细胞中3D打印检测方案(生物3D打印)

CELLINH 编号： BPR-IK-12L600日期： 2019年3月22日 作者：JB，版本：3 生物打印协议 这是一个建议的程序，请根据你的实验需要进行调整。 协议目标 该协议的目的是提供使用 INKREDIBLE、INKREDIBLE+ 或 BIO X的 CELLINKQLAMININK 系列进行生物打印的说明，并涵盖从预打印与细胞混合、3D生物打印和离子交联的打印后过程的步骤。。 CELLINKQ LAMININK系列包括 CELLINKQ LAMININK111、CELLINKRLAMININK 1211、、(CELLINKRLAMININK4411、(CELLINKRLAMININK 521 和 CELLINKQ LAMININK+。该方案针对 CELLINKQ LAMININK 进行了优化，未稀释以及使用10+1细胞悬液稀释。更改协议中的参数可能会更改所需的交联时间。该协议使用 BIO X的气动打印头进行了优化。 所需材料 CellinkQ层板* 清除墨盒，3cC* 无菌锥形生物打印喷嘴* BioX*或InkRedible-系列*3D Bioprinter 孔板或培养皿 交联剂(包括在bioink采购中) 细胞+细胞培养基 3毫升带luer锁连接的注射器 阴/阴路厄锁适配器* 或 细胞混合器* *该产品可在CELLINK商店购买，网址为www.CELLINK.com/store/。 协议 本协议可在室温下使用打印头和打印机执行，室温在20-25℃之间。 步骤 标题 材料 说明 1 准备生物墨水 -- CELLINKQLAMININK 如果不使用细胞打印，则直接转到第3步。 将 CELLINKQ LAMININK 墨盒加热至室温。 2 将 CELLINKRLAMININK 与细孢混合 -带鲁尔锁接 头的3ml注射器-预热的CELLINKQSKIN-母/母鲁尔锁接头-注射器中的细胞悬 浮液 此时，将十份 bioink 与一份细胞悬浮液混合，注意不要将气泡引入混合物中。有关详细说明，请参阅Mixing Cells Protocol CELLINK 系列。-使用母/母鲁尔锁接头将细胞悬液转移到1ml细胞注射器(第1部分)。 -使用母/母鲁尔锁适配器将 bioink 转移到12毫升注射器(第2部分)。 -将两个注射器夹在分配装置上(第3部分)。-将两个注射器连接到混合装置(第4部分)，然后将空墨盒(第5部分)连接到混合装置的另-侧。 -轻轻按压分配装置，将两个注射器的内容物混合到空墨盒中。 注意：为避免在混合 bioink 和细胞悬液时出现气隙，请在将注射器与细胞悬液连接之前小心地用CELLINKQ LAMININK 预填充 Luer Lock 适配器。如果准备的 CELLINKQ LAMININK 数量小于2毫升，建议连接两个3毫升鲁尔锁注射器并在注射器之间来回混合直至均匀。 3 冷却并装入墨盒 -透明墨盒，装有 CELLINKRLAMININK(和电池)的3cc-无菌锥形生物打印喷嘴。 -将经过室温处理的 CELLINKQ LAMININK 放入带有所选打印喷嘴的打印头和盖子中。推荐的喷嘴尺寸为22G。降低喷嘴直径以实现更小的灯丝直径，但这也会增加 bioink 堵塞的风险。 4 打印 -生物打印机(推荐 BIO X或 INKREDIBLE系列) -孔板或培养 -生物打印结构的参数根据表1或应用说明中的打印参数。如果打印性不符合要求，将压力向上/向下调整1kPa 以挤出更多/更少的材料。 注意：如果在两次挤压之间等待时间过长，生物墨水可能会在喷嘴中变干，从而导致喷嘴堵塞。如果发生这种情况，请更换新的喷嘴。 表1.建议的最小挤压压力*(±2kPa) 用于在21-25℃下打印连续长丝，有单元/无单元。同样，“有细胞”假设一份细胞悬浮液和十份生物墨水的混合物。有关灯丝直径的信息，请参见应用笔记中的打印参数。对于高度浓缩的细胞悬浮液，压力需要增加到用于未稀释生物墨水的压力。 打印速度(毫米/秒)→喷嘴尺寸(G) 5 10 5 15 20 22 8 25 59 27 6 8 11 *注意，这只是推荐的起始压力参考。所需的实际压力将根据制备程序(生物墨水的量和生物墨水的实际温度)以及活塞在墨盒中的安装和打印表面的平整度而有所不同。该表是在打印头温度为22°C时“无细胞”和27°C“有细胞”以及使用低浓度细胞的 bioink 稀释生成的。 步骤 标题 材料 说明 5 交联 -交联液+细胞培养基 CELLINKQ LAMININK 可以使用 CaCl2 交联溶液与离子交联。 ·根据构建体的大小，将载有细胞的构建体浸入交联溶液中30秒至5分钟。去除交联溶液并用基础培养基冲洗一次构建体。 6 孵化 -细胞培养基 -交联和洗涤后，将所需培养基添加到构建体中并放入 孵化器。 -在标准培养条件(37°C、5% CO2和95%相对湿度)或根据您的应用在细胞培养基中 孵育构建体。 上海迹亚国际商贸有限公司 Gaia China Co.，Ltd. 电话Tel：021-68779823 手机Mob：13818732961，18201779599 邮箱Mail： info@gaiasciencechina.com 网址Web： www.gaiachina.com.cn ( 地址Add：上海市浦东新区张江高科园区海趣路236号1221室 ) ( ShanghaiPudong New Area Zhangjing Hi-Tech Park，236 Haiqu ) ww.gaiachina.com.cn wwgaiachinaocom.cn 协议目标该协议的目的是提供使用 INKREDIBLE 、INKREDIBLE+ 或 BIO X 的 CELLINK® LAMININK 系列进行生物打印的说明，并涵盖从预打印与细胞混合、3D 生物打印和离子交联的打印后过程的步骤。 CELLINK® LAMININK 系列包括 CELLINK® LAMININK111 、 CELLINK® LAMININK 121 、 CELLINK® LAMININK 411 、 CELLINK® LAMININK 521 和 CELLINK® LAMININK+。 该方案针对 CELLINK® LAMININK 进行了优化，未稀释以及使用 10+1 细胞悬液稀释。 更改协议中的参数可能会更改所需的交联时间。 该协议使用BIO X 的气动打印头进行了优化。所需材料Cellink®层板*清除墨盒，3cC*无菌锥形生物打印喷嘴*BioX*或InkRedible-系列*3D Bioprinter孔板或培养皿交联剂（包括在bioink采购中） 细胞+细胞培养基3毫升带luer锁连接的注射器阴/阴路厄锁适配器*或细胞混合器*