焦油色素中含量分析检测方案(液相色谱仪)

ApplicationNews Shim-pack、Shim-pack Scepter、SHIMADZU LabTotal 及 LabSolutions 是岛津制作所株式会社在日本与其他国家的商标。岛津SHIMADZUhttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2021年3月400-650-0439 ApplicationNews 高速液相色谱分析仪i系列/LC-2060C 3D 同时分析12种焦油色素 01-00137-CN 周毅婷 对用户的好处 可自动生成不同分析条件的序列 定量评估所得分析结果，自动判别最佳条件 可自动切换多个流动相、色谱柱，有效利用夜间和休息日等时间 简介 HPLC分析中， 流动相构成和色谱柱的种类对目标组分的保持和分离影响很大。为确定适合目标组分的分析条件，需要探索大量流动相(pH值、盐浓度、有机溶剂的比例等)和色谱柱(ODS、C8、Phenyl等)，需要花费大量的时间和精力。 通过在一体型 HPLC i 系列中追加流路切换阀，最多可使用6种色谱柱，与4种流动相组合探索分析条件(方法探索)。 此外，本系统任意比例自动混合流动相的功能，仅通过事先准备好的多种溶剂即可快速探索出适合目标组分的分析条件。 本文将介绍使用i系列方法探索系统探索12种焦油色素同时分析条件的工作流程。 同时分析条件的探索 图1所示为i系列方法探索系统的外观，图2所示为流路图。切换色谱柱的流路切换阀内置于柱温箱内。 表1所示为分析条件，表2所示为此次分析对象的12种焦油色素的化合物名称。色谱柱采用6种不同的固定相。流动相采用水相、有机相，分别设置2种，使用流动相混合功能分别制备第3种。将其进行组合，共使用了9种流动相。使用上述6种色谱柱和9种流动相，自动探索6×9=54种分析条件。 图1i系列方法探索系统的外观 色谱柱 样品瓶 表1分析条件 ： LC-2060C3D ：(1)Shim-pack ScepterM C18-120" (50 mm x3.0 mml.D.， 1.9 pm) (2)Shim-pack Scepter C8-120 (50 mm x 3.0 mml.D.， 1.9 pm) (3)Shim-pack Scepter Phenyl-120 (50 mm x3.0 mml.D.， 1.9 um) (4)Shim-pack Scepter C4-300" (50 mm x 3.0 mml.D.， 1.9 pm) (5)Shim-pack Scepter PFPP-120 (50 mm x 3.0 mml.D.， 1.9 pm) (6)Shim-packM GIST C18-AQ HP" (50 mm x 3.0 mml.D.， 1.9 pm) ： 岛津1.5ml样品瓶 A1： 10 mmol/L醋酸水溶液 A2： 10 mmol/L 醋酸铵水溶液 A3：A1/A2=50：50 通过混合功能制备醋酸铵缓冲溶液 B1：乙腈(ACN) B2：甲醇 (MeOH) B3： B1/B2=50：50 ACN-MeOH 通过混合功能制备 ：0.7 mL/min ：40°℃ ：2uL ：PDA 254 nm 7min))→5%(7.01-10 min) 进样量 色谱柱 检测器 黑 自动进样器 歧管 流路切换阀 柱温箱 图2i系列方法探索系统的流路图 表212种焦油色素一览 方法探索解决方案的设定 使用专用方法开发软件创建用于探索的分析方法(批量)。设置界面如图3所示。批量创建步骤如下所示。 ①选择事先已在数据库中注册的流动相和色谱柱。②设定样品相关信息。③设定梯度模式等分析条件。梯度包括线性梯度、逐步回归等，此次使用线性梯度。④点击批量创建按钮，创建批量文件。使用该批量文件进行分析，可自动探索各种分析条件。 探索的色谱图和评估 通过探索得到的色谱图如图4~图9所示。R3(赤藓红)中含有杂质，最多检测出 13个谱峰。 图4 Shim-pack Scepter C18-120 (1)的色谱图 图5 Shim-pack Scepter C8-120 (2)的色谱图 mAU 0.51.01.52.02.5 3.03.45.04.55.05.56.06.5 min 图6 Shim-pack Scepter 苯基-120(3)的色谱图 mAU 图8 Shim-pack Scepter PFPP-120 (5)的色谱图 由于目测难以判定色谱图是否良好，因此使用多数据报告功能*定量评估目标组分的分离状态。 使用以下公式计算评估值。 使用谱峰检测数(P)和分离度(Rs、上限值：3.0)之和计算评估值(E)。 mAU 图7 Shim-pack Scepter C4-300 (4)的色谱图 图9 Shim-pack GIST C18-AQ HP (6)的色谱图 图10所示为以柱形图表示各条件评估值的结果。评估值越大，柱形图越高，意味着分离越良好。此外，图11所示为此次探索的54个条件中，评估排名前10位的条件。通过这种方式，可定量评估轻松发现最佳的流动相、色谱柱组合。 