大米中环嗪酮检测方案(气质联用仪)

上海青基质中208种农药LOQ分布 热线800 8105118电话4006505118www.thermofisher.com thermoscientific GC-MS/MS法一一针测定植物性食品中208种农残及代谢物 中国是农药生产和使用大国，农药广泛用于农业生产中，同时农药滥用和不规范使用现象比较普遍，所以在食品中农药残留情况也是比较突出。日常检测中，农残检测的任务也相当繁重，当前我国对于农残检测的方法标准主要集中在GC、GCMS等，随着气相色谱三重四极杆质谱的普及， GC-MS/MS的检测方法以其高选择性、高灵敏度、高通量特点越来越受检测工作者的欢迎，为此农业部在2017年发布了《食品安全国家标准植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》(征求意见稿)。赛默飞应用团队基于此国标方法，开发了应对不同基质中农残前处理方式，以及配套的仪器方法和数据处理方法，以满足农残检测快速、准确、高通量的要求。 基于QuEChERS前处理技术，我们开发了上海青、大米、花生油、茶叶四种具有代表性的样品基质的提取净化方法，基于TSQ 9000的Time-SRM扫描方式建立了一针检测208种农药的仪器方法(Instrument Method)，依托TraceFinder软件开发了对应的数据处理方法(Master Method)。对样品基质进行了不同浓度的加标回收测算，经过基质标准曲线定量计算，大部分的化合物回收率在80-120%之间，基质标准曲线浓度在0.01-0.2 mg/kg范围内，所有化合物的线性相关系数均在0.99以上，定量限都能做到0.01 mg/kg. 气相色谱-三重四极杆质谱仪TSQ 9000 (赛默飞世尔科技，美国)， Pesticides II30 mx0.25 mm×0.25 um with 5m guard (PN： 26RD142F)毛细管色谱柱。 3.主要试剂和材料 3.1 乙腈(色谱纯) 3.22正己烷(色谱纯) 3.3冰醋酸(分析纯) 3.4酸化乙腈(1：99)：取10mL冰醋酸(3.3)加入到990 mL乙腈(3.1)中，混匀 ( 3. 5 5 正己烷饱和的乙腈 ： 取500 m L 乙腈(3.1) ， 往里加入正己烷(3.2 )， 直到有 明 显分层 ) ( 3 .65 QuEChERS盐 包 1(PN： 60105 - 33 3 -P ) ： 含4g硫 酸镁、 1g 氯化钠、1 g 柠檬酸钠、0. 5 g柠檬酸 氢二 钠 ) ( 3.7 ( QuEChERS盐包2( P N： 60105 - 3 3 5- P ) ：含6 g无 水硫酸镁 、 1. 5g 醋 酸钠 ) ( 3.83 Qu E Ch E RS净化管1(PN：601 0 5 - 21 8 -P) ： 内含900mg硫酸镁、15 0 mg P S A及15 mg G CB的15 m L 塑 料离心管 ) ( 3.9 Q u EChERS净化管2( PN： 6 010 5 - 226)：内含1200mg硫酸镁、4 0 0mg P SA、 400m g C1 8 及4 0 0mg GC B 的15 m L塑料离心管 ) 3.10QuEChERS净化管3(PN：60105-225-P)：内含1200mg硫酸镁、400 mg PSA及400mg C18的15mL塑料离心管 4.1 QuEChERS前处理方法 根据不同的样品基质类型，前处理有如下四种基本流程： 4.1.1上海青(适用于蔬菜、水果和食用菌类) 称取10g已均质好的试样(精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，加入10mL乙腈(3.1)，充分混匀后，放入-20℃冰箱冷冻10 min，再加入4g硫酸镁、11g 氯化钠、11g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠等盐包(PN： 60105-333-P)，盖上离心管盖，剧烈震荡1 min后，9000r/min离心6 min。吸取6mL上清液到内含900 mg硫酸镁、150mgPSA及15mg GCB的15mL塑料离心管中(PN： 60105-218-P)，涡旋混匀1 min， 9000r/min离心6min， 吸取1mL上清液于进样瓶中，待上机测定。 