电位滴定法测定疫苗佐剂羟值

一、前言佐剂是疫苗的一种添加剂，当它先于抗原或与抗原混合注入机体后，能够增强机体对抗原的免疫应答或者改变免疫反应的类型，属于非特异性的免疫增强剂。随着现代生物技术和基因工程技术的迅速发展，针对不同疾病已开展了各种新型基因工程疫苗的研制，佐剂尤其是新型免疫佐剂的研究就显得尤为迫切。    在标准T/CVDA02《复合矿物油动物疫苗佐剂》中，对于佐剂的质量检测中有明确规定测定羟值含量，本方法参考其中的检测方法制定了运用电位滴定检测的方法。该方法检测方便，减少了人为判断指示剂颜色对结果的误差影响，增加了检测精确度，并且提高了检测效率，解放操作员的双手。二、仪器与试剂2.1、仪器T960全自动电位滴定仪，PH复合电极，水浴锅，分析天平等。2.2、试剂酰化试剂（取对甲苯磺酸 14.4g, 置干燥的 500ml 具塞锥形瓶中，加醋酸乙酯 360ml，振摇使溶解，缓缓加入醋酐120ml 摇匀，密塞，放置3日后备用），吡啶-水（3：5），氢氧化钾标准滴定液（1mol/L）。方案编号： T-1010-202203 一 电位滴定法测定疫苗佐剂羟值 一、前言 佐剂是疫苗的一种添加剂，当它先于抗原或与抗原混合注入机体后，能够增强机体对抗原的免疫应答或者改变免疫反应的类型，属于非特异性的免疫增强剂。随着现代生物技术和基因工程技术的迅速发展，针对不同疾病已开展了各种新型基因工程疫苗的研制，佐剂尤其是新型免疫佐剂的研究就显得尤为迫切。 在标准 T/CVDA02 《复合矿物油动物疫苗佐剂》中，对于佐剂的质量检测中有明确规定测定羟值含量，本方法参考其中的检测方法制定了运用电位滴定检测的方法。该方法检测方便，减少了人为判断指示剂颜色对结果的误差影响，增加了检测精确度，并且提高了检测效率，解放操作员的双手。 二、仪器与试剂 2.1、仪器 T960 全自动电位滴定仪， PH复合电极，水浴锅，分析天平等。 2.2、试剂 台0一木 酰化试剂(取对甲苯磺酸 14.4g， 置干燥的500ml具塞锥形瓶中，加醋酸乙酯 360ml，振摇使溶解，缓缓加入醋酐 120ml摇匀，密塞，放置3日后备用)，吡啶-水(3：5)，氢氧化钾标准滴定液 (1mol/L)。 三、实验方法 3.1、样品检测 准确称取 2g 左右样品，置于滴定杯中，加入5mL酰化试剂，封口膜密封，轻轻摇动至溶解。置于50℃水浴加热 25min， 放冷，加吡啶-水(3：5)20mL，5分钟后用氢氧化钾标准滴定液(1mol/L)， 以PH复合电极为工作电极，在T960上进行滴定至终点。同时做空白实验。 母配个术 设定滴定仪参数如表1所示： 表1滴定参数设置 滴定模式： 动态滴定 最小添加体积 0.02mL 电极平衡时间： 4s 预搅拌时间： 60s 电极平衡电位： 滴定速度： 标准 结束体积： 相关系数： 12.69 电位突跃量： 200 补液速度： 5 搅拌速度： 7 四、结果与讨论 每能技来4.1、实验结果 实验结果如表2所示： 表2测试结果 样品批号 样品序号 样品质量/g 滴定液浓度(氢氧化钾) /(mol/L) 滴定体积/mL 羟值(mg/g) 平均值 20211201 空白 1.01838 26.225 / / 1 2.01652 25.475 21.249 23.301 2 2.01019 25.386 23.802 3 2.01160 25.350 24.851 20220101 1 2.02788 25.365 24.229 24.335 2 2.09250 25.326 24.545 3 2.03595 25.361 24.231 4.2、结论 本次测定的动物疫苗佐剂的羟值均小于参考标准要求中的25(mg/g)，测试结果重复性良好，满足检测要求。 ( 参考文献 ) ( [1] T/CVDA02 复合矿物油动物疫苗佐剂[S]. ) 海能技术 海能技术 海能技术 -- --