食品中药物残留检测方案(液相色谱仪)

HITACHI 日立1nspire the Next 日立食品中药物残留检测解决方案 序言 随着人们物质生活水平的提升，人们对食品质量提出了更高的要求，食品安全问题也越来越受到人们的重视。食品中药物残留是目前人们关注的热点食品安全问题之一。在养殖畜牧业中，饲养者为达到经济效益，避免病害等目的，不可避免会适用一些药物用于饲养。大量或不规范使用这些药物，便会造成动物组织中相关药物残留超标。药物残留对人体的危害一般表现为慢性毒性作用，主要表现为：毒性作用，过敏反应，致畸致癌致突变和耐药性等。因此严格监控动物源性食品中药物含量非常重要。 高效液相色谱法分离效率好，检测灵敏度高是检测食品中药物残留最常用的方法，可同时检测多种药物残留，实现定性定量分析。本报告参考食品安全国家标准，使用日立高效液相色谱系统，对动物源性食品中几种常见的药物残留进行分析和检测。 目录 1. 牛奶中甲砜霉素霉留量的测定...... .2 2. 动物性食品中对乙酰氨基酚残留的量测定.. .3 3.牛奶中11种喹诺酮类药物残留的检测... ..54牛奶中左旋咪唑残留量的测定...... ..6 牛奶中土霉素，四环素，金霉素，强力霉素残留量测定... .8 5 6 .鸡可食性组织中地克珠利列留量的测定. 10 7 水产品中磺胺类药物残留量的测定........ 11 8动物性食品中克伦特罗残留量的测定..... 9 植物源性食品中喹啉铜残留量的测定 巧 10. 牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定.3.. 1.牛奶中甲砜霉素残留量的测定 甲砜霉素是氯霉素的甲砜衍生物，一种合成的广谱抗菌药。本报告参考食品安全国家标准 GB 29689-2013，应用日立 Chromaster系统，测定了牛奶中的甲砜霉素残留。样品经固相萃取处理后，通过反相色谱法分离，在紫外检测器225 nm 波长下对样品中的甲砜霉素进行了检测。对标准样品溶液进行连续进样测定(n=6)，确认了方法的重复性良好。标准溶液在 0.05mg/L~2.00 mg/L 浓度范围内也获得了良好的线性关系。样品的加标回收率结果也满足标准要求。结果表明，该方法适用于牛奶中甲砜霉素素留的分析。 > 标准样品测定例 标准样品测定 ■分析条件 甲砜霉素标准样品的色谱图(浓度： 0.5 mg/L) ■标准曲线 ■重复性(0.5 mg/L 甲砜霉素标准溶液， n=6) 成分 甲砜霉素 NO. RT (min) Area 1 12.188 21687 2 12.182 21713 3 12.183 21879 4 12.180 21664 5 12.200 21681 6 12.187 21802 AV. 12.187 21738 RSD% 0.06% 0.39% 甲砜霉素标准溶液在 0.05 mg/L ~ 2.00 mg/L 浓度范围内r²=1.0000，线性关系良好。甲砜霉素标准溶液重复性实验表明，保留时间重复性=0.06%，峰面积重复性=0.39%，重复性良好。 > 样品测定例 ■样品前处理方法 ■样品测定 牛奶样品的色谱图 对市售的牛奶中的甲砜霉素残留进行了分析，样品中未林测到甲砜霉素成分。并在样品中添加了甲砜霉素标准品，进行了样品加标回收率的测定，甲砜霉素在 50 ug/kg 的添加浓度水平上的回收率为88.8%~91.6%，在国标 GB 29689-2013 规定的70%~110%范围内，结果准确可靠。 2.动物性食品中对乙酰氨基酚残留的量测定 对乙酰氨基酚，别名扑热息痛，属于乙酰苯胺类解热镇痛药，常用于动物风湿症、肌肉痛、神经痛、创伤后疼痛及各种炎症引起的发热等。需要注意的的剂量大可引起肝脏损害，严重者可致昏迷甚至死亡。 本报告参考食品安全国家标准 GB 29683-2013，应用 Primaide 系统，建立了一种动物性食品中对乙酰氨基酚残留分析的高效液相色谱法。该方法适用于猪的肌肉组织中对乙酰氨基酚残留量的测定。 > 标准样品测定例 ■标准样品测定例 ■分析条件 乙酰氨基酚标准溶液在0.025 mg/L~2.0 mg/L 浓度范围内获得了R?=1.000的良好线性关系。乙酰氨基酚标准溶液重复性实验表明，保留时间重复性=0.08%，峰面积重复性=0.34%，重复性良好。 >木样品测定例 对猪肉样品中的对乙酰氨基酚残留进行了分析，并在样品中添加了对乙酰氨基酚标准品，进行了样品加标回收率的测定，回收率在87.24%，~88.16%之间。 