炙甘草、杏仁、柴胡等中药中含量检测方案(液相色谱仪)

依利特三 目录 前 言1 第1章合规的色谱数据工作站——Chromsoft 2 数据安全性2 审计追踪3 数据恢复功能5 第2章高效液相色谱系统配置6 2.1 仪器配置清单6 第3章中药饮片有效成分含量测定7 3炙甘草733 杏仁7 桂枝8 泽泻8 猪苓8 3.6 柴胡9 3.7 生姜9 细辛10 枳实10 第4章中成药有效成分含量测定11 4.1 清开灵胶囊11 4.2 安宫牛黄丸12 4.3 牛黄消炎丸12 新雪颗粒13 浙贝流浸膏13 第5章中药饮片中黄曲霉毒素检测14 5.1 设备及试剂14 5.2 实验方法14 5.3 实验结果15 第6章中药材及中药饮片中金胺O检测16 6.1 设备及试剂16 6.2 实验方法16 6.3 实验结果16 第7章蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量测定18 设备及试剂18 实验方法18 实验结果19 第8章蜂蜜中羟甲基糠醛含量测定20 设备及试剂2088 实验方法20 实验结果21 前言 庚子鼠年春节，一个平凡的春节，举国上下却踏入了一个特殊的战场――防控新型冠状病毒肺炎疫情阻击战。这是一场艰难的战役，与时间赛跑，与病魔较量，从死神手中抢人，但这场战役必须打赢! 在抗击新型冠病毒中，中西医各有优势，扬长避短，通力合作，中西医结合治疗是抗击疫毒的好办法， 中药作为我国的瑰宝之一，在此次抗击新型冠状病毒中与西药结合治疗，发挥了巨大作用，是已被多地多家医院、被正面战场印证了的事实。甘肃、北京、四川、海南等多个省市陆续发布中药防治方案。2月5日，国家中医药管理局官方也证实：国家正在进行中医药有效方剂筛选，且目前已研究取得阶段性进展，其中清肺排毒汤在试点省省临床观察中表现优异，治疗总有效率可达90%以上。 在此特殊时刻，依利特公司也发挥自身优势，利用我公司自产高效液相色谱仪系统，对抗击新型冠状病毒常用中药饮片、中成药中有效成分、真菌毒素等进行了检测，并提出中药检测解决方案，供相关企业参考使用。同舟共济战疫情，依利特在行动! 第1章合规的色谱数据工作站——Chromsoft 由于药品管理法的修订以及计算机化系统的实施，使得药品生产企业对实验数据管理更加严格。为了降低企业数据管理过程的风险、避免人为操作出现的失误，以及对实验人员各自实验数据的溯源工作，保证实验数据的合法性， Chromsoft色谱数据工作站应运而生，该工作站审计追踪功能齐全，记录完整，满足GLP/FDA CFR21 Part11以及我国GMP法规要求。 Chromsoft色谱数据工作站合规性主要体现在以下几个方面。 1.1 数据安全性 (1)网络化管理 实现实验数据的物理隔离，杜绝实验后人为删改数据的风险。同时，实验数据可以实现自动上传至服务器，无论是签名还是审核可以全部实现无纸化管理，提高工作效率。 (2)访问权限设置 通过设置三级用户分权，实现责权分离；每个用户拥有自己独立密码，密码长度、有效期以及长时间自动锁屏功能，加上密码到期提醒，为系统的安全性增加了保障。 (3)自动生成的电子签名和手动签名同等效力，保证数据真实有效。 若对数据进行修改，没有进行审核签名，则提醒内容被更改，需重新审核签名才有效。 1.2 审计追踪 (1)用户及系统审计追踪功能，详细记录所有的用户登录以及密码的更改相关信息，且这些条目自动生成，不能进行删除和更改。准确记录系统的登录，退出、配置以及所连接仪器的状态，自动生成且不可更改。 需要帮助按F1 (2)方法审计追踪功能、样品审计追踪功能、序列审计追踪功能、校准检查追踪功能、色谱图审计追踪功能、数据输出审计追踪功能，各种审计功能齐全，且所有的审计追踪文件以日期为文件名自动生成，且不允许修改和删除。 色谱图检查跟踪(E：\数据备份\Ver138\_2016_3_4 19_28_46_评价色谱柱-08) 口 × 口 1.3 数据恢复功能 当数据因为突然断电或电脑死机等意外状况而不能被保存时，可以使用挽救数据功能，对没有及时储存的数据进行意外数据丢失的恢复功能，保证数据的安全和完整性。 