食品中有机磷化合物残留检测方案(液质联用仪)

thermoscientific仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎ 2018 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。 全新三重四极杆液质联用仪TSQ Altis同时分析检测15种有机磷化合物 陈冰赛默飞世尔科技(中国)有限公司色谱质谱部 1.前言 有机磷农药(OPs)作为一类高效、广谱的杀虫剂、除草剂等正被广泛地用于农业，但大量使用后对人、动物和环境产生的危害也日益严重。为此，世界各国投入大量资金、人力和物力，一方面加强无公害绿色农药的研制开发和应用；另一方面，制定愈来愈严格的农药残留限量标准来控制食品的质量，使食品的安全性得到提高。《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》GB2763-2016规定：敌敌畏、乐果、马拉硫磷、杀螟硫磷等15种有机磷的MRL为0.01-0.1mg/kg，而法规中对应的检测标准规定其定量限为：0.02-17.94 pg/kg。根据有机磷农药的物理化学及生物学特性，对其检测的常用方法有：薄层色谱法、酶抑制法、免疫学方法、HPLC、GC、GCMS、LCMS等。 本文建立了基于Thermo Fisher Scientific 全新一代三重四极杆串联质谱仪TSQ Altis针对15种有机磷的检测方法。该方法灵敏度高，稳定性好，完全满足国内国际标准法规要求，可为食品安全监管提供有效的技术支持。 仪器、试剂与材料 ·ThermoFisher Vanquish超高效液相色谱 · Thermo Fisher TSQ Altis三重四极杆质谱，配ESI源 ·ThermoFisher Accucore aQ C18色谱柱(2.1×100mm，2.6pm)。 ·乙腈、甲醇、甲酸(色谱纯， ThermoFisher) ·色谱条件 色谱柱： ThermoFisher Accucore aQ C18(2.1×100mm，2.6pm)；流速：0.35mL/min；流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：甲醇。柱温：35℃，进样量5pL。 表1流动相梯度洗脱程序 时间/min A B： 流速：pL/min 0.00 95 5 350 2.00 95 5 350 6.0 5 95 350 8.0 5 95 350 8.1 95 5 350 10.0 95 5 350 ·质谱条件 可加热电喷雾电离源(HESI)，正离子扫描；扫描方 式： SRM；喷雾电压(+)： 3500V；离子传输管温度：325℃； ( 鞘气压力35 arb；辅助气压力 5 arb ； 离子源温度： 3 50℃； 碰 撞气压力：1 . 5 mTorr；15种有机磷化合物的SRM离子对、S-lens电及及碰撞能等参数见表2。 ) 表2.15种有机磷化合物质谱采集参数 化合物名称 母离子(m/z) 子离子1(m/z) CE1 子离子2(m/z) CE2 RF Lens(V) 敌敌畏 220.9 *108.988 17.81 156.97 10.23 51 杀扑磷 302.9 *144.97 10.23 85.042 20.8 34 毒死蜱 349.988 197.958 19.14 *96.988 31.46 61 甲基对硫磷 263.912 *231.988 10.23 164.988 15.19 41 甲基嘧啶磷 306.038 *164.083 23.31 108 31.91 74 乐果 229.912 *198.887 10.23 124.917 22.25 36 马拉硫磷 330.962 99.042 23.46 *126.929 12.69 38 灭线磷 242.942 *130.833 21.15 172.988 15.19 45 杀螟硫磷 277.85 *249.917 14.17 141.988 17.32 69 氧乐果 214.12 182.988 12.73 *124.988 22.7 40 乙酰甲胺磷 183.92 *142.917 10.23 94.958 23.84 30 甲胺磷 141.908 *93.97 14.7 124.917 14.28 41 甲基硫环磷 228 *167.988 15.99 108.917 26.38 53 久效磷 224 *126.988 16.56 192.97 10.23 42 硫环磷 255.942 *139.917 25.32 227.988 13.22 53 备注：带*标记的是定量子离子 3结果与讨论 ·仪器灵敏度 采用上述仪器分析方法，A15种有机磷在10分钟内均可获得良好的色谱峰，图1为15种有机磷化合物在低浓度0.05-0.1ng/mL下的选择离子流提取图，各化合物灵敏度测试结果见表3。 图1.15种有机磷提取离子流色谱图 表3.15种有机磷化合物国标限量要求及灵敏度 化合物名称 英文名称 MRL* (mg/kg) *国标定量限 要求(ug/kg) LOQ(ng/mL) 敌敌畏 Dichlorvos 0.1 0.18 0.01 杀扑磷 Methidathion 0.05 3.56 0.005 毒死蜱 Chlorpyrifos 0.05 0.05 0.05 甲基对硫磷 Parathion-methyl 0.01 / 0.05 甲基嘧啶磷 Pirimiphos-methyl 0.5 0.06 0.001 乐果 Dimethoate 0.05 2.54 0.005 马拉硫磷 Malathion 0.01 1.88 0.001 灭线磷 Mocap 0.02 0.92 0.005 杀螟硫磷 Fenitrothion 0.1 8.94 0.05 氧乐果 O，O-Dimethyl-S- methylcarbamoylmethyl phosphorothioate 0.02 3.22 0.05 乙酰甲胺磷 Orthene 0.1 4.44 0.05 甲胺磷 Methamidophos 0.05 1.64 0.05 甲基硫环磷 Phosfolan methyl 0.03 / 0.005 久效磷 Monocrotophos 0.02 / 0.01 硫环磷 Phosfolan 0.03 0.16 0.005 *备注：该MRL及定量限要求均来自GB 2763-2016所规定，定量限则选取不同食品检测标准中要求最严格的标准，“/”表示化合物在该标准中被要求用气质方法检测。 