3.牛奶中11种喹诺酮类药物残留的检测 喹诺酮类(4-quinolones)， 又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是人工合成的含4-喹诺酮基本结构的抗菌药。喹诺酮类抗生素是一类人畜通用的药物。因其具有抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性和毒副作用小等特点，被广泛应用于畜牧、水产等养殖业中，由于喹诺酮类药物在动物机体组织中的残留，人食用动物组织后喹诺酮类抗生素就在人体内残留蓄积，造成人体疾病对该药物的严重耐药性，影响人体疾病的治疗。因此其残留问题引起广泛关注。 本文参考国标 GB 29692-2013牛奶中喹诺酮类药物多残留的测定中的方法二，使用Chromaster@荧光检测器对牛奶中的11种喹诺酮类药物残留进行了分析测定。11种喹诺酮类药物在参考的分析条件下得到了较好的分离，达氟沙星检测限可达 0.1 ug/kg (国标为 7.5ug/kg)， 充分体现了 Chromaster@荧光检测器高灵敏度的特点。 > 标准样品测定例 ■分析条件 标准样品的色谱图 (氟甲喹0.1 mg/L， 达氟沙星0.06 mg/L，其余各0.20 mg/L) ■线性 ■重现性(氟甲喹0.1 mg/L， 达氟沙星0.06 mg/L，其余各0.20mg/L 标准混合液， n=6) 1400000 达氟沙星 1200000 1000000 800000 600000 400000 200000 R-=1.0000 TT TT TT TMMMMT 0.0 0.4 0.8 1.2 1.( 浓度(mg/L) 成分 保留时间(%RSD) 诺氟沙星 0.03 0.23 氧氟沙星 0.03 0.36 环丙沙星 0.03 0.40 培氟沙星 0.03 0.31 洛美沙星 0.03 0.49 达氟沙星 0.03 0.29 恩诺沙星 0.03 0.46 沙拉沙星 0.03 0.48 二氟沙星 0.02 0.47 噁喹酸 0.02 0.43 氟甲喹 0.01 0.46 所测11种喹诺酮成分的标准曲线，在标准混合液中氟甲喹浓度为 0.025~0.8 mg/L， 达氟沙星浓度为 0.015~0.48 mg/L，其余各成分浓度为0.05~1.6 mg/L 的的范围内，得到了R?≥0.9999 良好的线性关系。重复性实验表明，保留时间重复性=0.01%，峰面积重复性=0.46%，重复性良好。 > 样品测定例 样品前处理方法 样品的测定例 对市售的牛奶样品进行了测定，在确认未检出11种喹诺酮类药物后，对牛奶样品添加了喹诺酮类标准品后进行分析，结果确认在添加后的牛奶样品中检出了11种喹诺酮类药物。 4.牛奶中左旋咪唑残留量的测定 左旋咪唑是一种家畜抗寄生虫感染药物，3主要用于控制牛、羊、马、猪等动物胃肠道、肺中的线虫。不合理使用左旋咪唑会造成动物源食品中药物残留，从而危害人体健康。为保证动物源性食品的安全性，各国都制定了严格的限量标准。中华人民共和国农业部发布的《动物性食品中兽药最高残留限量》规定牛羊猪等动物的肌肉，脂肪等组织中左旋咪唑限量值为 10ug/kg。本文参考食品国家安全标准 GB29681-2013，应用日立 Primaide 系统测定了牛奶中左旋咪唑残留。 > 标准样品测定例 I标准样品测定例 ■分析条件 RSD% 0.10% 0.44% 在紫外检测器220nm 波长下对样品中左旋咪唑进行检测，左旋咪唑标准溶液在0.1mg/L~20mg/L 浓度范围内 r2=1.0000，线性关系良好。对 5.0mg/L 的标准溶液进行重复性测定(n=6)，保留时间重复性=0.10%，峰面积重复性=0.44%，重复性良好。 样品测定例 M样品前处理方法 加标回收率实验 对牛奶中左旋咪唑残留进行分析，并在样品中添加了左旋咪唑标准品，进行了加标回收率的测定，回收率在 70.0%~78.7%之间，符合GB29681-2013准确度要求。 5.牛奶中土霉素，四环素，金霉素，强力霉素残留量测定 四环素类抗生素是一类光谱抗生素，包括土霉素，四环素，金霉素，强力霉素等。奶牛饲养中经常使用四环素类抗生素用于疾病治疗及预防。本文参考 GB/T 22990-2008中的检测方法，应用 Primaide系统，对牛奶中四环素类抗生素进行分析 > 标准样品测定例 分析条件 红线性 四环素类抗生素在62.5~2000 pg/L 的浓度范围内线性关系良好， R2>0.9997。