液体连续稀释中准确度检测方案(移液器)

SARTORIUS 引言 应用说明 2018年8月15日 关键词或短语： Picus@、连续稀释、稀释比例、准确度、重现性、低吸附吸头、电动移液器 使用电动移液器改善连续稀释的准确度 Marian Teye， PhD Sartorius Biohit Liquid Handling， Laippatie 1， 08800 Helsinki Finland 通讯作者 电子邮箱： LHinfo.Finland@sartorius.com 摘要 连续稀释是药物发现环节剂量反应曲线的重要组成部分。连续稀释在检测限测试、qPCR分析的标准曲线以及各种分析和仪器的校准曲线中也发挥着重要作用。连续稀释的准确度是对结果有显着影响的一个重要因素。在本文中，我们研究了在制备连续稀释液的过程中使用电动移液器。结果表明，与使用手动移液器相比，使用电动移液器进行连续稀释可提高样品浓度的准确度，并减少连续稀释中最高稀释度下的误差传递。我们得出结论，电动移液器是制备连续稀释液的更优选择。此外，电动移液器具备更好的人体工程学设计，能对样品进行电动混合，并且能够对移液方案进行预编程，这些功能为其在连续稀释液制备中的应用带来了更多的优势。 STU 连续稀释在药物发现中扮演着重要的角色。在许多实验室中，通常使用手持式移液器或自动化移液设备来制备连续稀释液。由于直接测量测试试剂具有挑战性，因此，通常根据移液器或液体处理设备、或进行移液操作的人员的可靠性来假设连续稀释的准确度。在生物制药行业，质量控制实验室越来越多地将用到连续稀释的质量控制工艺合并，其中包括使用吸光度法或荧光染料来间接推断稀释性能、准确度和精确度。 制备连续稀释液的主要挑战是准确度和时间。移液过程中误差的传递会影响连续稀释的准确性。这是因为每次稀释都取决于连续稀释过程中的前一次稀释，因此，连续稀释中的最高稀释度的误差往往最大。 本应用说明的目的是测试使用电动移液器进行准确连续稀释的可靠性。我们使用电动移液器和领先的手动移液器制备连续稀释液，并进行对比。 在本应用说明中，我们对连续稀释液进行了以下测试： ·移液器类型 ▪稀释液浓度的准确度。 ▪稀释液浓度的精确度度(重现性)。 移液器和移液器吸头 使用赛多利斯Picus@电动移液器、赛多利斯Safetyspace低吸附过滤器吸头和优质的手动移液器制备连续稀释液。 连续稀释 对稀释DNA进行直接吸光度检测，用于对连续稀释的准确度进行定量。采用无核酸酶水制备沙门氏菌DNA。使用手动或电动移液器制备了沙门氏菌DNA的七点二倍连续稀释液。已知DNA会与标准塑料管结合，因此所有连续稀释液均使用低吸附移液器吸头(赛多利斯)在1.5mL Lo-Bind EP微量离心管(Eppendorf)中制备。为了进行7点2倍连续稀释系列，将7个1.5mL离心管标记为1-7，并使用单通道电动或手动移液器将250uL无核酸酶水作为稀释剂填充到离心管2-7中。将300uL沙门氏菌DNA储备样品移取至离心管1。将250uL样品从离心管1转移到下一离心管，然后混合5次。在执行每个稀释步骤后更换移液器吸头。对下一个离心管重复此操作，直到所有7个离心管均被连续稀释，每个离心管均混合5次样品。电动移液器的混合参数设置为 375uL、泪合 5次、速度设置为4。对于手动移液器，则需手动完成混合。连续稀释系列的管1直接由沙门氏菌DNA储备样品制成。对于每种移液器类型，一式三份进行测试。根据比尔-朗伯定律，使用 NanoDropM2000(Thermo Fischer Scientific)在 260 nm处直接测量吸光度，从而直接量化连续稀释液的浓度。 数据分析 分析数据的线性度、准确度和重现性。使用MSExcel确定稀释系列的线性。通过将浓度测量值与相应稀释因子的倒数作图并确定R2值，来确定稀释系列的线性度。稀释系列的准确度(浓度测量值与预期浓度的接近程度)由百分比误差(不准确度%)表示。将浓度测量值减去预期浓度，再除以浓度测量值，然后转换为百分比，即可得到准确度(不准确度%)。稀释系列的精确度(重现性)用变异系数(CV%)表示，计算方法为用三次重复测试的标准偏差除以平均浓度，然后转换为百分比。 使用电动移液器或手动移液器制备的连续稀释液生成的线性图表明，两种手持式移液器制备的稀释系列都具有线性，两者的R2值均为0.9999(图1)。 A. 电动 B. 手动 1.2 图1：连续稀释液的线性。