血液中维生素A，维生素E检测方案(液相色谱仪)

thermoscientific 热线8008105118电话4006505118www.thermofisher.com Ultimate 3000 液相在维生素A、E快速分析方面的应用 郑喆曹建明赛默飞世尔科技(中国)有限公司色谱质谱部 关键词：维生素A，维生素E 摘要 本文基于赛默飞Ultimate 3000液相色谱平台针对血液样本中维生素A、E建立了快速检测方法。维生素A、E在其适宜的浓度范围内线性关系良好(VA： 0.06-3.6 ug/mL，相关系数>0.9994； VE： 0.6-36 ug/mL，相关系数>0.9997)，三次连续进样峰面积重现性RSD0.56%满足规定的检测要求，运用本方法对血液样本中维生素A、E检测具有指导意义。 1.引言 人体能以最低限度但足够的量储都维生素A， 直到患某种疾病或其他情况，如怀孕(由于身体需要量增加)。血清维生素A低于 0.2ug/mL 表示不足，低于 0.1ug/mL 表示缺乏，膳食中维生素A或胡萝卜素不足，或由于吸收不良都可能引起缺乏，临床表现主要是眼和皮肤；血清维生素A含量增高可引起急性、慢性及致畸毒性。维生素E也叫生育酚，人血清中维生素E的正常值在11.6~46.4umol\L，缺乏易导致流产、不孕不育。过量则导致血栓性静脉炎、肺栓塞、下肢水肿、免疫力下降等问题。维生素A、E的检测在临床上具有重要意义。该方案针对的医院科室：儿保科、妇产科、消化内科、皮肤科、眼科、内分泌科。 2.1仪器与试剂 2.1.1 Thermo Fisher Ultimate 3000 DGLC双三元高效液相色谱 仪，泵： DPG-3600SD Pump， 自动进样器： WPS-3000SL ，柱温箱： TCC-3000SD，检测器： FLD-3400RS，色谱软件：变色龙Chromeleon 7.2 2.1.2试剂、标品(色谱纯，具体流动相详情请咨询赛默飞液相应用工程师) 2.2化合物信息及溶液配制 2.2.1系列标准曲线：配制VA系列标准溶液0.06ug/mL -3.6 ug/mL。配制VE系列标准溶液0.6 ug/mL - 36 ug/mL。 2.2.2配制VA内标溶液7.5 ug/mL， VE内标溶液7.5mg/mL 2.3色谱条件 色谱柱：Thermo Accucore aQ(50x3.0mm)柱温：35℃；进样量：5pL； 波长：荧光检测器波长设置见表3 流动相：详情请咨询赛默飞液相应用工程师，梯度洗脱程序(表1) 表1.梯度洗脱程序 时间 A B 流速 0.00 89 11 1.0 0.26 89 11 1.0 1.30 95 5 1.0 2.80 95 5 1.0 2.90 89 11 1.0 3.90 89 11 1.0 3.实验结果与讨论 3.1重现性测试 采用上述仪器分析方法，维生素A、E及其内标在3.9分钟内均可获得良好的色谱峰，图1为三针连续进样叠图其中维生素A、E的测试结果见表2。 图1.三针连续进样叠图(VA约0.35 ug/mL， VE 约10.5 ug/mL) 进样序号 保留时间min 峰面积counts*min 分离度EP 塔板数EP 10 2.91 593013 5.59 15798 11 2.90 588933 2.77 15801 12 2.91 590586 2.87 15710 相对标准偏差 0.12% 0.35% 表2.三针连续进样数据(VA约0.35 ug/mL， VE 约 10.5 ug/mL) 序号 时间 [min1 通道 激发波长 inm1 发射波长 灵敏度 PMT 滤光轮 inml 1 0.000 Emission_1 325.0 470.0 8 Pmt1 435nm 2 1.600 Emission 1 295.0 330.0 4 Pmt1 280nm 3 3.900 Emission_1 325.0 470.0 8 Pmt1 435nm 表3荧光检测器时间程序波长 3.2线性范围测试 采用上述仪器分析方法，对维生素A、E进行线性范围测试，线性相关系数r²均大于0.999，线性关系良好。维生素A、E线性叠图见图2，线性范围、线性相关系数等结果见表4，线性方程图见图3。 图2维生素A、E线性叠图(7个浓度点) 化合物 线性范围(ug/mL) 相关系数(r²) LOD(ug/mL) LOQ(ug/mL) 维生素A 0.06-3.6 0.9994 0.004 0.015 维生素E 0.6-36 0.9997 0.008 0.027 表4维生素A、E的线性范围、线性相关系数等 图3.维生素A、E线性标曲图 峰序号 峰名称 保留时间min R2% 相关系数% CO(截距) C1(斜率) 1 VA 0.77 99.94 99.97 12.09 456.06 4 VE 2.89 99.97 99.99 32.40 64.22 表5维生素A、E的标曲方程等 ( 仅用于研究目的。不可用于 诊 断目的。 ◎2019 Thermo Fisher Scientific I n c.保留所 有 权利。 所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的 资 产，除 非 另有指明。 ) 本文基于赛默飞Ultimate 3000液相色谱平台针对血液 样本中维生素A、E建立了快速检测方法。维生素A、E 在其适宜的浓度范围内线性关系良好（VA：0.06-3.6 ug/mL，相关系数>0.9994；VE：0.6-36 ug/mL，相关系 数>0.9997），三次连续进样峰面积重现性RSD0.56%满 足规定的检测要求，运用本方法对血液样本中维生素A、 E检测具有指导意义。