猪肉中醋酸甲地孕酮，醋酸甲羟孕酮检测方案(浓缩仪)

动物源性食品中兽药残留量的测定 猪肉及猪肝中的醋酸甲地孕酮/醋酸甲羟孕酮残留量的测定 Knowledge Optimized Laboratory 解决方案 全自动固相萃取-高效液相质谱联用测定猪肉及猪肝中的醋酸甲地孕酮/醋酸甲羟孕酮 全自动固相萃取；高效液相色谱-串联质谱；醋酸甲地孕酮/醋酸甲羟孕酮 醋酸甲地孕酮(MEGESTROL) 属于17A-羟孕酮类衍生物，是一种高效的合成孕激素。本品有明显抗雌激素作用，无雌激素或雄激素活性，无蛋白同化作用。可抑制下丘脑促性腺激素释放激素(GNRH)的释放，并作用于腺垂体，降低其对GNRH的敏感性，从而阻断垂体促性腺激素释放，产生显著的排卵抑制作用，故与炔雌醇合用作为短效避孕药。醋酸甲羟孕酮 (MEDROXYPROGES-TERONE 17-ACETATE)主要用于痛经、功能性闭经、功能性子宫出血、先兆流产或习惯性流产、子宫内膜异位症、治疗晚期乳腺癌、子宫内膜腺癌及肾癌等。大剂量可用作长效避孕针。 猪肉及猪肝中的醋酸甲地孕酮/醋酸甲羟孕酮残留量的测定 醋酸甲地孕酮(Megestrol) 属于17α-羟孕酮类衍生物，是一种高效成合成孕激素。本品有明显抗雌激素作用，无雌激素或雄激素活性，无蛋白同化作用。可抑制下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)的释放，并作用于于垂体，降低其对GnRH的敏感性，从而阻断垂体促性腺激素释放，产生显著的排卵抑制作用，故与炔雌醇合用作为短效避孕药。醋酸甲羟孕酮 (Medroxyprogesterone 17-acetate) 主要用于治疗痛经、功能性闭经、功能性子宫出血、先兆流产或习惯性流产、子宫内膜异位症、治疗晚期乳腺癌、子宫内膜腺癌及肾癌等。大剂量可用作长效避孕针。 本应用文章参考《GB 31660.4-2019动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的测定》中的方法，采用混合阳离子交交柱净化，高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS) 联用技术检测，建立了猪肉和猪肝中对醋酸甲地孕酮/醋酸甲羟孕酮高灵敏度的前处理和检测分析方法，对于两种物质的加标回收率均在70%以上，表明该方法可准确、有效地检测猪肉和猪肝中的两种孕激素。 仪器、耗材与试剂 仪器 Raykol Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪 RayKol Auto EVA 80高通量全自动平行浓缩仪 Raykol MPE系列高通量真空平行浓缩仪 Raykol Auto Prep 200全自动液体样品处理工作站 耗材 混合阳离子交换柱 (RayCure MCX， 60mg/3mL)，货号： RC-204-72855 Agilent 1290高效液相色谱 (HPLC) 试剂 乙(色谱纯)，甲酸(色谱纯) 0.2mol/L乙酸铵缓冲液：取乙酸铵15.4g， 加水900mL使溶解， 用乙酸调pH值至5.2，加水稀释至1000mL 80%乙腈水 三标准曲线配制 将1.0pg/mL的混合标准储备液和0.1ug/mL的混合内标储备液取出，于室温平衡后用AP 200全自动液体样品处理工作站配成浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0pg/L的标准工作曲线。 全自动液体样品处理工作站 序号 命令 源液位 源液浓度 源液体积(mL 目标位 目标浓度 目标体积(mL 溶剂 洗针溶剂 1 填充管路 3.00 80%乙腈水 2 直接稀释 A1 1000.00 1.00 A21 100.00 1.00 80%乙清水 80%乙膦水 3 直接稀释 A21 100.00 1.00 A22 10.00 1.00 80%乙腈水 80%乙水 4 内标曲线 A22 10.00 1.00 A41 1.00 1.00 80%乙腈水 80%乙水 5 内标曲线 A22 10.00 1.00 A42 2.00 1.00 80%乙腈水 80%乙清水 6 内标曲线 A21 100.00 1.00 A43 5.00 1.00 80%乙膦水 80%乙水 7 内标曲线 A21 100.00 1.00 A44 10.00 1.00 80%乙腈水 80%乙水 8 内标曲线 A21 100.00 1.00 A45 20.00 1.00 80%乙腈水 80%乙水 9 方法结束 固相萃取净化条件 将混合阳离子交换柱安装在睿科FotectorPlus上，以3mL/min的速度分别用甲醇和纯水各3mL对混合阳离子交换柱进行活化，活化完成后取备用液过柱(为使固相萃取效果更好，推荐过柱速度≤2mL/min，并为使上样完全，一般要多设置1mL的抽取体积)，上样完成后，分别用水、50%甲醇溶液对固相萃取柱进行淋洗，氮气吹干，取甲醇5mL用2mL/min的速度将柱子中保留的目标物洗脱，收集洗脱液，转移至RayKol EVA 80氮气吹干。加入1mL80%乙溶溶液进行溶解，涡旋混匀，过滤膜备用，供LC-MS测定。 液相色谱条件 柱子 Ci8色谱柱 (Waters， 100mm×2.1mm×1.7um) 流速 0.300 mL/min 流动相 A：乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)，B：乙青 柱温 35℃ 进样体积 2uL 检测器 Agilent 6470 离子模式 ESI+ 吹扫气 11L/min 氮气温度 350C 簇电压 4000 雾化压力 35psi 梯度洗脱 0 min 乙腈50%， 0-1.0 min 乙腈50%，3.0-5.0 min乙腈 50%，5.5-8.0 min乙腈50% 命令 溶剂 排出 流速 (mL/min) 体积 (mL) 时间(min) 清洗样品通道 CH3OH 2.8 活化 CH3OH 有机废液 3 3 1.4 活化 H2O 有机废液 3 3 1.4 上样 有机废液 1 4 4.5 淋洗 H2O 废水 3 3 1.4 淋洗 CH3OH：H2O=1：1 有机废液 3 3 1.4 吹干 3 洗脱 CH3OH 收集 5 2.9 暂停 2 气推 收集 5 5 1.6 结束 图-1.两种孕激素的固相萃取净化方法 Raykol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.， Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2020年10月版 本应用文章参考《GB 31660.4-2019动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的测定》中的方法，采用混合阳离子交换柱净化，高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）联用技术检测，建立了猪肉和猪肝中对醋酸甲地孕酮/醋酸甲羟孕酮高灵敏度的前处理和检测分析方法，对于两种物质的加标回收率均在70%以上，表明该方法可准确、有效的检测猪肉和猪肝中的两种孕激素。