液态奶中硫氰酸根检测方案(离子色谱仪)

9001woThermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.SCIENTIFICPart of Thermo Fisher Scientific 关键词：离子色谱；电普； lonPac AS16；液态奶；硫氰酸根 Key words： lon Chromatography； conductivity； lonPac AS19； Liquidmilk； Thiocyanate； 引言 硫氰酸是无色、易挥发、有强烈气味的强酸性液体，略有毒性。硫氰酸稀溶液稳定，如加热或与氢硫酸及无机酸作用，可分解成为氰化物，有剧毒。硫氰酸盐是致甲状腺肿物质， 可阻滞甲状腺激素合成，引起甲状腺肿。有文献研究发现加入微量的硫氰酸盐和过氧化氢(分别约为12和8.5mg/L)，会在牛奶中获得较好的抗菌的乳过氧化物酶(LP)体系活动，可作为一种可靠的方法用于保存冷却过的或未冷却过的生奶。卫生部在禁止使用的添加剂名录中规定：硫氰酸根不可以作为乳及液态奶的添加剂。本研究建立了测定液态奶中硫氰酸根的离子色谱法，方法简便、快速，实用性强，回收率好，检测结果稳定可靠。 测试条件 仪器： ICS3000系统 分析柱： lonPac AS 16， 250×4mm； 保护柱： lonPac AG 16， 50×4mm 柱温：30℃ 淋洗液： KOH(淋洗液在线发生装置产生)梯度淋洗，0~13min， 45mmo/L；13.1~18min， 70mmo/L 淋洗液源：带有CR-ATC的EGC II KOH 流充：1.00mL/min； 定量环：100uL 抑制器： ASRS ULTRAⅡ4mm，外接水电抑制，电流为124mA 检测方式：抑制型电导 样品前处理方法 直接量取混合均匀的液态奶样品4mL至玻璃刻度管中(定容)，加入5mL色谱纯乙腈，涡旋混匀，常温下沉降10min。取沉降好的样品，取上清液用超纯水稀释10倍(如上清液较少，可离心后提取上清液)，过0.22 pm的滤膜，过1.0cc OnGuard RP柱除去样品中脂肪，然后进样检测。OnGuard RP柱在使用前依次用5mL甲醇和10mL水活化，放置20min 后使用。 色谱柱的选择及淋洗液梯度涤件优化 硫氰酸根是易极化阴离子，疏水性强，在常规的阴离子交换柱如IonPac AS9-HC、lonPac AS14和Ion-PacAS11-HC色谱柱上保留时间长且拖尾严重。lonPacAS16色谱柱为强亲水性的阴离子交换柱，对于疏水性离子的分离具有分离时间短、分离度高、峰形对称等特点。采用合适浓度的OH 溶液等度淋洗， SCN 在12min内实现迅速分离，分离效果非常理想。该系统用于硫氰酸根的分析，既克服了样品中基体离子的干扰，又大大缩短了SCN 的保留时间。由于硫氰酸根属于疏水性阴离子，在阴离子交换色谱柱上保留相对较强，因此一般情况下需要浓度较高洗脱能力较强的淋洗液进行淋洗，或者需要进行梯度淋洗，从而得到更好的效果。本试验选择了45 mmol/L KOH进行等度淋洗，并在SCN出峰后，使用高浓度70mmol/L的KOH淋洗液冲洗5min的色谱柱，将吸附在色谱柱上的强保留性的物质洗脱下来，然后需要平衡回到起始浓度。因此本方法选用了KOH梯度淋洗作为试验条件。 图1.标准溶液色谱图 液态奶中含有大量的蛋白和脂肪，这些需要在进入色谱柱之前除去。常用的去除奶中蛋白的方法有酸沉降、盐沉降和有机溶剂沉降。温度对沉降效果有显著影响。低温条件下(0℃)，蛋白沉降效果明显快于常温条件，但常温沉降的回收率要明显高于低温沉降。根据经验，我们选择牛奶：乙腈=4：5来沉降蛋白。沉降蛋白需要的时间为10min左右。 ( 参考文献 ) 配制硫氰酸根质量浓度为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mg/L的系列标准品溶液，按照1.2中的色谱条件进样检测，并以标准品质量浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标作图，同时用最小二乘法进行线性回归，得标准曲线回归方程为Y=0.1327X-0.0007(r=0.9996)，在0.02~1.0mg/L范围内，标准品质量浓度与峰面积值具有良好的线性关系。