金银花中氧乐果检测方案(液质联用仪)

SSL-CA14-215Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-216 上海市淮海西路570号红坊E楼 咨询电话：021-22013542http：//www.shimadzu.com.cn 超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法同时测定中药中153种农药残留 LCMSMS-216 摘要：相本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用同时测定中药中153种农药残留的方法。该方法在26 min 内完成153种农药的分离，在1.0~100 ug/L 范围内线性良好；在党参基质下，校准曲线相关系数均大于 0.995，加标回收率符合药典规定。该方法分析速度快、重复性好、灵敏度高，适合中药中农药的高灵敏度快速检测，可以应对2015版《中国药典》对中药材中农药残留量的测定要求。 关键词：超高效液相色谱仪三重四极杆质谱仪中药农药残留 中国药典2010版采用气相色谱法分析中药材及制剂中24种农药残留，与国际标准监控的农药品种有较大差距。中药基质复杂，色谱法容易出现假阳性。面对大量的受管控农药和越来越低的允许残留量，开发高灵敏度和高通量分析方法显得更为迫切。因此，2015版药典在2010版药典的基础上不仅增加了检测农药的种类，还将质谱法引入药典标准，利用GC-MS/MS 方法检测 中药中74种农药残留，利用 LC-MS/MS 方法检测中药中153种农药残留。 本文使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱LCMS-8050联用，建立了中药中153种农药的液相色谱-串联质谱的同时分析方法，供相关人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 与三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用系统。具体配置为：LC-30ADx2输液泵， DGU-20A，在线脱气机， SIL-30AC 自动进样器， CTO-20AC柱温箱， CBM-20A系统控制器，LCMS-8050 三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.80 色谱工作站。 1.2分析条件 液相色谱条件 分析仪器： LC-30A系统 流速：0.4mL/min进样体积：1uL柱温：40℃洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为30%，时间程序见表1。 质谱条件 脱溶剂管温度：200℃ 分析仪器：ILCMS-8050 加热模块温度：400℃ 离子源： ESI，正负离子同时扫描 接口温度：300℃ 离子源接口电压：++4.5kV；-3.5kV 雾化气：氮气2.0L/min 扫描模式：多反应监测(MRM)驻留时间：1.0-8.0 ms 干燥气：氮气10 L/min 延迟时间：1 ms 加热气：空气10L/min MRM参数：见表2 碰撞气：氩气 1.3样品制备 样品前处理方法：参照2015版药典通则2341，使用岛津技迩 QuEChERS 产品进行样品前处理。具体为：精密称定3g均质样品，置50mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰乙酸溶液15mL， 涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入入腈 15 mL， 涡旋使混匀，置振荡器上剧烈震荡(500次/min)5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4：1)7.5 g(货号：5010-050020)，立即摇散，再置振荡器上剧烈震荡(500次/min)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(4000转/min)5分钟，取上清液9mL，置已预先装有净化材料的分散固相萃取净化管[无水硫酸镁 900 mg， N-丙基乙二胺(PSA)300mg， 十八烷基硅烷键合硅胶300 mg， 石墨化炭黑90 mg， 硅胶300mg，货号：5010-015050]中，涡旋使充分混匀，再置振荡器上剧烈震荡(500次 /min)5 分钟使净化完全，离心 (4000转/min)5分钟，精密吸取上清液1mL，用微孔滤膜(0.22 um)滤过，取续滤液，即得。 标准溶液配制：使用空白基质配制浓度为1.0 ug/L、5.0 ug/L、10.0 ug/L、25.0 ug/L、50.0 pg/L 和 100.0 ug/L 的不同浓度的标准样品。 