食品饮料中溶菌酶检测方案

参考国标 SN/T 4675.12-2016采用 TSKgel Phenyl-5PW RP分析溶菌酶 【基本信息】 溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase)，是一种能水解细菌中黏多糖的碱性酶。溶菌酶主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与 DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复合体，使病毒失活。该酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、乳汁等液体，以以微生物也含此酶，其中以蛋清含量最为丰富。其中根据其来源的不同，可以将其分为四类，分别是植物溶菌酶、动物溶菌酶、微生物溶菌酶以及蛋清溶菌酶。 中文名称 英文名称 CAS 登录号 相对分子量 溶菌酶 lysozyme 9001-63-2 14000-15000Da 【试样的配制】 取溶菌酶(0.1%酒石酸溶解)适量，加流动相B溶解并稀释制成每1ml中各约含5 ug 或50ug， 作为样品。 【分析条件】 色谱柱： TSKgel Phenyl-5PW RP (7.5cm×4.6 mmI.D) 流动相： A： 0.2% TFA 50% ACN B：0.2% TFA 1% ACN 梯度： 时间/min 流动A/% 流动B/% 0 0 100 3 0 100 10 30 70 15 40 60 20 50 50 25 100 0 34 100 0 36 0 100 40 0 100 流速：0.8 mL/min 柱温：：30°℃ 紫外波长：280nm 荧光波长：激发波长 (Aex) 276 nm 发射波长 (em) 345 nm 进样量：50.0uL 样品：溶菌酶5 ug/mL 以及 50 ug/mL 【分析结果】 图1：：溶菌酶 5 ug/mL荧光检测器分离图谱 Peak Peak Name Ret.Time No. min Asym.Resolution (USP) Plates (USP) EP 1 24.552 BMB* 0.99 n.a. 69842 Maximum Minimum 0.99 0.00 69842 0.99 0.00 69842 Sum 100.00 7571356.578331955963.09 Time [min] 图2： 溶菌酶 50 ug/mL 紫外检测器分离图谱 No. min ype Asym.Resolution (USP) Plates (USP) EP 1 24.403 BMB 0.98 n.a. 108059 Maximum Minimum 0.98 0.00 108059 0.98 0.00 108059 Sum 100.00 3.6790 19.02 【结论】 采用东曹 TSKgel Phenyl-5PW RP 4.6 mm (I.D.) *75 mm 柱子，分析溶菌酶，分离效果优秀，达到国家标准的分离要求。 参照国标《SN/T 4675.12-2016出口葡萄酒中溶菌酶的测定》采用东曹TSKgel Phenyl-5PW RP（4.6 mmI.D.×75 mm）柱子，分析溶菌酶，分离效果优异，达到国家标准的分离要求。