重现性结果良好。 > 样品测定例 样品前处理方法 样品的测定例 四环素类抗生素混合标准品、牛奶空白样品与添加样品的色谱重叠图 Peaks： 1. oxytetracycline； 2. tetracycline ；3. chlortetracycline： 4. doxycycline 对牛奶样品进行测定，未检出土霉素，金霉素和强力霉素。对牛奶样品进行加标回收率实验，在50~100ug/kg 的添加浓度下，牛奶中四环素类抗生素的加标回收率在85%~98%之间，符合 GB/T 22990-2008规定的相应浓度下的回收率要求。 6.鸡可食性组织中地克珠利残留量的测定 地克珠利是一种防治家畜寄生虫药物。本报告参考食品安全国家标准 GB 29701-2013，应用日立 Primaide 系统测定了鸡可食性组织中的地克珠利残留。样品经故乡萃取处理后，通过反相色谱法分离，在紫外检测器 278nm 波长下对样品中的地克珠利进行检测。结果表明，该方法简单快速，适用于鸡肉中地克珠利残留量的测定。 标准样品测定例 |标准样品测定例 l分析条件 0.014 色谱柱 0.012 ： HITACHI LaChrom C18(5 um) 浓度(mg/L) 10.859 139810 RSD% 0.05% 0.23% 地克珠利基质匹配标准溶液在 0.2mg/L~10.0mg/L 浓度范围内r²=0.9997，线性关系良好。对5.0 mg/L 地克珠利基质匹配标准溶进行重复性实验(n=6)，保留时间重复性=0.05%，峰面积重复性=0.23%，重复性良好。 > 样品测定例 ■样品前处理方法 ■加标回收率实验 鸡肉空白样品与加标样品的色谱重叠图 对鸡肉中的地克珠利残留进行分析，并在样品中添加了地克珠利标准品，进行了样品加标回收率的测定，地克珠利在 0.25 mg/kg 和 2.50 mg/kg 的添加浓度水平上回收率为82%~113.6%，符合 GB 29701-2013 对准确度的要求。 7.水产品中磺胺类药物残留量的测定 磺胺类药物为人工合成的抗菌药，它具有抗菌谱较广等诸多优点。在畜禽和水产养殖中使用十分普遍。本报告参考农业部958号公告-12-2007，应用 Primaide 系统，采用固相萃取净化法进行样品前处理，对水产品中磺胺类药物进行测定，结果表明，该方法准确可靠，可适用于水产品中磺胺类药物残留量的测定。 标准样品测定例 成分 磺胺嘧啶 磺胺噻唑 磺胺甲基嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺氯哒嗪 磺胺6-甲氧嘧啶 项目 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 AV. 12.382 1119438 13.948 1131915 17.943 1254548 28.344 1130912 32.999 1187012 34.006 1237947 RSD% 0.03% 0.50% 0.03% 0.43% 0.03% 0.30% 0.01% 0.49% 0.01% 0.45% 0.01% 0.46% 成分 磺胺甲基异唑 磺胺多辛 磺胺异噁唑 磺胺二甲氧哒嗪 磺胺喹恶啉 项目 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 AV. 35.259 1300354 35.845 1296107 38.304 1245407 47.705 1250733 49.424 904303 RSD% 0.01% 0.47% 0.02% 0.44% 0.02% 0.42% 0.01% 0.48% 0.01% 0.44% 线性 对 4.0 mg/L 磺胺类标准混合溶液进行重现性实验，得到了良好的保留时间和峰面积重 现性。磺胺类各成分在 0.01~10.0 mg/L 标准溶液的浓度范围内均得到了 R²=1.0000的良好线性关系。 样品前处理方法 虾仁样品制备：将样品解冻，切成小块，待用。提取：取混合均匀的虾肉样品5.00g， 加入25mL乙酸乙酯，超声1 min， 加入5g无水硫酸钠，均质1 min， 旋涡混匀1 min，在12000r/min转速下离心10 min。将乙酸乙酯层小心转移到梨形瓶中。再向原离心管中加入25 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并乙酸乙酯层，于30°C水浴中减压浓缩至近干。