44 Carbaryl 甲萘威 5.162 63-25-2 202.05 145.05 127.10 -14 -10 -29 -14 -25 -21 45 Ethiofencarb 乙硫苯威 5.295 29973-13-5 226.10 107.05 164.05 -26 -15 -19 -26 -8 -30 46 RH5849 抑食肼 5.323 112225-87-3 295.10 121.10 77.25 13 18 22 13 32 30 47 Fosthiazate 噻唑磷 5.335 98886-44-3 284.10 228.00 104.05 -30 -10 -24 -30 -21 -19 48 Disulfoton-sulfoxide 乙磷亚砜 5.367 2497/7/6 291.00 185.00 212.95 -30 -15 -19 -30 -9 -23 49 Disulfoton-sulfone 乙拌磷砜 5.446 2497/6/5 306.80 96.90 124.95 -15 -30 -18 -15 -17 -23 50 Paraoxon 乙基对氧磷 5.447 311-45-5 276.00 219.80 94.05 -11 -14 -23 -11 -36 -17 51 Phorate Sulfone 甲拌磷砜 5.472 2588/4/7 292.90 171.05 142.90 -11 -12 -29 -11 -16 -28 52 Isoprocarb 异丙威 5.526 2631-40-5 194.10 95.00 137.10 -21 -14 -17 -22 -10 -14 53 Fensulfothion 丰索磷 5.576 115-90-2 309.00 281.00 253.00 -11 -15 -30 -11 -18 -26 54 Fensulfothion-oxon-sulfone 氧丰索磷砜 5.578 6132-17-8 309.05 253.00 281.05 -23 -15 -12 -23 -10 -30 55 Atrazine D5 (ethylamino D5) 气代莠去津 5.587 163165-75-1 221.15 179.10 101.20 -18 -18 -18 -18 -24 -18 56 Atrazine 莠去津 5.629 1912-24-9 216.10 174.05 96.05 -30 -17 -18 -30 -25 -17 57 Metalaxyl甲霜灵 5.647 70630-17-0 280.10 220.20 192.20 -30 -13 -24 -30 -18 -20 58 Fensulfothion-sulfone 丰索磷砜 5.673 14255-72-2 324.90 268.90 296.90 -23 -16 -29 -23 -12 -20 59 Pirimiphos-methyl-N-desethyl N-去乙基甲基嘧啶磷 5.821 67018-59-1 278.00 246.00 125.00 -21 -18 -26 -21 -24 -24 60 Phorate-oxon 氧甲拌磷 5.869 2600-69-3 244.95 75.05 81.20 -17 -12 -30 -17 -55 -14 61 Chlorantraniliprole 氯虫苯甲酰胺 5.883 500008-45-7 484.00 452.90 285.85 -24 -19 -30 -24 -16 -30 62 Methidathion 杀扑磷 5.931 950-37-8 303.00 145.00 85.10 -21 -8 -15 -21 -22 -30 63 Fenthion-oxon 氧倍硫磷 5.975 6522/12/1 一 9w8 Nw 96 9 966O w w9 69 8 90 9 16w 4 1 49 4 1w oo rxx3 otox xo 9w6601O 9 O9 w090 90 9 w 9 6 O 6 9 166w 16 结果与讨论 2.1标准样品色谱图 图1153种农药标准样品色谱图(10.0 ug/L) 2.2线性关系 将配制的1.0 ug/L、5.0 ug/L、10.0 ug/L、25 ug/L、50.0 ug/L和100.0 ug/L 不同浓度的标准溶液，按1.2中的分析条件进行测定，根据2015药典通则2341要求，液相色谱-串联质谱法推荐气代莠去津作为内标，利用内标法制作校准曲线，线性良好，线性方程、相关系数和线性范围见表3。根据2015版药典通则2341规定，定性离子与定量离子比例大于50%，允许20%偏差；比例在20%~50%之间，允许25%偏差；比例在10%~20%之间，允许偏差30%；比例小于10%，允许偏差50%。 表3153种农药校准曲线参数 编号 名称 校准曲线 相关系数R 线性范围 检出限 定量限 (ug/L) (ug/L) (ug/L) 啶虫脒 Y=(0.0679004)X+(0.0127557) 0.9970 1~100 0.134 0.407 2 甲草胺 Y=(0.174217)X+(-7.47954e-005) 0.9994 1~100 0.131 0.395 3 涕灭威 Y=(0.0100575)X +(-0.00106663) 0.9997 1~100 0.012 0.137 4 涕灭威砜 Y=(0.143199)X+(-0.00256000) 0.9999 1~100 0.157 0.476 5 涕灭威亚砜 Y=(0.0313657)X+(0.00126130) 0.9997 1~100 1.009 3.056 6 莠灭净 