Oasis小柱和96孔板中维护和使用方法检测方案(固相萃取)

「维护和使用手册WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 维护和使用手册 Oasis小柱和96孔板 1. 简介 a. Oasis HLB b. Oasis PRiME HLB c.Oasis混合模式反相离子交换柱 Il. 通用样品预处理方法 a. 生物样品 b.固体样品：土壤、完整食品样品、组织 c.水性样品：水、饮料 d. 非水性液体 IIl. 食品样品中多残留污染物分析的OASIS PRiME HLB预处理方法 a. 固样样品的兽药分析： 肉类组织、内脏、海产品 b.粉末样品的兽药分析： 奶粉、婴儿配方奶粉 C.水性样品的兽药分析： 牛奶、液态婴儿配方奶、乳饮料 d. 含脂肪水果的农药分析：鳄梨 e.油类的农药分析： 橄榄油、花生油、植物油 f.谷物中的毒素分析： 玉米、小麦、大米 IV. 建议体积 V. 使用OASIS HLB提取酸性、中性和 VI. 使用OASIS PRiME HLB提取酸性、中性和碱性化合物的固相萃取方案a.方案b.优化C. I故障排除 VII. 使用OASIS MCX提取碱性化合物以及使用OASIS WAX提取强酸性化合物的固相萃取方案 VIII. 使用OASIS MAX提取酸性化合物以及使用OASIS WCX提取强碱性化合物的固相萃取方案 IX. OASIS混合模式反相离子交换吸附剂选择和方案图 X. 针对uELUTION提取板的OASIS 2x4方法学 XI. 针对治疗性肽生物分析优化的OASIS PSTuELUTION方法 XII. OASIS 96孔板规格 XIII. 注意事项 *Oasis包装中随附的COA报告是我们对其中的共聚物吸附剂批次和孔板批次进行严格质量控制测试所得的结果。 1.简介 Oasis°系列固相萃取(SPE)产品将适用的吸附剂填料、产品规格和操作方法相结合，专为简化和改进您的样品制备方案而设计。我们提供六种Oasis吸附剂填料，可满足您的各种样品制备需求。这些填料都基于独特的水浸润性Oasis HLB(亲水亲脂平衡)共聚物，可获得优异的结果。 A.OASIS HLB Oasis HLB是一种亲水亲脂平衡的水浸润性反相吸附剂，是一款酸性、中性和碱性化合物均适用的通用型吸附剂。它由特定比例的两种单体(亲水性N-乙烯吡咯烷酮和亲脂性二乙烯基苯)制成。其中性的极性“钩”状结构提高了对极性分析物的保留能力，因此具有出色的反相保留性能。 Waters°推出了一系列基于这种独特基质的SPE吸附剂，它们都拥有该基质的几个主要特性：在极端pH条件下和多种溶剂中均可保持稳定，对极性化合物的保留性能极佳，而且相对疏水保留能力比传统硅胶基质SPE吸附剂(如C)强3倍。 水浸润性Oasis吸附剂对极性范围更广的分析物具有优异的保留能力，即使吸附床在活化或上样过程中变干，其保留能力也不受影响。这意味着SPE方法更加稳定可靠，您不再需要重复制备样品。 保留能力[k]增强的优势在于更多分析物将得到保留，穿透流失更少，进而可提升SPE方法的回收率和总体重现性。 这款产品有五种粒径(60 um、30 pm、25 pm、15 pm和5 pm)可供选择。 B.OASIS PRIME HLB 在常规分析中通过反相SPE方法提取酸性、碱性和中性化合物的首选样品净化产品。 Oasis PRiME HLB有效简化了固相萃取过程，让科学家们能够采用更简单的方案获得更更净的样品，同时让液流更快速、更均匀地通过小柱和提取板，减少样品堵塞。Oasis PRiME HLB吸附剂充分利用Oasis HLB的高容量和水浸润性优势，省去了SPE方案中的活化和平衡步骤。 无需活化和平衡操作即可直接上样到吸附剂上，节省了时间和溶剂成本。此外，得益于水浸润性特性， Oasis吸附剂即使在较强的真空或正压条件下也可保持润湿，因此重现性和回收率远远高于水浸润性不及Oasis吸附剂的硅胶基质或其它聚合物材料。Oasis PRiME HLB是净化生物和食品基质的理想之选。 C. Oasis混合模式反相离子交换柱 Oasis HLB的衍生产品磺酸类MCX(混合模式阳离子交换)和季胺类MAX(混合模式阴离子交换)拥有双保留模式(即同时具有反相和离子交换保留模式)，分别为碱性和酸性化合物提供了更高的净化选择性和灵敏度，即使孔内的吸附剂变干，性能也不受影响。羧酸类WCX(弱阳离子交换)和哌嗪类WAX(弱阴离子交换)也是拥有双保留模式的Oasis HLB衍生产品。这些吸附剂拥有与HLB相同的优势和特点，分别具有保留/释放强碱性化合物(例如季胺类)和强酸性化合物(例如磺酸盐)的能力。 这六种获专利的Oasis填料均提供多种产品形式(例如小柱、96孔板和pElution提取板)，可满足您的具体需求。 ( 注：使用水和甲醇都能很好地湿润Oasis HLB吸附剂，因此上样之前无需使孔内的吸附剂保持润湿状态。这一优势不仅能节省时间，而且相较于使用传统吸附剂可获得更高的重现性和回收率。 ) II.通用样品预处理方法 A.生物样品 本节内容包括在固相萃取之前的生物样品制备(血浆、血清、尿液等)的建议。 