化妆品中违禁药物检测方案(液相色谱柱)

Agilent Poroshell 120应用文集—化工分析 采用 Poroshell 120 色谱柱快速分析育发类化妆品中的8种违禁药物 关键词 HPLC Poroshell 120 违禁药物 化妆品 作者 摘要 熊小婷 广州市质量监督检测研究院 随着生活水平的不断提高，人们对美发也有了更高的要求，各种标识具有防脱、生发功效的育发类化妆品应运而生、、飞速发展。然而，部分化妆品企业盲目追求产品的有效性，于该类产品中添加《化妆品卫生规范》(2007年版)明确规定禁止添加的米诺地尔、螺内酯、雌性激素等成分。检测各种育发类化妆品中是否含有上述几种违禁药物，对于控制化妆品的产品质量，保障人民身体健康具有重要的意义。化妆品中米诺地尔、雌性激素、螺内酯等药物成分的检测方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法2.41、液相色谱-质谱联用法[5-71、气相色谱-质谱联用法以及以细管电动色谱[9-10]等。但是，到目前为止，仍没有全面、系统的对育发类化妆品中不同种类违禁药物进行同时检测的方法报道。本研究采用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)， 使用 poroshell 120 Bonus-RP 快速高效柱，能使8种不同违禁药达到完全分离。方法简单、快速、准确，能满足检测要求，并已成功用于实际样品的检测。 材料与方法 1.1仪器与试剂 高效液相色谱仪 (Agilent 1200，配二极管阵列检测器，美国Agilent 公司)； 超纯水系统 (Milli-Q， 美国Millipore 公司)；Agilent Poroshell 120 Bonus-RP色谱柱(4.6×50mm， 2.7pm)；常 规 C18柱(4.6×250mm， 5um)；涡旋混匀器(IKAR MS3digital，德国IKA公司)；超声清洗器(SK8200HP，上海科导超声仪器有限公司)；高速冷冻离心机 (Allegra 64R， 美国Beckman Coulter公司)；固相萃取小柱 (Bond Elute Plexa，60mg，3mL， 美国Agilent公司)； 甲醇 (HPLC 级， Spectrum 公司)；乙酸铵(分析纯，广州化学试剂厂)；水(超纯水)。米诺地尔、雌三醇、雌二醇、雌酮、黄体酮标准品购自Dr. Ehrenstorfer 公司，螺内酯、坎利酮、己烯雌酚购自 TRC 公司， 含量为 97.0~99.5%。 1.2色谱条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 Bonus-RP (4.6×50 mm，2.7um)； 柱温：35℃；进样体积：10pL；流速：0.8 mL/min；流动相A为10mmol/L乙酸铵，流动相B为甲醇，梯度洗脱程序：0-1min 15-40%B， 1-4min 40%-60%B， 4-10min 60%-65%B， 10-10.1min65%-15%B。色谱柱：常规 C18 (4.6×250 mm， 5um)； 进样体积：10pl；流速 1.0 mL/min 梯度洗脱程序： 0-1min 15-58%B，1-10min58-62%B， 10-12min 62-95%B， 12-13min 95-15%B。二极管阵列检测器(DAD)检测波长：雌三醇、雌酮、雌二醇、己烯雌酚为204nm；米诺地尔为 230nm； 螺内酯、黄体酮为240nm， 坎利酮为280nm。 1.3试验样品 标识具有防脱、育发功效的化妆品，样品均为市场采购。 1.4试验方法 1.4.1标准储备液的配制 分别准确称量8种化合物各10mg(精确至0.1 mg)于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，分别配成 1g/L的标准储备液。 1.4.2混合标准工作液 分别吸取不同体积的储备液，用甲醇配制成浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L的混合标准工作液。 1.4.3样品处理 准确称取1.0g(精确至0.001g)样品，置于10mL比色管中，甲醇定容至10mL， 于涡旋混匀器上充分均质，超声15min，10000r/min 20℃下高速离心10min，取全部上清液，40℃水浴下吹至1mL，纯水定容至10 mL， 充分混匀， 10000r/min 20℃下高速离心 10min， 上Bond Elute Plexa 固相萃取小柱。柱子依次用5mL甲醇、5mL水活化平衡，样品全部上样后，依次用3mL水、3mL甲醇-水(10/90， V/V) 淋洗， 5mL甲醇-水(90/10，V/V) 洗脱。洗脱液在40℃水浴下氮吹至近干，甲醇复溶，定容至1mL， 涡旋混匀1min， 超声1min， 过0.22pm滤膜，待测。 1.4.5测定 按1.2操作进行，以保留时间定性，外标法定量。 结果与讨论 2.1色谱条件的选择 考察了 Agilent Poroshell 120 Bonus-RP (4.6×50mm， 2.7um)和常规 C18液相色谱柱(4.6×250 mm， 5um)对8种药物的分离效果，发现用常规液相柱时，雌二醇与雌酮、坎利酮与己烯雌酚不能很好地分离，而 Agilent Poroshell 120 Bonus-RP 能得到理想的分离效果。