第2章i高效液相色谱系统配置 2.1 仪器配置清单 表 2-1 iChrom 5100二元高压梯度配置清单 2 500mL 剂剂瓶(无色) 2支 3 S5100 色谱柱温箱(选配) 1台 4 O5100自动进样器(选配) 1支 5 DAD5115 512 二级管阵列检测器(金胺O检测需配) 1台 6 RI-201H示差检测器(蜂蜜中糖类检测需配) 1台 7 蒸发光散射检测器(胆酸、贝母素甲、贝母素乙检测需配) 1台 8 荧光检测器(黄曲霉毒素检测需配) 1台 9 光化学柱后衍生器(黄曲霉毒素检测需配) 1套 10 AD 适配器及 AD适配器启动包(特殊检测器时需配) 1台 注：或同等配置的其他型号的高效液相色谱仪 表2-2 iChrom 5100 四元低压梯度配置清单 2 1000mL 溶剂瓶(无色) 4支 3 S5100色谱柱温箱(选配) 1台 4 O5100自动进样器(选配) 1支 5 DAD5115 512二级管阵列检测器(金胺O检测需配) 1台 6 RI-201H示差检测器(蜂蜜中糖类检测需配) 1台 7 蒸发光散射检测器(胆酸、贝母素甲、贝母素乙检测需配) 1台 8 荧光检测器(黄曲霉毒素检测需配) 1台 9 光化学柱后衍生器(黄曲霉毒素检测需配) 1套 10 AD 适配器及 AD 适配器启动包(特殊检测器时需配) 1台 注：或同等配置的其他型号的高效液相色谱仪 第3章i中药饮片有效成分含量测定 3.1 炙甘草 120 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~8 19 81 8~35 19一50 81→50 35~36 50→100 50→0 36~40 100→19 0-81 min 图3-1甘草苷和甘草酸铵检测色谱图 甘草和甘草酸铵检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 甘草苷 13.435 323.6 14200 0.98 2.53 2 甘草酸铵 34.246 911.89 360600 1.29 3.62 3.2 杏仁 图3-2苦杏仁苷检测色谱图 苦杏仁苷检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 苦杏仁苷 21.041 430.56 16300 1.16 1.51 3.3 桂枝 m in 图3-3桂皮醛检测色谱图 桂皮醛检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 桂皮醛 16.287 1747.57 11200 1.01 16.42 3.4 泽泻 图3-423-乙酰泽泻醇B检测色谱图 23-乙酰泽泻醇B检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 23-乙酰泽泻醇B 14.997 130.62 16300 1.10 4.08 3.5 猪苓 图3-5麦角甾醇检测色谱图 麦角甾醇结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 麦角甾醇 15.143 302.13 13700 1.08 24.91 3.6 柴胡 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~50 25→90 75一10 50~55 90 10 图3-6柴胡皂苷a检测色谱图 柴胡皂苷a检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 柴胡皂苷a 21.475 3283.13 153100 0.96 1.72 2 柴胡皂苷d 27.462 3884.87 161500 0.91 2.44 3.7 生姜 色谱柱： SinoChrom ODS-BP 5um 4.6x150mm 流动相：乙腈-甲醇-水(40：5：55) 流量：1.0mL/min 检测：280nm 进样量： 20uL 柱温：室温 图3-76-姜辣素检测色谱图 6-姜辣素检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 6-姜辣素 13.778 332.71 8600 0.93 1.79 3.8 细辛 