水稻苗中苯丙氨酸解氨酶检测方案(紫外分光光度计)

TEL-400-616-4686 美析仪器MACYLAB INSTRUMENTTEL-400-616-4686 水稻苗中苯丙氨酸解氨酶：(PAL)的应用方案 引言苯丙氨酸解氨酶 (PAD 对植物体的木质素、植保素、类黄酮、花青素等次生物质的形成起重要的调节作用，且与植物的抗病作用有一定的关系。本实验了解测定苯丙氨酸解氨酶活性的原理和方法。 关键词：苯丙氨酸解氨酶、美析紫外 原理苯丙氨酸解氨酶是植物次生代谢中的一个关键酶。它催化L-苯丙氨酸的脱氨反应.释放氨而形成反式肉桂酸。根据产物反式肉桂酸在波长 290nm 处吸光度的变化，‘；，可以测定该酶的活性。 材料与仪器 UV-1800紫外可见分光光度计、冷冻高速离心机，旋涡混合器，恒温水浴锅等 材料：黄化水稻幼苗 试剂：0.1mol/L硼酸缓冲液(pH8.8) ； 0.02 mol/L1L-苯丙氨酸：称取3.33g/L-苯丙氨酸溶于1000 mL 0.1 mol/L"1 硼酸缓冲液 (pH8.8) ； 7 mmol-統基乙醇硼酸缓冲液：0.11mL 藐基乙醇用 0.1mol/L-1硼酸缓冲液溶解，并定容至200ml； 聚乙烯毗咯烷酮(PVP)。 实验步骤 酶液制备：称取黄化水稻苗 0.5g， 先加1.5mL 预冷的提取液友(即7mmol-L-1蔬基乙醇酸缓冲液)、过量的聚乙烯毗咯毗酮 (PVPX 但不能太多，否则不易研磨))、少量石英砂在冰浴下研磨成浆，再再加3.5mL 预冷的提取液使其终体积为 5ml。于 12000g4℃下离心15 min，用吸管吸取上清液，即粗酶液。 酶活测定： 反应液包括：：①0.02mol-L_1L-苯丙氨酸 1mL； ②0.1 mol-L1 硼酸缓冲液((ppH8.8) 2mL； ③0.1mL 粗酶液。 (对照以0.1mL 疏基乙醇缓冲液代替酶液) 反应液用涡旋混合器混匀后立即在 290 nm 处测起始吸光度值，并精确计时。(每一样品重复两组)将测定后的各管于30℃水浴保温 30 min， 再于 290 nm 处测定各管的吸光度值。本实验用 UV-1800紫外可见分光光度计以每30 min 在波长 290nm 处吸光度值增加0.01所需酶量为1个单位(U)。 上海美析仪器有限公司 苯丙氨酸解氨酶活性 (U-g1鲜重)= 式中a一测定时的酶液用量， mL；V一酶液总体积， mL； W一样品重，gg。 (苯丙氨酸解氨酶活性也可以 U·mg1蛋白表示.蛋白质含量可用考马斯亮蓝 G-250法测定，以牛血清白蛋白作标准) 仪器参数 UV-1800PC双光束紫外可见分光光度计 仪器特点 *UV-1800系列采用双光束光学系统，成功实现了高精度和高可靠性测量的完美结合，，可满足各种应用的要求，可用在生物研究、生物工业、药物分析、制药、教学研究、环保、食品卫生、临床检验、卫生防疫等领域 *宽广的波长范围，可满足各个领域对波长范围的要求 *全自动的设计理念，实现了最简单的测量手段 *大规模集成电路的设计大大提高了系统的扩展性和可靠性 *改良优化的光路设计、进口光源和接收器造就了系统高性能和高可靠性 *丰富的测量方法，具有波长扫描、时间扫描、多波长测定、多阶导数测定(选)、双波长、三波长(选) DNA蛋白质测量(选)等多种测量方法，可满足不同测量的要求，并可在6英寸大屏幕上直接显示 *根据用户的要求可选配单孔架、手动四连架、手动八连架、自动八连架、玻璃支架、试管架、1cm 比色架、5cm 比色架、10cm比色架等 *测量数据可通过打印机输出， 具有 USB接口 *可断电保存测量参数和数据，方便用户使用 *可通过 PC软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求 技术指标及基本参数 *波长范围：190~1100nm 上海美析仪器有限公司 *光谱带宽：1.8nm *波长准确度：±0.3nm *波长重现性：：≤0.1nm *透射比准确度：±0.3%T(0-100%T) ±0.002A(0~0.5A) ±0.003A(0.5A~1A) *透射比重复性：±0.15%T (0-100%T) ±0.001A(0~0.5A) ±0.0015A(0.5A~1A) *杂散光：≤≤0.03% T (220nm Nal， 340nm NaNO2) *稳定性： 0.0005A/h (500nm 预热后) *测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量 *波长调节：自动调节 *光度范围： -4~4A *显示方式：六英寸高亮度液晶显示屏 *检测器：进口硅光二极管 *光源：进口气灯，进口钨灯 *电源： AC 220V/50Hz 或 110V/60Hz *功率： 120W *仪器尺寸：560×450×230mm *主机净重： 28Kg 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的仓业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，，·不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 上海美析仪器有限公司 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。 美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC认证、RoHS认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光光类专利版权等等) 了解更多内容请关注我公司微信公众号：美析仪器 上海美析仪器有限公司 苯丙氨酸解氨酶（PAD 对植物体的木质素、植保素、类黄酮、花青素等次生物质的形成起重要的调节作用，且与植物的抗病作用有一定的关系。本实验了解测定苯丙氨酸解氨酶活性的原理和方法。