Y=(0.646106)X+(-0.00878823) 0.9991 1~100 0.048 0.164 7 莠去津 Y=(0.148471)X+(0.0205149) 0.9974 1~100 0.260 0.786 保棉磷 Y=(0.0187926)X+(-0.000188554) 0.9996 1~100 0.057 0.174 9 嘧菌酯 Y=(0.259840)X+(0.0182186) 0.9994 1~100 0.022 0.067 10 苯霜灵 Y=(0.416598)X+(-0.0249808) 0.9997 1~100 0.034 0.103 11 双苯三唑醇 Y=(0.0146417)X +(0.00200368) 0.9983 1~100 0.211 0.639 143 除线磷 Y=(0.0867808)X+(-0.000692979) 0.9997 1~100 0.070 0.211 144 氟胺氰菊酯 Y=(0.00242709)X+(0.000389118) 0.9988 1~100 0.314 0.951 145 乙酰甲胺磷 ￥=(0.0354691)X+(-0.00325646) 0.9996 1~100 0.037 0.113 146 氰氟草酯 Y=(0.000705155)X+(1.29001e-005) 0.9952 1~100 0.035 0.107 147 乙基对氧磷 Y=(0.353681)X+(-0.0105232) 0.9977 1~100 0.017 0.053 148 氧丰索磷 Y=(0.0836830)X+(-0.000766702) 0.9995 1~100 0.012 0.035 149 除虫脲 Y=(0.000638172)X+(3.60061e-005) 0.9988 10~100 0.559 1.695 151 抑食肼 Y=(0.00643249)X+(-0.000561193) 0.9996 1~100 0.232 0.702 152 甲苯氟磺胺 Y=(0.0206163)X+(0.00513151) 0.9958 1~100 0.501 1.517 153 氧丰索磷砜 Y=(0.0390179)X+(0.00162145) 0.9998 1~100 0.051 0.154 2.3基质提取液加标精密度实验 对空白党参样品按照1.3中处理方法加标至10.0 ug/L 浓度，平行处理6份，考察保留时间和浓度的重复性结果如表4所示。 表4153种农药保留时间和峰面积重复性结果(n=6) RSD% 编号 名称 R.T 浓度 回收率% 啶虫脒 0.228 3.318 85.9 2 甲草胺 0.188 3.906 85.9 3 涕灭威 0.175 6.850 79.2 4 涕灭威砜 0.385 2.291 80.7 5 涕灭威亚砜 0.424 3.991 75.5 6 莠灭净 0.088 2.798 80.4 莠去津 0.101 3.808 85.5 8 保棉磷 0.085 2.887 85.4 9 嘧菌酯 0.074 2.044 85.2 10 苯霜灵 0.081 4.598 81.5 11 双苯三唑醇 0.095 5.061 113.3 12 噻嗪酮 0.076 4.071 72.0 13 丁草胺 0.363 2.921 81.2 14 硫线磷 0.072 2.870 76.2 15 甲萘威 0.102 3.656 89.7 16 多菌灵 0.352 3.466 76.4 17 克百威 0.120 4.462 87.0 18 3-羟基克百威 0.189 1.607 80.7 19 烯草酮 0.146 7.012 91.5 20 嘧菌环胺 0.069 2.708 79.0 21 二嗪磷 0.074 3.959 81.9 22 乐果 0.224 3.917 79.6 23 烯唑醇 0.078 5.124 82.0 24 乙硫苯威 0.115 5.148 78.8 2.4银银花样品中153种农残残留检测 金银花样品中检测到多菌灵、杀扑磷和氧甲拌磷砜3种农药残留，具体残留量见表5. 图2金银花样品中多菌灵MRM谱图 图3金银花样品中杀扑磷MRM谱图 图4金银花样品中氧甲拌磷砜MRM谱图 表55·金银花样品中农药残留量 农药 浓度(ug/kg) 多菌灵 48.35 杀扑磷 4.78 氧甲拌磷砜 6.12 结论 采用岛津公司 LCMS-8050三重四极杆液质联用仪分析2015版《中国药典》通则2341中规定的153种农药组分，方法操作简单。基质提取液加标样品的校准曲线相关系数均大于 0.995，加标回收率符合药典规定(加样回收率应在70%~120%之间。在重现性可获得的情况下，部分农药回收率可放宽至50%~130%)，并利用该方法定量了金银花中153种农药残留，检测出3种农药残留。该方法分析速度快、重复性好、灵敏高，适合中药中常用农药的高灵敏度检测，可以应对2015版《中国药典》中对中药材中农药残留量的测定要求。 ( 岛津全球应用技术开发支持中心 ) 采用岛津公司 LCMS-8050 三重四极杆液质联用仪快速分析哺乳动物细胞培养上清液中95种营养物质和代谢物质在13天培养过程中（每天加料）的相对浓度变化情况，从而对哺乳动物细胞培养工艺提供可靠的参考依据。参考“细胞培养分析方法包”，该方法无需优化仪器参数，方法操作简单，结果直观。