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~25 50 50 25~30 50→100 50→0 图3-8细辛脂素检测色谱图 细辛脂素检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 细辛脂素 18.702 39.69 13400 1.01 3.87 3.9 枳实 色谱柱： SinoChrom ODS-BP 5um 4.6×250mm流动相：甲醇-磷酸二氢钾溶液(磷酸二氢钾0.6g，十二烷基磺酸钠1.0g， 冰醋酸1ml，水溶解稀释至1000ml)(50：50)流量：1.2mL/min检测：275nm 进样量：20pL 柱温：室温 图3-9辛弗林检测色谱图 辛弗林检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 辛弗林 27.63 329.08 14100 1.08 7.2 第4章中成药有效成分含量测定 中成药是以中草药为原料，经制剂加工制成各种不同剂型的中药制品，相对于中药药材而言，具有方便服用、便于携带，免煎煮等优点。中成药常常需要对多种有效成分逐一进行检测，便于质控。 4.1 清开灵胶囊 图4-1胆碱检测色谱图 胆碱检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 胆酸 13.222 8356.61 8300 1.12 2.38 清开灵胶囊中黄芩苷检测 色谱柱： Supersil ODS2 5um 4.6×150mm流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(43：57)流量：1.0mL/min检测：274nm进样量： 10pL 柱温：室温 图4-2黄芩苷检测色谱图 清开灵胶囊中栀子苷检测 色谱柱： Supersil ODS2 5um 4.6×250mm流动相：乙腈-水(8：92)流量：1.0mL/min检测：238nm进样量：5pL 柱温：室温 图4-3栀子苷检测色谱图 4.2 安宫牛黄丸 安宫牛黄丸，主要成分为牛黄、水牛角浓缩粉、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、黄连、黄芩等；具有清热、复苏及脑保护、镇静、抗惊厥作用。根据2015版药典，对其中黄芩苷、盐酸小檗碱、胆红素进行了检测，方法如下： 安宫牛黄丸中黄芩苷和盐酸小檗碱检测 色谱柱： SinoChrom ODS-BP 5um 4.6×150mm 流动相：A-乙腈， B-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液流量：1.0mL/min 检测：278nm 进样量：10uL 柱温：室温 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~10 21 79 10~15 21→31 79→69 15~30 31 69 图4-4黄芩苷和盐酸小檗碱检测色谱图 黄芩苷和盐酸小檗碱检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 黄芩苷 8.411 678.93 7600 1.03 2.34 2 盐酸小檗碱 21.785 248.82 46000 1.15 2.04 安宫牛黄丸中胆红素的检测 色谱柱： SinoChrom ODS-BP 5um 4.6x150mm流动相：乙腈-1%醋酸溶液(95：5)流量：1.0mL/min检测：450nm进样量：5uL柱温：室温 图4-5胆红素检测色谱图 胆红素检测结果； 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 胆红素 13.717 203.57 9800 0.93 - 4.3 牛黄消炎丸 图4-6牛黄消炎丸中胆酸检测色谱图 牛黄消炎丸中胆酸检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 胆酸 13.213 891.57 7900 1.20 3.68 4.4 新雪颗粒 新雪颗粒为清热剂，具有清热解毒之功效。