(A)Picus电动移液器(B)优质手动移液器 为了评估稀释系列的准确度，将每个稀释步骤的测量浓度与预期浓度进行对比。用电动移液器操作的预期浓度和实际浓度之间的差异始终小于5%。对于稀释系列中的最高稀释度，与使用手动移液器获得的结果相比，使用电动移液器提高了最高稀释度样品的准确度(图2)。 与目标浓度的相对偏差 图2.优质手动移液器与电动移液器的连续稀释准确度对比 重现性 重现性(或移液精确性)对连续稀释来说非常重要。对于使用Picus@电动移液器制备的三次连续稀释液，其连续稀释浓度的百分比变异系数(CV%)很低，远低于5%(表1)。 电动移液器 试管 CV% 1(989.7ng/uL) 储备液 2(494.8 ng/uL) 0.1 3(247.4 ng/uL) 0.5 4 (123.7 ng/uL) 0.9 5(61.9ng/uL) 0.4 6 (30.9 ng/uL) 2.3 7 (15.5 ng/uL) 1.0 数据表明，电动移液器是制备连续稀释液的理想选择。尽管电动和手动移液器均能提供可靠的连续稀释，且结果均具有良好的准确度和重现性，但与手动移液器相比，电动移液器获得的结果更准确，并且在连续稀释的最高稀释度的浓度误差更小(误差传播更小)。 对于长时间连续移液操作(例如连续稀释液的制备)来说，相比手动移液器，电动移液器可实现更准确且可重复的活塞移动，因此更具优势。此外，电动移液器消除了手动控制，移液量不依赖于操作人员的的移液经验，因此可提供可重现的结果。 Picus@电动移液器是市场上最符合人体工学设计的移液器之一。使用符合人体工程学的电动移液器进行移液操作意味着能够以更符合人体工程学的方式更快地完成移液系列操作，并且减少因用户疲劳引起的错误。电动移液器还有许多额外优势，可以实现更好的连续稀释。例如， Picus@具有专为稀释系列定制的多种移液模式，包括正向移液附加混合功能和序列分液模式。与手动移液器不同，电动混合步骤可确保用户不会因长时间连续的混合操作而感到疲劳，因此不会对结果产生影响。Picus@Nxt移液器具有可编程的额外优势。可提前将用户的连续稀释移液方案保存在移液器上，进一步确保移液准确度并缩短移液时间。 进行连续稀释可能具有挑战性，但使用电动移液器可以显著改善这一过程。使用电动移液器制备连续稀释液是可靠的，它能够确保尽可能攻克准确度(将误差传播最小化)和时间这两个主要挑战。 ( 参考文献 ) ( Popa-Burke， 1.， Lupotsky， B.， Boyer，J.， Gannon， W.， H ughes， R.， Kadwill， P .， Lyerly， D.， Nichols，J. ， Nixon， E.， Rimmer， D.， Saiz-Nicolas， l. ， Sanfiz-Pinto ， B.， & Holland，S.(2009).Establishing quality assurance criteria for serial dilution ) ( operations on liquid-handling e quipment. J Biomol Screen， 14(8) ， 1017e1030. ) 销售与服务联系方式 更多联系信息，请访问 www.sartorius.com.cn 赛多利斯(上海)贸易有限公司 邮箱 lab.cn@sartorius.com 服务热线 400 920 9889|800 820 9889 上海北京上海市浦东新区盛荣路388北京市顺义区空港工业区 B弄百佳通产业园3号楼区裕安路 33号， 1013007-11层，200120电话 +86 10 8042 6300 电话+8621 6066 6100 苏州广州 苏州市虎丘区科技城锦峰路广州市越秀区水荫路117号 158 号 101park-28 幢201，1105单元， 510075 215163电话+86 20 37617284 电话+86 512 6616 0490 成都西安成都市上东大街246号新良西安市和平路 118号和平银大厦2406室，610012座1107室， 710001电话+8628 8666 6877电话 +86 29 87512305 ( 技木规格如有变更，恕不 另 行通知。 ) ( 赛多利斯保留最终解释权和修改权。 ) ( 版本04|2022 ) 了解更多：：www.sartorius.com Abstract连续稀释是药物发现中剂量反应曲线的重要组成部分。