4.1.2大米(适用于谷物、油料和坚果类) 称取5g已粉碎的试样(精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，加10mL水涡旋混匀，静置30 min。加入10mL1%醋酸乙腈溶液(3.4)，充分混匀后，放入-20℃冰箱冷冻10min，再加入6g无水硫酸镁、1.5g醋酸钠等盐包(PN： 60105-335-P)，盖上离心管盖，剧烈震荡1min后9000 r/min离心6 min。吸取6mL上清液加到内含1200 mg硫酸镁、400mg PSA及400mg C18的15mL塑料离心管中(PN：60105-225-P)，涡旋混匀1 min。9000r/min离心6min， 吸取1mL上清液于进样瓶中，待上机测定。 4.1.3普洱茶(适用于茶叶和香辛料类) 称取2g已粉碎的试样(精确至0.01 g)于50mL塑料离心管中，加10mL水涡旋混匀，静置30 min。加入10mL1%醋酸乙腈溶液(3.4)，充分混匀后，放入-20℃冰箱冷冻10 min， 再加入6g无水硫酸镁、·1.5g醋酸钠等盐包(PN： 60105-335-P)，盖上离心管盖，剧烈震荡1 min后9000 r/min离心6 min。吸取6mL上清液加到内含1200 mg硫酸镁、400 mg PSA、400 mg C18及400 mgGCB的15mL塑料离心管中(PN：60105-226)，涡旋混匀1min。9000r/min离心6min， 吸取1mL上清液于进样瓶中，待上机测定。 4.1.4花生油(适用于食用油类) 称取2g试样(精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，加入10mL正己烷饱和的乙腈(3.5)，剧烈震荡1 min后9000 r/min离心6 min。吸取乙腈层加到内含1200mg硫酸镁、400mg PSA及400mg C18的15mL塑料离心管中(PN： 60105-225-P)，涡旋混匀1 min。9000r/min离心6min， 吸取1mL上清液于进样瓶中，待上机测定。 4.2.样品基质溶液： 选取空白样品，用(4.1)前处理方式得到的空白基质溶液。 7.1 标准储备液：在十万分之一分析天平上称取每种农药单标化合物10 mg， 加入10mL相应的溶剂(根据不同的化合物加入丙酮、甲苯或者乙腈)溶解，配制成浓度为约1000mg/L的溶液。每种单个标准储备液的浓度根据称样量和加入溶剂的体积计算得到。所有单标储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。单标储备液的有效期为6个月。 7.2 混合标准中间液：移取适量的单标储备液，用乙腈稀释。中间标准储备液的浓度为10.0mg/mL。中间标准储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。中间储备液的有效期为3个月。 7.3 工作标准溶液：取适量的混合标准中间液，以空白样品基质液(6)依次稀释成浓度为0.010，0.020，0.050， 0.100， 0.200 mg/L的工作标准溶液。 4.4仪器方法 4.4.1气相方法： 柱温箱：40℃保持1.5 min，以25℃/min升至90℃，保持1.5min， 再以25℃/min升至180℃，保持1.5min，以5℃/min升至280℃，最后以10℃/min 升温到300℃，保持 5min； SSL进样口：温度270℃，进样模式：不分流进样，不分流时间：1：1min；载气：恒流，1.2mL/min. 4.4.2质谱方法： 传输线温度：280℃；离子源温度为300℃；离子源：EI；采集方式：Time-SRM；分辨率： FWHM0.7Da(Q1和Q3)；化合物离子对信息来源于Thermo农残数据库CDB以及AutoSRM。 4.5数据处理 使用Thermo ScientificTMM TraceFinder软件对数据进行采集、处理和报告分析，该软件可同时实现仪器控制、方法开发、定量/定性分析以及报告编辑。此外， TraceFinder软件可以根据你所需要的信息自定义报告模板。 