色谱分离图如图1、图2所示。 流动相A考察了水、1%乙酸水溶液和10mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B考察了甲醇、乙腈的分离效果，结果显示，流动相A选用水和1%乙酸水溶液时，米诺地尔的保留不强，出峰太快，保留时间不易控制，峰形也有轻微拖尾现象，而采10mmol/L乙酸铵时，保留相对较强，能控制保留时间以实现与杂质的分离。流动相B选用甲醇和乙腈的分离效果相差不大，考虑到乙腈的成本与毒性，选择用甲醇。 t/min 图1使用 Poroshell 120 Bonus-RP 柱分离的标准色谱图(浓度为20mg/L) 1米诺地尔；2雌三醇；3螺内酯；4坎利酮；5雌酮；6雌二醇；7己烯雌酚；8黄体酮 图2使用常规C18 液相柱分离的标准色谱图(浓度为20mg/L) 1米诺地尔；2雌三醇；3螺内酯；4雌酮；5雌二醇；6坎利酮；7己烯雌酚；8黄体酮 2.2方法的线性范围和检出限 混合标准工作液的测定按照1.4的操作步骤，以添加剂的峰面积为纵坐标，含量为横坐标，绘制标准曲线。本方法中8种违禁药物在0.5~100 mg/L范围内均具有良好的线性关系，r均在0.999以上，螺内酯和黄体酮的方法定量限(S/N=10)为2.0 mg/kg， 其余6种药物的方法定量限均为 5.0mg/kg。 2.3方法的加标回收率和精密度 取上述空白样品1.0g， 分别添加混合标准储备液，使得样品中8种添加剂的浓度为50.0g/kg， 按样品前处理操作，方法的加标回收率和精密度结果见表1 表18种违禁药物的回收率、精密度(n=3) 违禁药物 添加浓度 (mg/kg) 平均回收率(%) 精密度 (RSD%) 米诺地尔 50.0 74.8 4.2 雌三醇 50.0 91.5 2.7 螺内酯 50.0 91.9 2.8 坎利酮 50.0 91.6 3.5 雌酮 50.0 92.7 2.5 雌二醇 50.0 93.8 3.6 己烯雌酚 50.0 83.8 2.7 黄体酮 50.0 100.4 2.1 小结 本法采用 Poroshell120 Bonus-RP建立了高效液相色谱-二极管阵列法检测育发类化妆品中米诺地尔、雌三醇、螺内酯、坎利酮、雌酮、雌二醇、己烯雌酚、黄体酮8种违禁药物的分析方法。该方法的分析速度迅捷、试剂消耗少、检出限低，结果令人满意，适合于检测工作的开展。 ( 参考文献 ) ( 1. 徐红蓉，许根英.复旦学报(医学科学版)，2001，28(2)： 157-158. ) ( 2. 李宁，侯璇珠，王锦旋，王铁杰，李玉兰，李军.分析测试 学)，2010，29(2)：115-119. ) ( 3. 武婷，王 超 ，李楠.色谱，2006，24(6)：589-591. ) ( 4. 潘莉，郭新东，罗海英，冼燕萍，柯振华，陈意光，吴玉銮， 江南大学学报(自然科学版)， 2011，1 0 (2)：217-220. ) ( 5. 王超，马强，王星，武婷，白桦，郝楠，王军兵·分析化学， 2007，35(9)： 1 257-1262. ) ( 6. De Orsi D， Pellegrini M， Pichini S， Mattioli D， Marchei E. J Pharm Biomed Anal. 2008， 4 8 (3)：641-648. ) ( 7. 虞成华，朱伟，陆志芸，宁啸骏，印杰，林毅侃.香精香料化妆 品，2011，4：36-38. ) ( 8. 吴维群，沈朝烨.环境与职业医学，2004，21(4)：307-309. ) ( 9. 陈新，田志壮，刘瑛，黄尧，曹玉华，分析测试学报， 2011，30(2)：203-206. ) ( 10 . 杭栋，汪小娅，倪鑫炯，曹玉华.分析化学，2011，39(2)： 168-172. ) 摘要随着生活水平的不断提高，人们对美发也有了更高的要求，各种标识具有防脱、生发功效的育发类化妆品应运而生、飞速发展。然而，部分化妆品企业盲目追求产品的有效性，于该类产品中添加《化妆品卫生规范》(2007 年版) 明确规定禁止添加的米诺地尔、螺内酯、雌性激素等成分。检测各种育发类化妆品中是否含有上述几种违禁药物，对于控制化妆品的产品质量，保障人民身体健康具有重要的意义。化妆品中米诺地尔、雌性激素、螺内酯等药物成分的检测方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱- 质谱联用法以及毛细管电动色谱 等。但是，到目前为止，仍没有全面、系统的对育发类化妆品中不同种类违禁药物进行同时检测的方法报道。本研究采用高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-DAD），使用poroshell 120 Bonus-RP 快速高效柱，能使 8 种不同违禁药达到完全分离。方法简单、快速、准确，能满足检测要求，并已成功用于实际样品的检测。小结本法采用Poroshell120 Bonus-RP 建立了高效液相色谱- 二极管阵列法检测育发类化妆品中米诺地尔、雌三醇、螺内酯、坎利酮、雌酮、雌二醇、己烯雌酚、黄体酮 8 种违禁药物的分析方法。该方法的分析速度迅捷、试剂消耗少、检出限低，结果令人满意，适合于检测工作的开展。