苯巴比妥中快速分析检测方案(液质联用仪)

气相色谱/三重四极杆质谱 (TSQ Quantum XLS)用于15种常见的精神类药物的快速检测分析 朱曼洁叶芳挺赛默飞世尔科技 1.前言 安定等精神类药物是临床常用的一类药物，广泛应用于催眠、镇静、抗惊厥和抗精神失常等临床疾病。但是这些药物经常会因为滥用和误用而引起急性中毒，所以该类药物的分析对医疗抢救和刑事案件鉴定，都有着重要的意义。 本文采用的赛默飞世尔科技三重四级杆气相色谱质谱联用仪既具有气相色谱高分离性，又具有质谱准确鉴定化合物的优点。通过二级质谱扫描充分减少了在复杂基质样品中的背景干扰影响，提高目标化合物的检测灵敏度，使得检出更低浓度的化合物成为可能。并且，在公安刑侦系统内，除了要求准确的对目标组分进行定量以外，还有严格的定性要求。 TSQQuantum XLS 三重四极杆质谱仪具有定量增强数据关联扫描(QED)功能，在定量的同时兼顾定性，排除假阳性检出，可充分保证检测结果的准确率，从而为毒物检测提供了一个新的有效的方法。 关键词：毒物分析，TSQ Quantum XLS， QED， 精神类药物 2.实验部分 2.1仪器和试剂 TSQ Quantum XLS 气相色谱-三重四级杆质谱仪(赛默飞世尔科技，美国)， TR- Pesticide I30m*0.25mm*0.25um毛细管色谱柱(带5m预柱)。 2.2方法 气相方法： 柱温箱：70°C保持 1min， 以 50°C/min 升至 190°C， 保持 1min， 再以20°C/min 的速率升至300°C，保持 5.3min 进样口： PTV不分流进样，不分流时间 1min， 进样口初始温度为60°C， 进样时间为 0.05min，转移温度为280°C，转移时间为2min 载气：恒流，1ml/min 传输线：280°C 质谱方法： 离子源温度为250C， 采用 EZ-SRM的方法，具体检测离子对如下表所示： No. Name 中文名 Parent Product (CE) Start Time End Time 1 barbital 巴比妥 141 80(12)，98(12) 4.8 5.8 2 phenobarbital 苯巴比妥 204 118(10)，161(10) 7.2 8.2 3 promethazine 异丙嗪 284 213(5) 8.9 9.9 180 152(18) 9 10 4 lorazepam 罗拉 302 239.6(6)，274.4(6) 9.4 10.4 5 diazepam 安定 283 238.3(17)，248.4(17)，268.4(17) 9.6 10.6 6 chlorpromazine 氯丙嗪 272 236.3(22)，257.3(22) 9.9 10.9 7 chlordiazepoxide 利眠宁 282 218.3(15)，246.3(15)，247.5(15) 10 11 8 midazolam 咪达唑仑 310 257.6(22)，290.7(22) 10.2 11.2 9 trifluoperazine 三氟拉嗪 407 141(10)，307.4(10)，350.6(10) 10.8 11.8 10 nitrazepam 硝基安定 253 206.4(14)，207.3(14) 11.4 12.4 280 234.2(13) 11.4 12.4 11 clonazepam 氯硝安定 314 233.4(24)，268.3(16)， 12 13 12 clozapine 氯氮平 243 181.4(20)，208.4(20) 12.2 13.2 13 estazolam 舒乐安定 259 205.2(15) 12.4 13.4 294 205.2(20)，239.2(20) 12.4 13.4 14 alprazolam 阿普唑仑 279 243.2(18)，244.2(18) 12.8 13.8 308 273.4(6) 12.8 13.8 15 triazolam 三唑仑 313 243.4(19)，277.3(19) 13.8 14.8 3.结果 3.1色谱分离及最低检测限 各化合物通过此种方法可以实现有效的分离。图1为 1ppb15种药物的色谱图(按照从左至右，从上到下的顺序排列的15种化合物)。 图11ppb15种精神类药物的色谱图 3.2标准曲线及重现性 以二氯甲烷为溶剂，分别配制 1ppb， 5ppb， 10ppb， 50ppb， 100ppb， 50ppb， 1000ppb的混标溶液，建立标准曲线，各化合物的标准曲线如图2所示，相关系数(R)均大于 0.995，表明这15种化合物的标准曲线线性良好。