净化：用1mL甲醇溶解残渣，再加入1%2mL乙酸溶液，超声1min， 转到离心管中，再重复洗净一次。向离心管中加入8 mL正己烷，涡旋混匀，在10000r/min转速下离心5 min， 弃上层，再加入8mL正己烷重复一次。下层加入6mL纯水稀释。 保留时间(min) 空白样品与添加样品的色谱重叠图 ■测定结果 成分峰编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 添加标液浓度(ug/mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 回收率(%) 87.03% 84.70% 92.37% 86.90% 88.67% 86.97% 99.00% 86.93% 86.70% 88.70% 85.97% 对虾仁样品中的磺胺类药物残留进行测定，并在样品中添加了磺胺类标准混合液，进行了各成分的加标回收率的测定，结果见上表，回收率结果良好，符合农业部958号公告-12-2007的要求。 8.动物性食品中克伦特罗残留量的测定 克伦特罗，为强效选择性β2-受体激动剂，有强而持久的松弛支气管平滑肌的作用，用于治疗哮喘。克伦特罗可促进动物生长，改善动物体内脂肪分配，并增加瘦肉率。20世纪90年代，我国错误地将其作为科研成果开始以饲料添加剂引入并推广，被俗称为“瘦肉精”。。一连串因食用含克伦特罗的食物而引起的中毒事件发生后，使克伦特罗成了世界上普遍禁用的饲料添加剂。1997年以来，我国有关行政部门多次明令禁止畜牧行业生产、销售和使用盐酸克伦特罗。本报告参考 GB/T 5009.192-2003中第二法高效液相色谱法，应用 Primaide 系统，测定了动物性食品中克伦特罗的残留量。 > 标准样品测定例 标准样品测定例 ■分析条件 色谱柱 ：HITACHI LaChrom C18(5 um)4.6 mmI.D.×250mm 流动相 ：乙腈/0.02 mol/L醋酸铵=30/70 流速 ： 1.0mL/min 柱温 ：25°C 检测波长：DAD：220-400 nm (244 nm) 进样量 ：20uL 标准样品的色谱图(普度：1.00 mg/L) ■重现性(1.00mg/L标准溶液， n=6) 成分 保留时间(%RSD) 峰面积(%RSD) 克伦特罗 0.07 0.31 ■线性 盐酸克伦特罗在0.05~5.00 mg/L标准溶液的浓度范围内，得到了R²=0.9999 良好的线性关系。对 1.00 mg/L 标准溶液进行重现性实验(n=6)，保留时间重复性=0.07%，峰面积重复性=0.31%，重复性良好。 >样品测定例 样品前处理方法 [猪瘦肉、猪肾、猪肝样品] 新鲜生肉、肾、肝绞碎后，称取10.00g， 用20 mL 0.1 mol/L高氯酸溶液匀浆，超声20min， 80 ℃水浴加热30 min， 离心15 min。倾出上清液，沉淀再用高氯酸溶液洗涤，再提取 离心，合并上清液。用氢氧化钠溶液调pH值至9.5±0.1， 再离心10 min， 上清液加入8g氯化钠， 25mL异丙醇十乙酸乙酯(40+60) 震荡提取20 min。放置5 min， 用吸管将上层有机相移至旋转蒸发瓶中，重复震荡提取。 浓缩 合并有机相， 于60℃旋转蒸发器上浓缩至干。用1 mL 0.1 mol/L磷酸二氢钠缓冲液 (pH6.0)溶解残留物，洗涤三次转移至5mL容量瓶，并定容至刻度。 依次用10mL乙醇、3mL水、3mL 0.1 mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH6.0)，3mL水冲洗净化 弱阳离子交换柱，将上提取液至弱阳离子交换柱上，弃去流出液，分别用4mL水和4mL乙醇冲洗柱子，弃去流出液，用6mL乙醇+浓氨水(98+2)冲洗柱子，收集流出液。 分析准备>流出液在N，-蒸发器上浓缩至干，试试残渣中加入500uL流动相，振摇，待机进样分析。 猪瘦肉的空白样品与添加样品的色谱重叠图(添加0.05 mg/kg标准样品) 对猪瘦肉动物性食品进行了盐酸克伦特罗残留量的测定，在样品中未检测到克伦特罗。因此，在样品中添加克伦特罗标准样品进行测定，测到了克伦特罗标准品。 9.植物源性食品中喹啉铜残留量的测定 喹啉铜是一种广谱、高效、低毒的有机铜螯合物，对真菌和细菌性病害具有良好的预防和治疗作用。在作物表面能形成一层严密的保护膜，用于防治蔬菜中的霜霉病及水果的轮纹病，此外，还用作种子处理剂和木材加工的防腐剂。