷 (LC-MS/MS) (+) 289.10>57.00 31 289.10>103.00 13 备注：离子对条件参照2341第四法中的离子对信息 目标物 监测离子对 电压(CE) 地虫硫磷 (GC-MS/MS) 245.9>109.0 15 136.9>109.0 5 108.9>80.9 5 245.9>137.0 5 备注：离子对条件参照2341第四法中的离子对信息 7 实验结果 ①)为莪术提取液原液 2为 SelectCore HLB 500mg/6mL 净化后的莪术提取液 3 为 SelectCore HLB-C 500mg/6mL 净化后的莪术提取液 莪术基质加标 GC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 固相萃取法二处理莪术基质 LOQ浓度点加标谱图 (GC-MS/MS 方法) α-六六六 β-六六六 6-六六六 地虫硫磷 对硫磷 甲基对硫磷 水胺硫磷 莪术基质加标 LC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 固相萃取法二处理莪术基质 LOQ浓度点加标谱图 (LC-MS/MS方法) 甲拌磷砜 特丁硫磷 表1 莪术中33种农药残留的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 86.5% 苯线磷亚砜 92.1% 3-羟基克百威 80.1% 甲基对硫磷 61.5% 地虫硫磷 94.0% 涕灭威 93.4% 对硫磷 69.1% 硫线磷 85.5% 涕灭威砜 92.0% 久效磷 97.1% 蝇毒磷 90.2% 涕灭威亚砜 89.8% 磷胺 96.9% 治螟磷 96.6% 灭线磷 87.8% a-六六六 86.9% 特丁硫磷 83.1% 氯唑磷 89.9% β-六六六 101.6% 特丁硫磷砜 91.4% 水胺硫磷 79.9% Y-六六六 93.3% 特丁硫磷亚砜 99.6% α-硫丹 92.4% 6-六六六 86.9% 甲基硫环磷 98.2% β-硫丹 95.5% 2，4'-滴滴涕 83.1% 甲磺隆 84.8% 硫丹硫酸酯 88.6% 4，4'-滴滴滴 87.6% 氯磺隆 75.7% 氟虫腈 86.9% 4，4'-滴滴涕 81.4% 胺苯磺隆 75.1% 氟虫腈砜 91.4% 4，4'-滴滴伊 88.8% 甲拌磷 94.1% 氟虫腈亚砜 94.1% 杀虫脒 73.9% 甲拌磷砜 98.4% 氟甲腈 91.3% 除草醚 81.2% 甲拌磷亚砜 90.6% o，p'-三氯杀螨醇 92.9% 艾氏剂 86.4% 甲基异柳磷 92.1% p，p'-三氯杀螨醇 96.1% 狄氏剂 82.1% 内吸磷 80.9% 硫环磷 89.0% 苯线磷 90.1% 苯线磷砜 86.9% 克百威 89.5% 8实验结论 通过以上实验数据可以看出，莪术使用 SelectCore HLB-C 500mg/6mL中药农残专用柱处理对其色素类成分、挥发油吸附良好，有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对 GC-MS/MS 柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；；使用 SelectCore HLB 500mg/6mL 固相萃取柱处理的莪术 LC-MS/MS 基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了莪术中农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为莪术的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。 纳谱分析纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com NanoChrom