连续稀释在检测限测试、qPCR分析的标准曲线以及各种分析和仪器的校准曲线中也发挥着重要作用。连续稀释的准确度是对结果有显着影响的一个重要因素。使用电动移液器进行连续稀释可提高样品浓度的准确度，并减少连续稀释中最高稀释度下的误差传播。Download《使用电动移液器改善连续稀释的准确度》应用说明通过研究证明了电动移液器是在制备连续稀释液中的更优选择。此外，电动移液器具备改进的人体工程学设计，能对样品进行电动混合，并具有对移液方案进行预编程的能力，这些功能为其在连续稀释液制备中的应用带来了更多的优势。点击下载 获取全文引言连续稀释在药物发现中扮演着重要的角色。在生物制药行业，质量控制实验室越来越多地将用到连续稀释的质量控制工艺合并，其中包括使用吸光度法或荧光染料来间接推断稀释性能、准确度和精确度。制备连续稀释液的主要挑战是准确度和时间。移液过程中误差的传递会影响连续稀释的准确性。本应用说明的目的是测试使用电动移液器进行准确连续稀释的可靠性。我们使用电动移液器和手动移液器制备连续稀释液，并进行对比。在本应用说明中，我们对连续稀释液进行了以下测试：- 移液器类型- 稀释液浓度的准确度- 稀释液浓度的精确度（重现性）方法移液器和移液器吸头使用赛多利斯Picus® 电动移液器、赛多利斯Safetyspace低吸附吸头和优质的手动移液器制备连续稀释液。连续稀释对稀释DNA进行直接吸光度检测，用于对连续稀释的准确度进行定量。采用无核酸酶水制备沙门氏菌DNA。使用手动或电动移液器制备了沙门氏菌DNA的七点二倍连续稀释液。数据分析分析数据的线性度、准确度和重现性。通过将浓度测量值与相应稀释因子的倒数作图并确定R2值，来确定稀释系列的线性度。稀释系列的准确度（浓度测量值与预期浓度的接近程度）由百分比误差（不准确度%）表示。将浓度测量值减去预期浓度，再除以浓度测量值，然后转换为百分比，即可得到准确度（不准确度%）。稀释系列的精确度（重现性）用变异系数（CV%）表示，计算方法为用三次重复测试的标准偏差除以平均浓度，然后转换为百分比。结果使用电动移液器或手动移液器制备的连续稀释液生成的线性图表明，两种手持式移液器制备的稀释系列都具有线性，两者的R2值均为0.9999（图1）。图1：连续稀释液的线性。（A）Picus® 电动移液器（B）优质手动移液器准确度为了评估稀释系列的准确度，将每个稀释步骤的测量浓度与预期浓度进行对比。用电动移液器操作的预期浓度和实际浓度之间的差异始终小于 5 %。对于稀释系列中的最高稀释度，与使用手动移液器获得的结果相比，使用电动移液器提高了最高稀释度样品的准确度（图2）。图2.优质手动移液器与电动移液器的连续稀释准确度对比重现性重现性（或移液精确性）对连续稀释来说非常重要。对于使用Picus® 电动移液器制备的三次连续稀释液，其连续稀释浓度的百分比变异系数（CV%）很低，远低于 5 %（表1）。讨论数据表明，电动移液器是制备连续稀释液的理想选择。尽管电动和手动移液器均能提供可靠的连续稀释，且结果均具有良好的准确度和重现性，但与手动移液器相比，电动移液器获得的结果更准确，并且在连续稀释的最高稀释度的浓度误差更小（误差传播更小）。对于长时间连续移液操作（例如连续稀释液的制备）来说，相比手动移液器，电动移液器可实现更准确且可重复的活塞移动，因此更具优势。此外，电动移液器消除了手动控制的影响，移液量不依赖于操作人员的的移液经验，因此可提供可重现的结果。Picus® 电动移液器Picus® 电动移液器是市场上最符合人体工学设计的移液器之一。使用符合人体工程学的电动移液器进行移液操作意味着能够以更符合人体工程学的方式更快地完成移液系列操作，并且减少因用户疲劳引起的错误。电动移液器还有许多额外优势，可以实现更好的连续稀释。例如，Picus® 具有专为稀释系列定制的多种移液模式，包括正向移液附加混合功能和序列分液模式。与手动移液器不同，电动混合步骤可确保用户不会因长时间连续的混合操作而感到疲劳，因此不会对结果产生影响。Picus® Nxt移液器具有可编程的额外优势。可提前将用户的连续稀释移液方案保存在移液器上，进一步确保移液准确度并缩短移液时间。Summary进行连续稀释可能具有挑战性，但使用电动移液器可以显著改善这一过程。使用电动移液器制备连续稀释液是可靠的，它能够确保尽可能攻克准确度（将误差传播最小化）和时间这两个主要挑战。更多详细解读 敬请下载全文