化妆品中氮芥、斑蝥素检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-151Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-354 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GCMS法测定化妆品中氮芥和斑蝥素的含量 GCMS-354 摘要：本文采用岛津气相色谱质谱联用仪 GCMS-QP2020 NX 建立了化妆品中氮芥和斑蝥素的检测方法。样品以三氯甲烷提取化妆品中的氮芥、斑蝥素等两种组分，经气相色谱质谱联用仪分析，分别以氮芥、斑蝥素的保留时间和特征离子定性，以定量离子的峰面积定量。结果表明：在0.1~10 ug/mL浓度范围内，氮芥和斑蝥素线性关系良好；将浓度为 0.5 ug/mL混标溶液重复进样6次，峰面积 RSD 小于3.62%，重复性良好；在8、20和50 ug/g 加标水平下，氮芥和斑蝥素回收率在 84.3~103.2%之间。本方法可有效应对国家药监局新版通告中氮芥和斑蝥素的检测方法。 氮芥是最早用于临床并取得突出疗效的抗肿瘤药物，是一种强起疱剂和局部刺激剂，能刺激皮肤毛发的生长，但它是一种高毒性物质，若盐酸氮芥水溶液滴到皮肤上迅速透皮吸收，会引起大疱红肿疼痛甚至组织坏死溃疡，严重的可以通过呼吸道吸收引起气道水肿和肺水肿。斑蝥素外用对皮肤有止痒改善局部神经营养及刺激毛根、促进毛发生长作用，但是毒性较大。《化妆品安全技术规范》(2015年版)明确规定将氮芥和斑蝥素列为化妆品中禁用组分。 氮芥和斑蝥素原有检验方法采用气相色谱法测定； 实验部分 1.1仪器 气相色谱质谱联用仪： GCMS-QP2020 NX 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-5 Sil MS， (30 m×0.25mm×0.25um) 进样方式：分流进样 进样口温度：230℃ 柱温程序：50℃_15℃ /min 150℃(5min) _30℃ /min_230℃ (1min) 载气控制方式：恒线速度(36.3cm/s) 该方法采用三氯甲烷提取，提取到的杂质较多，尤其是中药提取物中的生物碱成分多，严重干扰测定，常导致气相色谱法测定的干扰峰很多，对疑似阳性样缺乏确证手段。2019年3月，国家药监局发布通告，对《化妆品中斑蝥素和氮芥的检测方法》进行更新，将原来的气相色谱法更改为气相色谱-质谱联用法。 本文参照国家药监局新版通告，建立了化妆品中氮芥和斑蝥素的 GCMS 测定方法。该方法快速、有效，适用于化妆品中氮芥、斑蝥素含量的测定。 分流比：10：1 进样量：1uL 离子源温度：200℃ 接口温度：230℃ 采集方式： SCAN/SIM 同时采集 ( 溶剂延迟时间：5min ) 检测器电压：调谐电压 +0.3 kV 样品前处理 样品前处理流程如图1所示 结果与讨论 2.1标准色谱图 氮芥和斑蝥素标准品的色谱图及质量色谱图如图1和图2所示，相关信息见表1。 图1 氮芥和斑蝥素标准溶液色谱图((浓度1.0ug/mL) 图2 氮芥和斑蝥素(100ng/mL)质量色谱图 表1 氮芥和斑蝥素选择离子信息 No. 化合物名称 保留时间 定量离子 定性离子 (min) (m/z) (m/z) 氮芥 5.544 106 63，120 2 斑蝥素 12.414 128 96，70 2.2标准曲线 用三氯甲烷溶解并稀释标准品，配制 100 ug/mL混合标准工作溶液；用三氯甲烷为溶剂继续稀释，得到浓度为0.1、0.5、1.0、2.5、5.0和10 ug/mL 的校准工作溶液。进样测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，氮芥和斑蝥素的线性方程及相关系数如图3所示。 图3 氮芥和斑蝥素的标准曲线及相关系数 2.3检出限及重复性 取浓度为 0.5 ug/mL 的混合标准溶液，连续进样6次，考察仪器重复性，以0.1 ug/mL的混合标准溶液结果计算检出限(S/N=3)，各组分峰面积 RSD %及检出限结果见表2。 表 2 氮芥和斑蝥素线性相关系数、重复性及检出限结果 化合物名称 相关系数(r) 峰面积RSD(%) 检出限 方法要求检出限 (n=6) (ug/g) (ug/g) 氮芥 0.9998 3.62 0.02 0.3 斑蝥素 0.9996 2.76 0.03 0.5 备注：方法要求检出限为2019年3月国家药监局更新《化妆品中斑蝥素和氮芥的检测方法》中的检出限。 2.4实际样品检测与回收率测试 按照1.3样品前处理过程进行某育发化妆品的测试，未检出该化妆品中含有氮芥、斑蝥素(图4)。按同法对该育发化妆品进行加标测试，加标浓度为8、20和50 ug/g， 各浓度各平行3次，平均回收率结果见表3。 —— 图4化妆品提取液色谱图 图5化妆品加标回收提取液色谱图(加标浓度50 ug/g) 表3 加标回收率(n=3) No. 化合物名称 8pg/g 20 pg/g 50pg/g 平均回收率( (%) 平均回收率(%) 平均回收率(%) 1 氮芥 84.6 92.6 84.3 2 斑蝥素 91.9 103.2 101.9 结论 本文利用岛津GCMS-QP2020 NX 气相色谱质谱联用仪建立了测定化妆品中氮芥和斑蝥素含量的方法。在0.1~10 ug/mL 浓度范围内，氮芥和斑蝥素标准曲线线性良好，相关系数大于0.9996，检出限分别为0.02和0.03 ug/g， 低于方法中要求的检出限。将 0.5 ug/mL标准品连续进样6次，氮芥和斑蝥素峰面积相对标准偏差(RSD%)分别为3.62和2.76%，重复性良好。在8、20和50 ug/g加标水平下，氮芥和斑蝥素回收率在84.3~103.2%之间。本方法准确，精密度高，适用于化妆品中氮芥和斑蝥素含量的测定。 岛津应用云 样品以三氯甲烷提取化妆品中的氮芥、斑蝥素等两种组分，经气相色谱质谱联用仪分析，分别以氮芥、斑蝥素的保留时间和特征离子定性，以定量离子的峰面积定量。结果表明：在0.1~10 μg/mL浓度范围内，氮芥和斑蝥素线性关系良好；将浓度为0.5 μg/mL混标溶液重复进样6次，峰面积RSD小于3.62%，重复性良好；在8、20和50 μg/g加标水平下，氮芥和斑蝥素回收率在84.3~103.2%之间。