4.6 AutoSRM自动优化化合物离子对信息及碰撞能量对于串接气质来说，方法优化及建立是非常重要的部分。 常规的方法开发需要对每个未知化合物挑选母离子，子离子以及优化碰撞能量，当未知化合物越多，花费的时间也就越多。赛默飞世尔科技全新一代三重四极杆气相色谱质谱联用仪TSQ 9000独有的AutoSRM功能，可以自动优化离子对信息及碰撞能量，并且当一次优化的化合物数目较多时，可以智能的调整进样的次数以期在最少的时间内得到最优化的方法，使得整个方法建立部分更加简单方便。整个AutoSRM的步骤如下： 第一步：选择母离子，进行全扫描(full scan) 进样，找到对应化合物的色谱峰，挑选质量数较大，离子丰度高的特征离子作为母离子。 第二步：选择子离子，进行子离子扫描(product ion)进样，挑选出丰度高的离子作为特征子离子。 第三步：优化碰撞能量，选择fullrange或者Target模式进行SRM碰撞能量优化，在出来的数据中，选择响应最高处的CE值为最优碰撞能量 Acquistion stalun 最终优化的离子对及CE结果可以导出成excel表格，直接导入到仪器方法中，无需手动输入离子对编辑方法，提高工作效率，减少手动输入的错误。 5.1国标方法定量限要求 208种农药针对不同的样品基质，定量限有所不同，总体分布要求如下： a)蔬菜、水果、食用菌(0.01mg/kg) b)谷物、油料、坚果(0.01-0.02mg/kg) c)茶叶和香辛料(0.01-0.05mg/kg) d)食用油(0.01-0.02mg/kg) 5.2标准曲线及检出限 以4种样品空白基质配制0.010、0.020、0.050、0.100、0.200 mg/L的混标溶液，建立标准曲线，相关系数R²均大于0.99。根据国标的要求，定量限最低的要求做到0.01mg/kg， 茶叶基质中混合农药的谱图如图1所示。在本实验方案中，所有化合物定量限能达到0.01 mg/kg， 具体样品基质中检出限统计如图2所示。该实验方案的检出限水平远超国标方法的要求。 根据4种样品基质，我们分别做了加标回收率实验，在特定的加标浓度下，大部分化合物回收率在80-120%之间，回收率统计见表2。茶叶基质中40ppb浓度的农残，连续进样10针， RSD统计情况如图3。 表24种样品基质加标回收情况统计 序号 样品基质 加标 量 回收率80-120%化合物数量 回收率80-120%占比 1 上海青 50ppb 188 90.4% 2 大米 25ppb 187 89.9% 3 花生油 40ppb 190 91.4% 4 茶叶 40ppb 190 91.4% thermoscientific 结论 本实验采用QuEChERS前处理方案，Thermo Fisher全新一代三重四极杆质谱TSQ 9000， 同时配备Pesticide II色谱柱分离， 在Time-SRM的扫描方式下，让仪器方法管理更加智能方便，使208种农药及代谢物在36min内一针完成分析， 基于TraceFinder软件一站式的数据处理，一站式完成208种农残的全流程分析检测。该实验室方案具有前处理流程简单、快速、准确、有效，仪器操作简便，方法性能具有卓越的灵敏度和出色的稳定性的特点，完全满足新国标对于农残检测的要求。 口口 赛默飞色谱 与质谱中国 For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures. C Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarksare the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified. 本实验采用QuEChERS前处理方案，Thermo Fisher全新 一代三重四极杆质谱TSQ 9000，同时配备Pesticide II色谱 柱分离，在Time-SRM的扫描方式下，让仪器方法管理更 加智能方便，使208种农药及代谢物在36min内一针完成 分析，基于TraceFinder软件一站式的数据处理，一站式完 成208种农残的全流程分析检测。该实验室方案具有前处 理流程简单、快速、准确、有效，仪器操作简便，方法性 能具有卓越的灵敏度和出色的稳定性的特点，完全满足新 国标对于农残检测的要求。