将 10ppb 的样品重复进样5针，得到各化合物的重现性在1.44-4.53%之间。 barbital Y=-122579+60921.1*X R^2=0.9993 W：Equal phenobarbitallY=-150675+6093.61*X R^2=0.9956 W：Equal 60000000- 6000000- 5000000- 50000000- 40000000- 4000000- 30000000 3000000 20000000 2000000- 10000000 1000000- 0T 500 1000 0 500 1000 ug/L ug/L diazepam chlorpromazine Y=-11181.4+2602.71*X R^2=0.9974 W：Equa 2000000- 1 500 1000 0 500 1000 ug/L ug/L 图215种精神类药物的标准曲线 clozapine triazolam Y=-89058.2+7119.37*X R^2=0.9977 W： Equal 3.3定量数据关联二级全扫描(QED)功能兼顾定性 QED MS/MS 是赛默飞世尔科技 TSQ 系列产品独有的专利功能，创新性地实现了一次进样的同时完成定量分析和定性确证。以检测巴比妥为例，在 GC/MS/MS定量实验中，，-一旦仪器检测到巴比妥SRM 的子离子响应超过设定的阈值，Q2的碰撞能量便由一个恒定的碰撞能量 (collision Energy，CE) 变更为反向碰撞能量阶梯(RER)，即高 CE值线性降到低 CE值。同时，Q3由低质量端向高质量端的全扫描即被启动。所以在一次扫描中，我们既可以得到 SRM 的数据用来定量，同时也可以得到子离子的全扫描谱图用于定性。 图3和图4分别为浓度为10ppb 的巴比妥样品和苯巴比妥样品用毒物相关的 QED 谱库进行检索的结果，从图中可以看出，我们可以用 QED 得到的 MS/MS 谱图通过搜库实现化合物的结构确证，从而在实际样品检测中尽可能得减少假阳性的可能。 M Ready 图3巴比妥 QED 谱库检索结果 图4苯巴比妥 QED 谱库检索结果 4.讨论 采用 Thermo Fisher 公司全新一代三重四级杆质谱 TSQ Quantum XLS，使15种药物在 15min内分析完毕，极大得缩短了检测时间，能够满足实验室高通量的要求。并且， TSQ QuantumXLS具有超高的灵敏度，在本实验中所有化合物的最低定量检出限都在 1ppb，使得此种方法可以应用于常规的分析检测。 采用 EZ-method 设定分析方法，使整个分析方法一目了然，只需要了解化合物的出峰时间，然后再设定一个时间范围，保证化合物的出峰时间在这个范围内。不需要划分时间段，系统会自动优化扫描每个离子对的时间，从而使方法建立更为简单方便。 采用定量增强数据关联二级全扫描(QED)功能，创新性地实现了一次进样的同时完成定量分析和定性确证。所以 QED 在样品定性，尤其是在基质较复杂的样品分析当中，可以最大限度地减少假阳性结果的可能。 本文采用的赛默飞世尔科技三重四级杆气相色谱质谱联用仪既具有气相色谱高分离性，又具有质谱准确鉴定化合物的优点。通过二级质谱扫描充分减少了在复杂基质样品中的背景干扰影响，提高目标化合物的检测灵敏度，使得检出更低浓度的化合物成为可能。并且，在公安刑侦系统内，除了要求准确的对目标组分进行定量以外，还有严格的定性要求。TSQ Quantum XLS 三重四极杆质谱仪具有定量增强数据关联扫描（QED）功能，在定量的同时兼顾定性，排除假阳性检出，可充分保证检测结果的准确率，从而为毒物检测提供了一个新的有效的方法。 采用 Thermo Fisher 公司全新一代三重四级杆质谱 TSQ Quantum XLS，使 15 种药物15min内分析完毕，极大得缩短了检测时间，能够满足实验室高通量的要求。并且，TSQ Quantum XLS 具有超高的灵敏度，在本实验中所有化合物的最低定量检出限都在 1ppb，使得此种方法可以应用于常规的分析检测。 采用 EZ-method 设定分析方法，使整个分析方法一目了然，只需要了解化合物的出峰时间，然后再设定一个时间范围，保证化合物的出峰时间在这个范围内。不需要划分时间段，系统会自动优化扫描每个离子对的时间，从而使方法建立更为简单方便。 采用定量增强数据关联二级全扫描（QED）功能，创新性地实现了一次进样的同时完成定量分析和定性确证。所以 QED 在样品定性，尤其是在基质较复杂的样品分析当中，可以最大限度地减少假阳性结果的可能。