阿米舒必利中有机溶剂残留量检测方案(顶空进样器)

ApplicationNote：CM0029Part of Thermo Fisher Scientific 顶空气相色谱法测定阿米舒必利中有机溶剂残留量 朱曼洁赛默飞世尔科技(中国)有限公司 赵政华东师范大学脑功能研究所 1.前言 人用药品注册技术要求国际协调会议( InternationalConference of Harmonizition ICH)对药品残留溶剂有明确的定义以及相关的指导原则。ICH 将药品生产及纯化过程中常用的69种有机溶剂按照对人体和环境的危害程度分为4类。第l类溶剂是指已知可以致癌并被强烈怀疑对人和环境有害的溶剂，其残留量必须控制在规定的范围内；第II类溶剂是指无基因毒性但有动物致癌性的溶剂；第3类溶剂是指对人体低毒的溶剂；第4类是尚无足够哆理学资料的溶剂(1-3)。 阿米舒必利在提取过程中使用了有机溶剂甲醇和丙酮，按照上述指导原则，甲醇为第二类溶剂，其含量不能超过0.3%；丙酮为第三类溶剂，其含量不能超过0.5%。 本文介绍了用赛默飞世尔气相色谱仪(带FID检测器)和Triplus顶空自动进样器分析阿米舒必利中这两种有机溶剂残留的分析方法，方法学的验证表明，该方法准确有效。 2.实验方法 2.1仪器和式剂 TraceGC气相色谱仪(赛默飞世尔科技 Thermo FisherScientific公司)，带FID检测器；色谱柱为TR-V1 (30mx.25 mm x 3pm)； Triplus HS自动进样器(赛默飞世尔科技Thermo Fisher Scientific公司) 甲醇和丙酮(色谱纯)购置于sigma公司；N，N-二甲基甲酰胺(DMF，分析纯)。 2.2色谱条件 程序升温：初始温度：40℃(60min)， 升温速率：30℃/min至200℃(3min) 载气：恒流模式，流速为3ml/min 进样口：150℃，分流进样，分流比为10：1 检测器温度：250℃ 顶空参数设置： 孵化器温度：75℃ 孵化时间：30min 3.结果与讨论 3.1系统适应性 因待测药品的残留溶剂主要是甲醇和丙酮，因此选择迷2种有机溶剂，溶解在DMF电刮用性，典Acetone型4560000图见图1。结果显示，，在上述色谱条件下，各 图1 3.2顶空参数优化 3.2.1孵化器温度 分别取5mg甲醇和丙酮，溶于一定量的DMF中，使溶液的最终体积为5ml。平行制备4份相同浓度的待测样品，将孵化器的温度分别设置为65℃，75℃，85℃和95℃，以此判断不同孵化时间对检测结果的影响。结果(如图2)表明，随着孵化温度的升高，丙酮的峰面积也在增加，但是甲醇的响应却是在75℃时为最高，这与国家药典中推荐的孵化温度相一致(75℃~85℃)。并且，由于阿米舒必利的化学名为4-氨基-N-[(1-乙基-2-吡咯)甲基]-5-已砜基-2-甲氧基苯甲酰胺，黄仕璋等(4)通过研究表明，含甲氧基的样品在较高顶空温度下降解产生甲醇，而裂解速率主要受温度影响，随着样品孵化温度的增高，甲醇的含量也会显著的增高，因而影响了真实的检测结果。因此在检测时，我们将孵化器的的度设为75℃。 图2 3.2.2孵化时间 分别取5mg甲醇和丙酮，溶于一定量的DMF中，使溶液的最终体积为5ml。平行制备4份相同浓度的待测样品，将孵化器的温度分别设置为10min， 20min， 30min和40min，以此判断不同孵化时间对检测结果的影响。结果(如图3)表明，随着孵化时间的升高，丙酮和甲醇的峰面积均变化不大，考虑到样品中的有机溶剂可能需要较长的时间才有利于其挥发，因此我们将孵化时间设为20min。 图3 3.3标准曲线、检出限和精密度 本方法采用外标法定量，由于做顶空进样，考虑到不同样品体积对气体的膨胀有影响，所以这里以目标组分的峰面积Y对相应组分的绝对重量做标准曲线(5mg、1mg、500ug、100ug和50ug)，图4A和B显示，在这个仪器方法上甲醇和丙酮都有非常好的线性关系。以500ug为例，按信噪比为3计算得到甲醇的检出限为1.5ug，丙酮的检出限1ug。配置甲醇和丙酮均为500ug平行的标样5个，计算方法的重现性，得到甲醇的RSD值为3.76%，丙酮的RSD值为1.39。 图4A 图4B 3.4样品检测 精密称取1g样品，用10ml容量瓶定容，取5ml放入顶空瓶中，按照上述方法进行样品检测，每个样品平行进四次(谱图如图5所示)，结果如下表所示。按照ICH的标准，甲醇的为第二类溶剂，含量不能超过0.3%，丙酮属于第三类溶剂，含量不能超过0.5%，待测样品中的溶剂残留经检测分别为甲醇0.004%和丙酮0.05%，符合ICH的标准。 图5 3.5回收率实验 精密称取上述样品粉末0.5g， 准确加入500ug甲醇和丙酮，最后用DMF定容到5ml，之后进行样品检测，每个样品测定三次(样品加标如图6所示)，最终测得甲醇和丙酮的平均回收率分别为98.4%和101.7%。 In addition to theseoffices， Thermo FisherScientific maintainsa network of represen-tative organizationsthroughout the world. 图6 赛默飞世尔科技 3.6注意事项 上海 上海浦东新金桥路27号6号楼 所有样品溶解以及标样配置的过程需在冰上进行操作，防止有机溶剂挥发所引起的结果误差。 电话：86-21-6865 4588 传真：86-21-64457830 北京 ( 参考文献： ) 北京市东城区安定门东大街28号雍和大厦西楼702-715室电话：86-10-8419 3588 传真：86-10-84193589 ( 1.周海钧主译1药品注册的国际技术要求质量部分[M]北京：人民卫生出版社，2000：82 ) 广州 广州东风中路410-412号 健力宝大厦3003-3004室 2.中国药典[S].二部，2000：附录54 电话：86-20-83487138 传真：86-20-8348 6621 ( 3. Residual Solvent Testing： A Review of Gas-Chromatographicand Alternative Techniques. Pharmaceutical Research， 2003，20(3) ： 337-344 ) 服务热线： 8008105118 400650 5118 www.thermo.com ( 4.头孢西丁钠中甲醇残留量的顶空毛细管GC法测定. 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals2007，38(10)：727-728 ) analyze.cn@thermofisher.com 人用药品注册技术要求国际协调会议( International Conference of Harmonizition ICH)对药品残留溶剂有明确的定义以及相关的指导原则。ICH 将药品生产及纯化过程中常用的69 种有机溶剂按照对人体和环境的危害程度分为4类。第I类溶剂是指已知可以致癌并被强烈怀疑对人和环境有害的溶剂, 其残留量必须控制在规定的范围内；第II类溶剂是指无基因毒性但有动物致癌性的溶剂；第3类溶剂是指对人体低毒的溶剂；第4类是尚无足够毒理学资料的溶剂。阿米舒必利在提取过程中使用了有机溶剂甲醇和丙酮，按照上述指导原则，甲醇为第二类溶剂，其含量不能超过0.3%；丙酮为第三类溶剂，其含量不能超过0.5%。本文介绍了用赛默飞世尔气相色谱仪 (带FID检测器)和Triplus顶空自动进样器分析阿米舒必利中这两种有机溶剂残留的分析方法，方法学的验证表明，该方法准确有效。