粮食谷物等中呕吐霉素等真菌毒素检测方案(真菌毒素测定)

深芬仪器深圳市芬析仪器制造有限公司 呕吐毒素(vomitoxin)，又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，化学名为3α，7a，15一三羟基草镰孢菌-9-烯-8-酮，属单端孢霉烯族化合物。由于它可以引起猪的呕吐而得名，呕吐毒素 DON 的含量超过 1mg/kg 时就会对人及牲畜的健康产生损害，欧盟分类标准为三级致癌物。 我国国标 GB2761-2011中规定了谷物及谷物制品中(包括玉米、玉米面、大麦、小麦、麦片和小麦粉)呕吐毒素 DON 的限量标准为1000ug/kg. 方案介绍：玉米中呕吐毒素含量快速定量检测方案选用 CSY-YG701 呕吐毒素荧光定量检测仪(深圳市芬析仪器制造有限公司)、电子天平、离心机、 粉粹机、涡旋振荡器检测设备，该方法操作简单，结果准确，整体测试时间20分钟左右。 一、实验所需器皿准备 1、CCSY-YG701 呕吐毒素荧光定量检测仪(深圳市芬析仪器制造有限公司) 2、电子天平(国产) 3、、离心机(国产) 3、粉粹机 (国产) 4、、旋振荡器(国产) 5、可调移液器1000-5000ul 可调移液器 20-200ul(国产) 二、样品前处理 1、准确称取2.0g粉碎均匀的谷物样本，放入50ml 离心管或者锥形瓶中，加入10ml样品提取液，用旋涡振荡器震荡3分钟混匀，混匀后即为样品液。 2、混匀后，取1.5ml均匀的样品液在离心管，并在3500转以上离心5分钟。 深圳市芬析仪器制造有限公司 联系电话：：13312922783 联系人：夏坤龙 第2页共3页 3、取离心液上清液 100ul+300ul 样品提取液震荡5秒混匀即为待测液。 三、样品检测 1、开始检测：取60ul待测液+60ul荧光标记物，放入新的离心管中，把移液器刻度调至90ul，然后在离心管中吸吐3次液体(避免气泡出现)，混匀之后取 90ul 滴入检测卡内(本步骤应该在 30s 内完成)，滴入完成之后，立即将检测卡放入恒温孵育器内孵育8分钟后进行检测。 深圳市芬析仪器制造有限公司 联系电话：： 联系人：夏坤龙 第页共页 一、粮油谷物饲料中霉菌毒素污染情况霉菌毒素是由产毒真菌在适宜的环境条件下产生的有毒代谢产物．根据联合国粮农组织资料，世界上约有 25%的谷物不同程度地受到霉菌毒素的污染而不能食用，不仅在经济上造成了巨大的损失，而且由真菌产生的霉菌毒素还能引起人畜中毒，严重时甚至可以致癌。目前已知能产生霉菌毒素的真菌有 150 余种，产生的霉菌毒素约有300 种，其中包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮及其衍生物类毒素、呕吐毒素、伏马菌素、T2 毒素等。真菌的生长和繁殖都需要一定的温、湿度条件，最适宜生长温度一般为 20～30℃，霉菌繁殖产毒的最适温度为 25～30℃。其中曲霉菌属最适宜生长温度为 30℃左右，青霉菌属为 25℃左右，镰刀菌属一般为 25℃左右。当真菌处于干燥、低温或处于与其他真菌竞争的应激情况时，就会产生霉菌毒素，由于真菌生长有一定的地域性，因此，不同区域占优势的霉菌毒素种类也不同，如在亚热带和热带地区，农产品和饲料主要被黄**素和某些赭**素污染;而玉米赤霉烯酮、呕吐霉素、赭曲霉毒素 A、T-2 毒素、烟曲霉毒素则在温带地区占有显著优势。据我国粮油谷物饲料霉变情况调查报告，真菌的检出率和含量，南方地区都大大高于北方地区，特别是 5～9 月份，南方地区的平均气温都处于 20℃以上，平均相对湿度在 80%以上，这种高温高湿的环境条件下，真菌生长繁殖最为旺盛，谷物饲料霉变大多发生在这个季节;北方的夏季虽然温度较高，但相对湿度较低，不易霉变，但常因加工、运输或贮存不当而产生霉菌毒素。二、现有检测方法比较目前真菌毒素、重金属、农药残留等有毒有害物质的检测方法主要分为两大类：即确认方法和快速方法。确认方法主要基于理化仪器设备，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高压液相色谱法(HPLC)和各种联用技术如气质联用(GC-MS)、液质联用(HPLC-MS)等;快速方法主要是基于免疫化学基础上的免疫分析方法如酶联免疫吸附法(ELlSA)、胶体金免疫层析法、荧光定量免疫层析法等。结果准确、法定认可是理化方法最大的优点，但是仪器设备价格昂贵，前处理过程复杂、操作繁琐、效率低，成本极高，因此不适用于大规模样本的筛查和日常的内控检测，一般仅用于最终的确证。酶联免疫吸附法ELISA 方法和胶体金快速检测卡是企业常用的快速检测方法，但也均存在各自的优缺点：ELISA 方法能灵敏度相对较高，且能定量检测，但操作过程相对复杂，对环境和人员要求高，环境干扰因素复杂，重复性较差;胶体金检测卡可以满足现场快速的要求，能在5-10min内快速测定，但是只能定性，且灵敏度较低，肉眼观察主观性较强，重复性差。三、粮食谷物中呕吐霉素含量快速检测解决方案方案介绍粮食谷物中呕吐霉素含量快速检测解决方案选用CSY-YG701真菌毒素荧光定量检测仪（深圳市芬析仪器制造有限公司）、电子天平、离心机、粉粹机 、涡旋振荡器检测设备，该方法操作简单，结果准确，整体测试时间15分钟左右。1、实验所需仪器：1.CSY-YG701真菌毒素荧光定量检测仪（深圳市芬析仪器制造有限公司）2.电子天平3.离心机4.粉粹机  5.涡旋振荡器6.可调移液器1000-5000ul 可调移液器 20-200ul2、样品处理：1.样品提取液配置：取一份体积的提取液加九份体积的蒸馏水，混匀后即为样品提取液。2.样品处理：准确称取2.0g粉碎均匀的谷物样本，放入50ml离心管或者锥形瓶中，加入10ml样品提取液，用旋涡振荡器震荡3分钟混匀，混匀后即为样品液。3.混匀后，取1.5ml均匀的样品液在离心管，并在3500转以上离心5分钟。4.配待测液：取离心液上清液100ul+300ul样品提取液震荡5秒混匀。3、样品检测：1.取60ul待测液+60ul荧光标记物,放入新的离心管中2.把移液器刻度调至90ul，然后在离心管中吸吐3次液体（避免气泡出现）3.混匀之后取90ul滴入检测卡内（本步骤应该在30s内完成），滴入完成之后，立即将检测卡放入CSY-YG701真菌毒素荧光定量检测仪中的恒温孵育器内孵育8分钟后进行检测。