推荐用于新型冠状病毒肺炎的重型患者。根据2015版药典，新雪颗粒需对穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量进行检测。 色谱柱： Supersil ODS2 5um 4.6×150mm 流动相：甲醇-水(55：45) 流量：1.0mL/min 检测：见右表 进样量：20uL 柱温：室温 时间(分钟) 波长(nm) 0~7 225 7~20 254 图4-7穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯检测色谱图 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯酯测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 穿心莲内酯 3.863 211.98 3600 1.09 1.99 2 脱水穿心莲内酯 10.106 594.90 6800 1.03 13.88 图4-8浙贝流浸膏中贝母素甲、贝母素乙检测色谱图 浙贝流浸膏中贝母素甲、贝母素乙检测结果： 序号 组分名 保留时间(min) 峰面积(mAU.sec) 塔板数(N) 拖尾因子 分离度(R) 1 贝母素甲 10.032 971.65 17500 1.14 8.03 2 贝母素乙 12.266 321.83 19600 1.14 6.84 第5章中药饮片中黄曲霉毒素检测 中药作为中国的瑰宝之一，早已成为中国的代名词，不但对于中华民族的繁荣昌盛有着巨大的贡献，而且对世界的贡献也越来越大。但中药在贮存过程中，由于贮存环境等因素的影响，会产生各种的真菌类毒素，其中包括对人体影响比较大的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，因此对中药中黄曲霉毒素的检测至关重要。详细检测方法如下： 5.1 设备及试剂 表5-1主要化学试剂、标准品清单 表5-2主要样品前处理设备 序号 名称 规格型号 备注 1 溶剂过滤器 1000mL 流动相过滤 2 隔膜真空泵 0.08MPa，160W 流动相过滤， GM- 3 氯化钠 分析纯 0.33A 3 超声清洗器 3L/6L， 40/60KHz，120W 流动相脱气， AS3120 4 高速万能粉碎机 转速大于10000r/min 5 试验筛 二号筛 6 精密电子天平 感量为万分之一 称量 7 高速搅拌器 转速大于10000r/min 8 离心机 转速大于10000r/min 9 免疫亲和柱 黄曲霉毒素免疫亲和柱 或同等效果的净化柱 实验过程中其它玻璃器皿还包括容量瓶(100mL、50mL、25mL、10mL)、具塞锥形瓶(250mL)，移液枪(0~1000pL， 0~5000uL)、移液枪枪头(1mL，5mL)、一次性 PVC手套、一次性口罩、进样针、滤膜等。 5.2 实验方法 标准溶液配制 黄曲霉毒素混标储备液(100pg/L)：黄曲霉毒素混标(约5mL)置于 50mL容量瓶中，用甲醇定容。黄曲霉混标工作液：用流动相稀释黄曲霉混标储备液分别配置的黄曲霉混标工作液。如其中B1、Gi浓度为 40.0ug/L， 20.0ug/L，10.0ug/L， 6.0ug/L， 2.0pg/L， 0.6ug/L， 0.2ug/L。而相对应B2、G2浓度为 12.0pg/L，6.0ug/L， 3.0ug/L， 1.8ug/L， 0.6ug/L， 0.18ug/L， 0.06ug/L。 样品前处理 品前处理 (1)提取：精密称取供试品粉末 15g(过2号筛)置于250mL 的三角瓶中，加入3g氯化钠，精密加入70%甲醇溶液75mL， 高速搅拌 2min(搅拌速度大于11000r/min)， 离心 5min(离心转速2500r/min)， 精密称取上清液15mL， 置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45um滤膜过滤。 (2)净化：量取续滤液20mL， 通过免疫亲和柱，流速3mL/min，然后用水20mL 洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用2mL甲醇洗脱，收集洗脱液，即得。 