水产品中河豚毒素检测方案(柱后衍生装置)

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检测样品: 渔业
检测项目: 理化分析
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发布时间: 2021-11-30
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青岛普瑞邦生物工程有限公司

铜牌16年

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目前食品中河豚毒素的检测主要依据GB 5009.206-2016,包括小鼠生物法、液相色谱-串联质谱法、液相色谱-荧光检测法和酶联免疫吸附法。

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1.百度百科: 河鈍毒素(tetrodotoxin, TTX),分子式为 C11H17O8N3,是鱼类(俗称河豚鱼)及其它生物体内含有的一种生物碱。 河鈍毒素为氨基全氢喹唑啉型化合物,是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一,曾一一度被认为是自然界中毒性最强的非蛋白类毒素。毒素对肠道有局部刺激作用,吸收后迅速作用于神经末梢和神经中枢,可高选择性和高亲和性地阻断神经兴奋膜上钠离子通道,阻碍神经传导,从而引起神经麻痹而致死亡。 毒素起源于生物体本身还是寄生物尚有争议,体内毒素的积累和分布因不同季节和部位而异。河鈍在生殖季节毒性大,且雌性大于雄性,而在不同部位中,卵巢>脾脏>肝脏>血液>眼睛>鳃耙>皮肤>精巢。一般肌肉中不含有河鈍毒素,但河屯后内脏中的毒素可渗入肌肉,此时鱼肉也含有少量毒素。提取毒素的主要部位为卵巢和肝脏。 河毒素化学性质和热性质均很稳定,盐腌或日晒等一般烹调手段均不能将其破坏,只有在高温加热 30min 以上或在碱性条件下才能被分解。220℃加热 20-60min 可使毒素全部被破坏。中毒潜伏期很短,短至10-30min, 长至3-6h发病,发病急,如果抢救不及时,中毒后最快的 10min 内死亡,最迟 4-6h 死亡。中毒后也缺乏有效的解救措施。毒素纯品在医药方面用途广泛,具有极高商业价值。 2.方法介绍 目前食品中河豚毒素的检测主要依据 GB 5009.206-2016,包括小鼠生物法、液相色谱-串联质谱法、液相色谱-荧光检测法和酶联免疫吸附法。其中小鼠生物法虽为世界普遍的参考方法,但存在小鼠个体差别大导致结果异常的现象;液相色谱-串联质谱法仪器成本高,对操作人员水平要求严格;酶联免疫吸附法属于半定量方法且商品化试剂盒较少;固采用液相色谱-荧光检测法。为保证检测结果更加精准可靠,普瑞邦特对该方法进行优化,采用诺尔液相搭配 Pribolab@MDS多功能光电衍生系统进行河豚毒素的检测。经液相色谱分离后,河豚毒素在 Pribolab@MDS 多功能光电衍生系统内与高温的氢氧化钠溶液反应,生成具有强荧光效应的C9碱,荧光检测定量限为300ppb, 满足国标要求。 3.实验条件 a)色谱柱: C18柱,柱长150mm,内径 4.6mm,粒径5um,或等效柱。 b)流动相:乙腈-乙酸铵缓冲液( 5+95,体积比)。 c)流速: 1.0mL/min。 d)柱温:30℃ e)检测波长:激发波长 385nm ,发射波长 505nm. 注:如需优化后的方法,请于我们联系 4.谱图 上图为 1ppm河豚毒素柱后衍生产物荧光谱图 5.所需耗材 产品编号/货号 名称 型号/规格 PR-185150 C18色谱柱 15cm*4.6mm*5um IAC-M10-3 河豚毒素免疫亲和柱 25/50T STD#M009 河豚毒素标准品 20ug/mL EQ-EVP 3024 Pribolab@毒菌毒素浓缩器 EQ-EVP24 EQ-MDS2010 Pribolab@MDS多功能光电衍生系统 MDS-3000 6.参考图片 1.方法介绍目前食品中河豚毒素的检测主要依据GB 5009.206-2016,包括小鼠生物法、液相色谱-串联质谱法、液相色谱-荧光检测法和酶联免疫吸附法。其中小鼠生物法虽为世界普遍的参考方法,但存在小鼠个体差别大导致结果异常的现象;液相色谱-串联质谱法仪器成本高,对操作人员水平要求严格;酶联免疫吸附法属于半定量方法且商品化试剂盒较少;固采用液相色谱-荧光检测法。为保证检测结果更加精准可靠,普瑞邦特对该方法进行优化,采用诺尔液相搭配Pribolab®MDS多功能光电衍生系统进行河豚毒素的检测。经液相色谱分离后,河豚毒素在Pribolab®MDS多功能光电衍生系统内与高温的氢氧化钠溶液反应,生成具有强荧光效应的C9碱,荧光检测定量限为300ppb,满足国标要求。2.实验条件a)色谱柱: C 18 柱,柱长 150mm ,内径 4. 6mm ,粒径 5 μ m ,或等效柱。b ) 流动相:乙腈 - 乙酸铵缓冲液( 5+95 ,体积比)。c ) 流速: 1. 0mL / min 。d ) 柱温: 30℃ 。e ) 检测波长:激发波长 385nm ,发射波长 505nm 。注:如需优化后的方法,请于我们联系3.谱图上图为1ppm河豚毒素柱后衍生产物荧光谱图
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