线性范围测试 将高浓度标准品逐级稀释，配制成系列标准曲线考察仪器线性范围。结果由表4可知：各化合物在一定浓度范围内均呈良好的线性关系。 表415种有机磷线性测试结果 化合物名称 英文名称 RT 线性范围 线性方程 R2 敌敌畏 Dichlorvos 6.04 0.05-100 Y=1.072eX+4.0031e4 0.9988 杀扑磷 Methidathion 6.50 0.05-100 Y=1.629eX+2.072e5 0.9947 毒死蜱 Chlorpyrifos 7.51 0.05-100 Y=3.056e+X+1.211e4 0.9979 甲基对硫磷 Parathion-methyl 6.17 0.05-100 Y=1.028e5X+1.553e5 0.9940 甲基嘧啶磷 Pirimiphos-methyl 7.07 0.05-100 Y=2.853eX+1.54e6 0.9980 乐果 Dimethoate 5.32 0.05-100 Y=8.883eX+1.38e6 0.9921 马拉硫磷 Malathion 6.68 0.05-100 Y=3.173eX+3.424e6 0.9946 灭线磷 Mocap 6.89 0.05-100 Y=1.567eX+1.047e6 0.9981 杀螟硫磷 Fenitrothion 5.75 0.05-100 Y=2.63e4X+2.521e4 0.9927 氧乐果 O，O-Dimethyl-S- methylcarbamoylmethyl phosphorothioate 3.05 0.05-100 Y=1.062eX+2.706e4 0.9998 乙酰甲胺磷 Orthene 1.82 0.05-100 Y=8.166e5X-1.68e5 0.9998 甲胺磷 Methamidophos 1.24 0.05-100 Y=5.652eX+8.038e5 0.9940 甲基硫环磷 Phosfolan methyl 4.96 0.05-100 Y=2.425eX+2.378e6 0.9939 久效磷 Monocrotophos 4.91 0.05-100 Y=1.149eX+1.334e5 0.9941 硫环磷 Phosfolan 5.75 0.05-100 Y=1.937eX+2.531e6 0.9933 thermoscientific 稳定性测试 将1.0 ng/mL混合标准工作溶液连续进样6针，考察仪器稳定性，实验结果见表5，15种有机磷重复进样6针的峰面积相对标准偏差RSD%均≤4.9%，，证明仪器稳定性良好。 表5.1ppb有机磷混标连续进样6针峰面积重现性 化合物 A1 A2 A3 A4 A5 A6 RSD% 敌敌畏 94033 89524 93938 91601 91423 93436 1.9 杀扑磷 272750 257325 248501 252702 255143 261541 3.3 毒死蜱 56692 54601 52001 50533 55635 50806 4.9 甲基对硫磷 130868 125087 122062 118203 132551 118556 4.9 甲基密啶磷 6089772 6065489 6069849 6025354 6040358 6106310 0.5 乐果 2263686 2222475 2196039 2063632 2272350 2208516 3.4 马拉硫磷 4002653 3860133 3852961 3896871 3906530 3864650 1.4 灭线磷 4353592 4414415 4443717 4348031 4403470 4349884 0.9 杀螟硫磷 36349 35898 34404 38892 34717 37624 4.7 氧乐果 914308 935138 946830 921962 930078 952368 1.6 乙酰甲胺磷 671937 671627 694696 696104 685173 685930 1.6 甲胺磷 1130936 1117490 1085645 1193544 1136946 1092141 3.5 甲基硫环磷 2695327 2687036 2657980 2653994 2688314 2654617 0.7 久效磷 239481 248241 240599 238870 240658 244368 1.5 硫环磷 2396205 2397634 2352952 2328405 2393178 2323412 1.5 4总结 本文建立了三重四极杆液质联用仪 (TSQ Altis) 同时分析15种有机磷化合物的检测方法。由实验结果可以看出，基于Thermo Fis-her TSQ Altis建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围，同时具备优异的重现性。本方法用用于有机磷类化合物的日常分析检测。 热线8008105118 ( 电话4006505118 www.thermofisher.com ) ( 所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产，除 非 另有指明 。 ) 本文建立了三重四极杆液质联用仪（TSQ Altis）同时分析15种有机磷化合物的检测方法。由实验结果可以看出，基于Thermo Fisher TSQ Altis建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围，同时具备优异的重现性。本方法可用于有机磷类化合物的日常分 析检测。