色谱条件 色谱柱： SinoChrom ODS-BP 5um 4.6×200mm 流动相：甲醇/乙腈/水=20/20/60(V/V/V) 流速：0.8mL/min 进样量：20pL 检测：激发360nm，发射 450nm 柱温：室温 5.3 实验结果 图5-1黄曲霉毒素标准溶液衍生色谱图 图5-2莲子中黄曲霉毒素检测色谱图 第6章l中药材及中药饮片中金胺0检测 金胺O是化学染色剂，为黄色均匀粉状物，溶于冷水，易溶于热水呈亮黄色，溶于乙醇呈黄色。主要用于麻、纸、皮革、草编织品、人造丝等的染色，也用于印染棉织品。但有不法商贩为谋取利益，用其改善食品、中药材等的外观。曾发现被用于劣质黄柏、蒲黄、延胡索等中药材、中药饮片的非法染色。金胺O对皮肤黏膜有轻度刺激，可引起结膜炎、皮炎和上呼吸道刺激症状，长期过量食用，将对人体肾脏、肝脏造成损害甚至致癌，卫生部于2008年将其列为非食用物质，在中药材、中药饮片和中成药中均不得检出。 6.1 设备及试剂 表6-1 主要化学试剂、标准品清单 表6-22主要样品前处理设备 序号 名称 规格型号 备注 1 溶剂过滤器 1000mL 流动相过滤 2 隔膜真空泵 0.08MPa，160W 流动相过滤， 3 磷酸二氢钾 分析纯 GM-0.33A 3 分析天平 分析纯 精确到0.0001g 4 超声清洗器 3L/6L，40/60KHz 流动相脱气， 120W AS3120 5 涡旋混合器 混合 实验过程中其它玻璃器皿还包括容量瓶(1mL、5mL、10mL、100mL)、250mL圆底烧瓶、移液枪(0~1000pL，0~5000uL)、移液枪枪头(1mL，5mL)、一次性PVC手套、一次性口罩、滤膜等。 6.2 实验方法 色谱柱： SinoChrom ODS-BP 5um 4.6×250mm 流动相：乙腈：0.025mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.2%三乙胺，磷酸调pH值3.0)=35：65 流量：1.0mL/min 检测： DAD检测 进样体积： 10pL 柱温：室温 6.3 实验结果 标准品分析 图6-1金胺O标准品(50ug/mL)谱图(提取色谱图波长：432nm) 图6-2金胺O标准品光谱图 图6-3金胺O三维谱图 表6-3金胺O标准品分析色谱参数(432nm) 物质 保留时间(min) 峰面积(mV.sec) 拖尾因子 塔板数(N/m) 压力(MPa) 金胺O 12.37 3301.84 1.25 69000 11.9 实际样品分析 图6-4黄柏和金胺O标准品叠加谱图(提取波长：432nm) 图6-5黄连和金胺O标准品叠加谱图(提取波长：432nm) 图6-6 蒲黄和金胺O标准品叠加谱图(提取波长：432nm) 图6-7图6-6中与金胺O标准品保留时间接近色谱峰光谱图 测试结果：黄柏，延胡索，黄连，石斛，菟丝子的分析谱图中，与金胺O标准品保留时间一致处，均无色谱峰，说明该5种药材中不含有金胺O。蒲黄分析谱图与金胺O标准品保留时间一致处，有一个色谱峰(峰高0.48mV)，提取该色谱峰光谱图，与金胺O光谱普不一致，说明该色谱峰不是金胺 O。 采用使用 D5115二极管阵列检测器分析中药材及饮片中的金胺O， 能够满足药监部门制定的标准要求。 第7章!蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量测定 蜂蜜是一种极好的食品和医疗保健品，是蜜蜂采集周边蜜源植物的花蜜并贮存在蜂巢中，与自身特殊物质结合，消化而成的天然甜味物质。蜂蜜主要由碳水化合物(约占总量的3/4)和水分(约占总量的1/4)组成，此外蜂蜜还含有转化酶、过氧化氢酶、淀粉酶、脂酶等蛋白质(酶)、有机酸、芳香物质、挥发油、蜡、色素及一些胶状物等。糖类物质尤其是单糖(葡萄糖和果糖)占碳水化合物的85%-90%，形成了高糖分的饱和溶液。 随着蜂蜜销售的紧俏， -些不法商贩开始人为向蜂蜜中添加水、蔗糖、转化糖、饴糖、羧甲基纤维素、糊精或淀粉类物质以达到以次充好、提高产量的目的。 