图10使用多数据报告功能评估的各条件评估值图表 探索报告总结 排序 数据文件名 评估值 峰数 分离峰数 1 210121 Soepter-ODS_10 mM Ammonium Acetate ACN50MeOH50590 93.lod 433.164 13 13 2|210121_Soepter-C8_10 mM Ammonium Acetate_ACN50Me0H50_5_90_96.lod 431.869 13 12 3210121GIST-HPC18-AQ_10 mM Ammonium Acetate_ACN50Me0H50_5_90_108.lcd 430.948 13 13 4 210121 Soepter-Phenyl_10 mM Ammonium Acetate Methanol59081.lcd 411.636 13 5 210121 _Soepter-C8_10 mM Ammonium Acetate Acetonitrile5_90_60.lcd 409.751 13 13| 6 i210121_GIST-HPC18-AQ_10 mM Ammonium Acetate Methanol5_9090.lod 407.888 13 9 7 210121_Soepter-ODS_10 mM Ammonium Acetate Buffer Acetonitrile_5_90_111.lod 407.288 13 13| 8 210121 Soepter-ODS_10 mM Ammonium Acetate_Acetonitrile 5_90_57.lcd 404.318 13 13 9 )210121_Soepter-C8_10 mM Ammonium Acetate Buffer Acetonitrile590_114.lod 402.741 13 13| 10 210121GIST-HP C18-AQ_10 mM Ammonium Acetate Acetonitrile 590_72.lod 399.946 13| 13| 图11使用多数据报告功能评估的评估值排序(前10个条件) 12种焦油色素同时分析的最佳条件 通过多数据报告获得最高评估值的分析条件如表3所示，所得色谱图如图12所示。各组分的保留时间、面积、高度、分离度如表4所示。分离度结果均在1.5以上，获得了最佳分析条件。 表3最佳的分析条件 色谱柱 ： Shim-pack Scepter C18-120 (50 mm x3.0mml.D.， 1.9 um) 流动相 ：A： 10 mmol/L醋酸铵水溶液 B：乙腈/甲醇=50：50 流速 ：10.7 mL/min 柱温 ：40℃ 进样量 ： 2 uL 检测 ： PDA 254 nm 时间程序 ：B浓度5%(0min)→90% (5 min)→80%(5.01-7 min)→5%(7.01-10 min) |结仑 使用一体型 HPLCi系列方法探索系统，可高效地开发12种焦油色素的同时分析条件。 使用本文介绍的方法开发系统工作流程时，可大幅减轻流动相、色谱柱更换、流动相制备、条件设定、实施分析、结果分析所需的时间和精力，无论经验如何，任何人都可以轻松地开发分析条件。此外，不需要人工操作，因此可有效利用夜间等时间，开发分析条件。 图12最佳分析条件的色谱图(各50mg/L)谱峰编号 参照表4、13：R3(赤藓红)的杂质 表4最佳分析条件下的分析结果 序号 化合物名称 保留时间 (min) 面积 高度 (USP) 分离度 (USP) 1 Y4(柠檬黄) 1.429 330507 137921 .- 2 R2(紫红) 1.741 289011 156399 5.33 3 B2(靛蓝胭脂红) 1.888 596078 322442 2.83 4 R102(新胭脂红) 2.123 273436 150807 4.57 5 Y5(日落黄FCF) 2.368 249399 134121 4.76 6 R40 (诱惑红AC) 2.683 235599 125620 5.96 7 G3(固绿FCF) 3.331 30969 17154 12.27 8 B1(亮蓝FCF) 3.419 90527 47121 1.64 9 R3(赤藓红) 4.051 133815 66398 5.57 10 R106(酸性红) 4.155 330115 165064 1.85 11 R104(荧光桃红B) 4.560 172510 78862 6.99 12 R105 (玫瑰红) 4.837 145987 68801 4.66 岛津应用云 ( 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) HPLC分析中，流动相构成和色谱柱的种类对目标组分的保持和分离影响很大。为确定适合目标组分的分析条件，需要探索大量流动相（pH值、盐浓度、有机溶剂的比例等）和色谱柱（ODS、C8、Phenyl等），需要花费大量的时间和精力。通过在一体型HPLC i系列中追加流路切换阀，最多可使用6种色谱柱，与4种流动相组合探索分析条件（方法探索）。此外，本系统任意比例自动混合流动相的功能，仅通过事先准备好的多种溶剂即可快速探索出适合目标组分的分析条件。本文将介绍使用i系列方法探索系统探索12种焦油色素同时分析条件的工作流程。