但是喹啉铜使用不当会污染环境，并在生物体内富集，进而危及人类健康。加强该药在农作物中的残留量检测对保护人们的身体健康具有重要意义。 本文参考标准 GB 23200.117-2019《食品安全国家标准植物源性食品中喹啉铜残留量的测定高效液相色谱法》，应用 Primaide 高效液相色谱仪对植物源性食品中的喹啉铜残留量进行了分析测定。 标准样品测定例 ■标准样品测定例 分析条件 喹啉铜在0.05~5.0 mg/L 的标准工作液的浓度范围内， 得到了r=0.9999 的良好线性关系。对 2.0 mg/L标准溶液进行重现性实验(n=6)，保留时间重复性=0.03%，峰面积重复性=0.37%，重复性良好。 > 样品测定例 ■样品前处理方法 ■样品的测定例 对市售的苹果、玉米油、大米和五香粉样品进行了测定，在确认未检出喹啉铜后，对样品添加了喹啉铜的标准品后进行分析，结果确认检出了喹啉铜。喹啉铜加标回收率为65.5%~75.0%。 10.牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定 阿维菌素类药物是治疗肠道寄生虫的一系列大环内酯衍生物。本文参考 GB 29696-2013中的检测方法。应用 Chromaster 系统，对牛奶中阿维菌素类药物进行分析。样品经提取和SPE 净化，衍生化反应，采用 Hitachi LaChrom C18 色谱柱(250mmx4.6mm， 5um)分离，以乙腈-水为流动相，等度洗脱，在荧光检测器下检测，外标法定量。本方法检出限分别为0.060 ug/kg(埃普利诺菌素)， 0.036 ug/kg(阿维菌素)， 0.043 ug/kg(多拉菌素)和 0.063 ug/kg (伊维菌素)，优于国家标准(检出限均为 1 ug/kg)。 标准样品测定例 标准样品测定例 l分析条件 色谱柱 ：HITACHI LaChrom C18 (5 um)4.6mmI.D.X250mm流动相 ：乙腈/水=92/8流速 ：1.0mL/min柱温 ：30°C检测波长 ： FLD：Ex=365 nm： Em=475nm进样量 ：20pL 色谱峰：1.埃普利诺菌素；2.阿维菌素：3.多拉菌素；4.伊维菌素，各50 ug/L 重现性(浓度各 50 pg/L， n=6) Name 埃普利诺菌素 阿维菌素 多拉菌素 伊维菌素 NO. RT(min) Area RT(min) Area RT(min) Area RT(min) Area AVG 17.741 420346 19.929 504426 26.144 525703 36.042 466566 SD 0.008 1462 0.013 2341 0.014 2528 0.021 1629 RSD 0.04% 0.35% 0.07% 0.46% 0.05% 0.48% 0.06% 0.35% ■检出限(S/N=3) 成分 埃普利诺菌素 阿维菌素 多拉菌素 伊维菌素 LOD(ug/kg) 本方法 0.060 0.036 0.043 0.063 LOD(ug/kg) 国标规定值 1 1 1 1 阿维菌素类药物在2~500 ug/L 的浓度范围内线性关系良好， R2≥0.9999。重现性良好。 样品测定例 ■样品前处理方法 样品的测定例 牛奶空白样品与添加样品的色谱重叠图色谱峰：1.埃普利诺菌素；2.阿维菌素；3.多拉菌素；4.伊维菌素 对牛奶样品进行测定，未检出埃普利诺菌素，阿维菌素，多拉菌素，伊维菌素。对牛奶样品进行加标回收率实验， 在10 ug/kg 的添加浓度下，牛奶中阿维菌素类药物的加标回收率在 84.53%~101.18%之间，符合GB 29696-2013 准确度要求。   随着人们物质生活水平的提升，人们对食品质量提出了更高的要求，食品安全问题也越来越受到人们的重视。食品中药物残留是目前人们关注的热点食品安全问题之一。在养殖畜牧业中，饲养者为达到经济效益，避免病害等目的，不可避免会适用一些药物用于饲养。大量或不规范使用这些药物，便会造成动物组织中相关药物残留超标。药物残留对人体的危害一般表现为慢性毒性作用，主要表现为：毒性作用，过敏反应，致畸致癌致突变和耐药性等。因此严格监控动物源性食品中药物含量非常重要。  高效液相色谱法分离效率好，检测灵敏度高是检测食品中药物残留最常用的方法，可同时检测多种药物残留，实现定性定量分析。本报告参考食品安全国家标准，使用日立高效液相色谱系统，对动物源性食品中几种常见的药物残留进行分析和检测。