依利特公司，参照《中国药典》2015版第一部，采用示差折光检测器，经氨基色谱柱分离，根据保留时间定性和峰面积定量，提出了蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定的全套 HPLC 解决方案。 7.1 设备及试剂 表7-1 所需化学试剂 表7-22主要样品前处理设备 序号 名称 规格型号 备注 1 溶剂过滤器 1000mL 流动相过滤 2 隔膜真空泵 0.08MPa，160W 流动相过滤， GM- 3 超声清洗器 3L/6L， 40/60KHz， 120W 流动相脱气， AS3120 4 精密电子天 万分之一 称量 5 溶剂过滤器 1000mL 流动相过滤 实验过程中其它玻璃器皿还包括容量瓶(100mL、50mL、25mL、10mL)、样品瓶(1.5mL)、移液枪(0~1000pL， 0~5000uL)、移液枪枪头(1mL，5mL)、一次性 PVC 手套、一次性口罩、进样针、滤膜等若干。 7.2 实验方法 标准溶液配制 标准曲线的制备：准确称2.5g果糖、2.0g葡萄糖标准品(精确至0.0001g)，加适量40%乙腈溶液溶解，并定容至50mL，过滤，即可(作为储备液)。准确称1.0g蔗糖、1.0g麦芽糖标准品(精确至0.0001g)，加加量40%乙腈溶液溶解，并定容至50mL，过滤，即可(作为储备液)。 按照下表分别将四种单糖的储备液以此配成所需要的混标溶液(标准曲线所需要的浓度)。 表7-3果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖的标准工作溶液配制方法 序号 果糖、葡萄糖储备液体积pL 蔗糖、麦芽糖储备液体积 pL 定容体积 mL 标准工作液浓度(g/100 mL) 果糖 葡萄糖 蔗糖 麦芽糖 1 200 25 1 1.00 0.80 0.050 0.050 2 300 50 1 1.50 1.20 0.100 0.100 3 400 100 1 2.00 1.60 0.20 0.20 4 500 200 1 2.50 2.00 0.40 0.40 5 300 140 0.5 3.00 2.40 0.60 0.60 样品前处理 取2.5g蜂蜜样品(精确至0.0001g)，加适量40%乙腈溶液溶解，并定容至50mL，过滤，即可。 7.3 实验结果 图7-1 标准品与样品典型分离色谱图 表7-4 椴树蜂蜜样品中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖的线性曲线方程及定量计算结果 名称 回归方程(工作曲线) 相关系数 浓度(g/100mL) 含量(g/100g) 果糖 y=0.00015x-0.028 R=0.9991 1.95596 39.19 葡萄糖 y=0.00017x-0.0022 R=0.9985 1.9308 38.62 蔗糖 y=0.00016x-0.0079 R=0.9996 0.0001 0.002 麦芽糖 y=0.00021x-0.013 R=0.9988 0.0720 1.44 表7-52015版中国药典一部中有关蜂蜜的系统适用性实验结果 序号 项目 2015版药典要求 某样品实测结果 结论 1 理论塔板数色谱峰(果糖) 不低于2000 6200 满足 2 果糖和葡萄糖的总量 不得少于60.0% 70.41 满足 3 果糖与葡萄糖含量比 不得小于1.0 1.09 满足 4 蔗糖的含量 不得过5.0% 0.23 满足 5 麦芽糖的含量 不得过5.0% 1.79(含杂质) 满足 第8章蜂蜜中羟甲基糠醛含量测定 蜂蜜中羟甲基糠醛(HMF)含量的多少是决定蜂蜜质量优劣的重要标准，国际贸易中 HMF 属于强检指标。HMF 蜂蜜后天产生的，产生量与生产时间和温度有直接关系，当存放时间过长或者加工温度过高时，易产生 HMF。 HMF 是黑色的具有难闻气温的有毒物质，会影响蜂蜜的口感和外观，同时影响其质量。而且HMF 对眼、粘膜或皮肤有刺激性，食之过多会引起中毒，损坏动物横纹肌麻痹和内脏。因此蜂蜜中羧甲基糠醛含量的测定非常重要的。 依利特公司，参照《中国药典》2015版第--部相关标准，采用高效液相色谱-紫外检测法，提出了蜂蜜中羟甲基糠醛含量测定的全套 HPLC 解决方案，相关人员可参考本实验中的方法，进行蜂蜜中羧甲基糠醛!