血液中血管紧张素I检测方案(固相萃取仪)

前言 二50 APPF 100ml 2 即 40 PURETON From Nature，For Life 利用血管紧张素提取比较传统的SPE柱与磁性萃取剂的性能 实验材料 血管紧张素I，液相色谱质谱，固相萃取， Angiotensinl，Angl， Renin， LC-MS/MS， SPE 血管紧张素I(Angl) 是较为常见的临检标志物之一，通过对血管紧张素I提取效果的测试，能够有效地评价各种样品前处理手段的临床适用性和技术性能。 本文通过对比市售的某著名进口品牌HLB96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取剂提取Ang l试验的各项方法学指标，直观地比较了两者的性能表现。也为临床SPE样品前处理技术的发展前景提供了非常有价值的参考。 实验设计 如下表所示 使用1%BSA制备四个浓度水平的Angl系列标准溶液，辅以稳定同位素标记的AngI内标。 设定如下条件的SPE，应用于某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板。使用适配的正压96孔SPE操作装置运行样品。 ANGI 浓度(ng) LOQ 0.5 10 低水平(L) 7.5 10 中水平(M) 30 10 高水平(H) 80 10 活化 使用500uL甲醇活化SPE板两次 平衡 使用500uL5%甲酸水溶液活化SPE板两次 上样 取500 uLLOQ、低(L)、中(M)、高(H)上样 淋洗1 使用500uL5%甲酸水溶液淋洗SPE板两次 淋洗2 使用500 uL20%甲醇水溶液淋洗SPE板两次 洗脱 每孔各加入250uL甲醇， 收集洗脱液于96孔板中 与此对应的，为PURETON M32全自动萃取仪设定如下的程序运行样品，每个样品使用2mg HLB磁性萃取剂。 指令 溶液 孔位 溶剂量(uL) 活化 甲醇 1 500 平衡 5%甲酸水溶液 2 500 上样 样品溶液 3 500 淋洗1 5%甲酸水溶液 4 500 淋洗2 20%甲醇水溶液 5 500 洗脱 甲醇 6 250 排废 / 2 600 将实验设计中所述的四个标准样本，每个样品重复三次提取，比较两种前处理方法提取后，在LC-MS/MS上测得的相对标准偏差，结果如下图所示。其中，左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB96位SPE多孔板提取后的测定结果，右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。 图c 中水平(M)重现性 (RSD%) 图d高水平(H)重现性((RSD%) 可以看到，两种前处理方法无论在外表峰面积、内标峰面积、计算浓度上的相对标准偏差均没有显著的差别，但是磁性萃取剂的结果在大多数水平下都略好于传统的96位SPE多孔板。 数据和比较/ 在提取率的比较中，我们选择某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后测得的峰面积为基准(100%)，以磁性萃取剂提取后测得的峰面积与之比较。如下图所示，左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的测定结果，右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。 可以看到，在所有浓度水平下，磁性萃取剂提取测得峰面积均显著地好于传统的96位SPE多孔板，且均超过后者50%以上，最高甚至达到了约1.8倍。 图a 外表峰面积比较 图b p内标峰面积比较 最后如下图展示的LOQ水平两种方法提取后，在LC-MS/MS所得的MRM色谱图。图a为使用传统的96位SPE多孔板所得色谱图，图b为磁性萃取剂所得色谱图。 明显地，在LOQ水平下，磁性萃取剂提取得到的色谱峰高超过了传统的96位SPE多孔板提取，这与提取率结果是完全一致的。 图a传统的96位SPE多孔板提取 结果讨论/通过上述数据比较，我们可以得到如下表所述的结果。 绝对重复性 相对重复性 提取率 LOQ质量 操作模式 某著名进口品牌96位SPE多孔板 较佳 较佳 适中 适中 手动+负压装置 磁性萃取剂 较佳 较佳 优50%以上 较佳 少量手动+自动设备 可以看到，在以上评价范围内，磁性萃取剂的提取效果均优于某著名进口品牌的HLB96位SPE多孔板。同时， PURE-TONM32全自动提取仪固有的“次次移液”和“无人值守”操作模式，降低了样品前处理中的人为参与，同时大幅提高了自动化水平。 普敦实验室设备(上海)有限公司 服务热线：4001-520-260 客服邮箱： china@pureton.com.cn 公司地址：上海市闵行区光华路248号1号号1405室 公众号 服务号 血管紧张素!（Ang I）是较为常见的临检标志物之一，通过对血管紧张素I提取效果的测试，能够有效地评价各种样品前处理手段的临床适用性和技术性能。
本文通过对比市售的某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取剂提取
Ang l试验的各项方法学指标，直观地比较了两者的性能表现。也为临床SPE样品前处理技术的发展前景提供了非常有价值的参考。数据和比较将实验设计中所述的四个标准样本，每个样品重复三次提取，比较两种前处理方法提取后，在LC-MS/MS上测得的相对标准偏差结果如下图所示。其中，左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96位5PE多孔板提取后的测定结果，右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。
在提取率的比较中，我们选择某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后测得的峰面积为基准（100%），以磁性萃取剂提取后测得的峰面积与之比较。如下图所示，左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96 位SPE多孔板提取后的测定结果，右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。