将标准溶液进样，以信噪比为10(S/N=10)计算，硫氰酸根的最低检出浓度为0.012mg/L， 按1.3中样品处理方法，液态奶中硫氰酸根最低检出限为0.3mg/L。 实际样品分析 利用本文建立的方法对零售市场的几种液态奶进行了本底和加标回收试验，该方法对这些样品均具有良好的适用性，色谱无干扰，检测结果见表1。可以看出加标回收率均在85%~97%之间， RSD小于3.6%，重现性良好。 图2.实际样品中硫氰酸根的含量 表1.前处理方法的重现性 硫氰酸根离子质量浓度 纯牛奶 高钙酸牛奶 酸酸乳 核桃奶 检测则中/(mg·L') 0.0811 N.D. N.D. 0.0370 原样中/(mg·L') 1.8248 N.D. N.D. 0.8325 加标量/(mg·L') 1.25 1.25 1.25 1.25 加标回收率/% 97 85 85 85 thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd i ts s ubsidiaries. Specifications， terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your ) local sales representative for details. 上海北京免费服务热线：上海浦东新金桥路27号6号楼北京东城区安定门东大街28号8008105118邮编：201206雍和大厦西楼F座7层702-715室4006505118电话：021-68654588邮编：100007传真：021-64457830电话：010-84193588传真：010-88370548 ( [1 ] . GB/T15550-95，活化乳中乳过氧化物酶体系保存生鲜牛乳实施规范. ) ( [2 ] .周享春，彭章艳.湖北农学院学报，1997，17 (3)：204-207 ) ( [3] . 周红.理化检验：化学分册，2003，39 (8)：467-468 ) ( [4] 1 . . 张小乐，闫金萍，张一江，贾长虹.环境与健康杂 志， 2007，11：910-912 ) ( [5]. Posyniak A， Zmudzki J， J.Chromatogr. A ， 2001， 914：59 ) ( 6]. 1 . 冯君，李卫华，李宏基，韩立强，杨国宇.河南工 业大学学报，2007， 28 (6)：29-31 ) ( [7] . 华麦娥.北方牧业：奶牛，2007：18 ) ( [8] . 张萍，史亚利，蔡亚岐，牟世芬.分析测试学报， 2007，26(5)：690-693 ) ( [9] 1 . . 谢丽琪，岳振峰，唐少冰，陈小霞，吉彩霓，华红 慧.分析试斤室，2008，27 (3)：5-8 ) ( [10].林立，王海波，梁立娜.食品科学，2009，14， 240-242 ) 硫氰酸根是易极化阴离子，疏水性强，在常规的阴离子交换柱如IonPac AS9-HC、IonPac AS14和Ion-PacAS11-HC色谱柱上保留时间长且拖尾重。IonPacAS16色谱柱为强亲水性的阴离子交换柱，对于疏水性离子的分离具有分离时间短、分离度高、峰形对称等特点。采用合适浓度的OH-溶液等度淋洗，SCN-在12 min内实现迅速分离，分离效果非常理想。该系统用于硫氰酸根的分析，既克服了样品中基体离子的干扰，又大大缩短了SCN-的保留时间。由于硫氰酸根属于疏水性阴离子，在阴离子交换色谱柱上保留相对较强，因此一般情况下需要浓度较高洗脱能力较强的淋洗液进行淋洗，或者需要进行梯度淋洗，从而得到更好的效果。本试验选择了45 mmol/L KOH进行等度淋洗，并在SCN-出峰后，使用高浓度70 mmol/L的KOH淋洗液冲洗5 min的色谱柱，将吸附在色谱柱上的强保留性的物质洗脱下来，然后需要平衡回到起始浓度。因此本方法选用了KOH梯度淋洗作为试验条件。