含量的检测。 8.1 设备及试剂 表8-1 所需化学试剂 表8-2 主要样品前处理设备 序号 名称 规格型号 备注 1 溶剂过滤器 1000mL 流动相过 2 隔膜真空泵 0.08MPa，160W 流动相过 滤GM- 3 超声清洗器 3L/6L 40/60KHz，120W 流动相脱 气AS3120 4 电子天平 感量为万分之一 称量 5 溶剂过滤器 1000mL 过滤 实验过程中其它玻璃器皿还包括容量瓶(100mL、50mL、25mL、10mL)、样品瓶(1.5mL)、移液枪(0~1000uL，0~5000uL)、移液枪枪头(1mL， 5mL)、一次性 PVC 手套、一次性口罩、进样针、滤膜等若干。 8.2 实验方法 标准溶液配制 标准储备溶液：准确称取适量的羟甲基糠醛标准物质于100mL容量瓶，约10mL，甲醉溶解，用水稀释 至刻度，配成 0.20mg/mL 的标准储备液。标准工作溶液：分别吸取适量的羟甲基糠醛标准储备溶液至100mL 容量瓶中，用10%甲醇溶液释稀至刻度，配成 0.10ug/mL， 0.20ug/mL， 1.0ug/mL， 2.0ug/mL， 4.0ug/mL， 6.0pg/mL， 10ug/ml，标准工作溶液。当天新鲜配制。 样品前处理 称取 10g试样，精确至0.01g， 置于100mL烧杯中，加人10mL甲醇，用玻璃棒搅拌均匀，使试样完全溶解。转移至100mL容量瓶中，用水释稀至刻度，充分混匀。过滤，即可。 色谱条件 色谱柱： Supersil ODS2 5um 4.6×250mm 流动相：甲醇：水=10：90 流速：1.0mL/min 检测波长：285nm 进样体积：10pL； 柱温：30℃ 8.3 实验结果 图8-羟甲基糠醛标准品谱图 图8-2某椴树蜂蜜样品(100mg/mL)分离谱图 表8-3外标法计算蜂蜜中羟甲基糠醛的含量 组分名 保留时间(min) 峰面积(mv.sec) 浓度(ug/mL) 样品含量(%) HMF 7.78 140.35 2.1 0.0021 大连公司 公司地址：高新园区七贤岭学子街2-2号 公司电话：0411-84753333(总机)-转销售部 公司传真：0411-84732323 客服电话：400-66-35483 公司网址： http：//www.eliteHPLC.com 苏州公司 苏州工业园区金鸡湖大道99号苏州纳米城西北区14栋501 电话：0512-67997572 北京办事处 地址：北京市朝阳区汤立路201号东亚奥北中心南区4号楼2单元2307室 电话：13624984285 济南办事处 地址：山东省济南市历下区奥体西路1222号力高国际10楼1-1816室 电话：18842689516 上海办事处 地址：徐汇区梅陇路130号华东理工大学实验四楼204室 电话：15140566435 武汉办事处 地址：武汉市洪山区鸿桂苑东区1栋1单元2501 电话：18842683216 南京办事处 地址：江苏省南京市建邺区集庆门大街218号万达西地8幢三单元408室 电话：18842682679 厦门办事处 地址：厦门市集美区鱼福三里383号127单元 电话：18842685196 西安办事处 地址：陕西省西安市西稍门十字西南角柠檬宫舍11505室 电话：18842681836 广州办事处 地址：广州市白云区东兴二街3号擎山苑C2栋1404房 电话：18842683616 成都办事处 地址：成都武侯区九兴大道6号高发大厦A座610 电话：18842681865 ( 本应 用中 信息 仅供 参 考， 提 供数据 除 注 明 外 为 本 公司特定条 件 下 的 实 验 数 据 。 ) 纵观中华民族几千年繁衍与发展历程，与疾病、瘟疫斗争从未间断，在无数次的实践中，中医药经验不断丰富。2003年SARS病毒肆虐，中药向世界展示了其宝贵的价值。此次，在对抗新型冠状病毒中，中药再次发挥了至关重要的作用。据权威数据显示，在对抗新型冠状病毒肺炎中，中西医结合治疗疗效明显优于单纯西药治疗。近日，科技部完成2019年度国家重点研发计划“中医药现代化研究”重点专项立项工作，此次共立项项目43项，中央财政投入经费4.27亿元。作为“中国古代科学的瑰宝”，中药必将在传承中不断发展，服务于人。