配制酸化或碱化的水稀释剂。 注：4%磷酸的配制，将4.7mL 85%磷酸(最常见的规格)用水稀释至100mL。加入11.76mL先前配制好的酸，并用水定容至250mL。5%浓氨水的配制，将5mL浓氨水溶液用水稀释至100mL。用户需要配制过量体积(100-250mL)的预处理缓冲液用于多个样品，同时须确保缓冲液组成一致。 1.月用酸化或碱化的水按1：1的比例稀释血浆或尿液样品。加入10~50uL内标。 注：最终溶液中有机相的浓度不得超过10%，否则将发生蛋白质沉淀。如有必要，在8，000xg离心力下将样品离心10~30 min， 使其澄清。 B.固体样品：土壤、完整食品样品、组织 1.用适当的溶剂将样品制成匀浆，获得水相或有机相的样品提取物。选择的初始提取条件应最大程度提高分析物回收率，同时最大程度减少基质干扰。在大多数情况下，加入缓冲液、分散性盐或助溶剂有助于提高提取效率。 2.调节初始提取物用以优化分析物在SPE吸附剂中的保留性能。可采用的方法包括调节pH、调节溶剂或通过挥干和复溶进行溶剂交换(请参阅第V和VI节)。上样之前可能需要对样品进行离心或过滤。 C.水性样品：水、饮料 调节pH，最大程度提高分析物在SPE吸附剂中的保留性能。可使用缓冲盐和分散剂改善分析物在SPE吸附剂中的分配性能。在SPE处理之前可能需要通过过滤或离心等预处理去除悬浮物。 D.非水性液体 如果适用，，可使用水性缓冲液和有机助溶剂稀释样品，然后再进行反相或混合模式SPE净化。如果稀释程度足够高，可采用与水性样品类似的方法来处理样品。 ( 注：如有必要，过滤样品以除去其中的悬浮固体。 ) ( (例如环境样品/废水样品/水分析样品/食品样品等。) ) Ⅲ.食品样品中多残留污染物分析的OASIS PRiMEHLB预处理方法 A.固体样品的兽药分析：肉类组织、内脏、海产品、鸡蛋 用合适的搅拌装置或研磨装置将样品制成成浆。取1~5g匀浆样品，用10mL提取溶剂进行提取。*振荡至少30 min后， 在约2500 rcf下离心样品5 min。移取上清液用于后续的净化步骤。 推荐的提取溶剂组成：含0.2%甲酸的80：20乙腈/水。 *对于鸡蛋样品，建议使用8mL提取溶剂。 B.粉末样品的兽药分析：奶粉、婴儿配方奶粉 称取0.5~1g粉末样品装入50mL离心管中。加入3mL提取溶剂。振荡至少30 min后， 在约2500 rcf下离心样品5 min。移取上清液用于后续的净化步骤。 推荐的提取溶剂组成：含0.2%甲酸的70：30乙腈/水。 C.水性样品的兽药分析：牛奶、液体婴儿配方奶、乳饮料 吸取1mL液体样品至15mL离心管中。加入4mL含0.2%甲酸的乙腈溶液。用手大力振摇离心管1 min， 然后在约2500 rcf下离心样品至少5 min。移取上层乙腈溶液用于后续的净化步骤。 D.含脂肪水果的农药分析：鳄梨 按照推荐的QuEChERS方案进行样品提取。称取1~5g样品装入50mL离心管中。加入适量的水和乙腈(或AOAC方法专用的经1%乙酸酸化的乙腈)。涡旋混合并振荡之后，将QuEChERS提取盐加入离心管中。用手大力振摇离心管1 min， 然后在约2500rcf下离心样品至少5 min。移取上层乙腈溶液用于后续的净化步骤。 E.油类的农药分析：橄榄油、花生油、植物油吸取1mL油类样品至15mL离心管中。向离心管中加入1mL正己烷，然后充分混合。将5mL用正己烷饱和的乙腈加入离心管中。用手大力振摇离心管1 min， 然后在约2500 rcf下离心样品至少5min。移取上层乙腈溶液用于后续的净化步骤。 F.谷物中的毒素分析：玉米、小麦、大米根据QuEChERS方案使用改性提取溶剂进行样品提取： 称取1~5g均质样品装入50mL离心管中。向离心管中加入10 mL水和10 mL 10：90甲酸/乙腈。涡旋混合并振荡之后，将QuEChERS提取盐加入离心管中。用手大力振摇离心管1 min，然后在约2500 rcf下离心样品至少5 min。移取上层乙腈溶液用于后续的净化步骤。 IV.建议体积 表1.通用方法的推荐体积(假设稀释比为1：1) 小柱 96孔板 uElution 提取板 小柱尺寸/ 吸附剂质量 1cc 3 cc 6 cc 12cc 20 cc 35 cc 5mg 10 mg 30 mg 60 mg 2mg 活化/平衡(mL) 1mL 2mL 3mL 5mL 10 mL 50mL 0.2 mL 0.5mL 0.5-1.0mL 0.5- 2.0mL 0.2mL 基质和稀释液的最大上样量 1mL 2mL 5mL 15mL 30 mL 100mL 0.5mL 1mL 1-2mL 1-2mL 0.025- 0.75mL 清洗溶液(mL) 1mL 2mL 4mL 5mL 10 mL 40mL 0.2 mL 0.5mL 0.5-1.0mL 1-2 mL 0.2 mL 洗脱溶液(mL) 1mL 2mL 4mL 5mL 10 mL 60 mL 0.05- 0.2mL 0.15- 0.3mL 0.4- 0.8- 0.025- 2.0mL 0.10mL 1.0 mL 表2.大体积水样分析的上样量 小柱尺寸/ 吸附剂质量 1cc 3 cc 6cc (200mg， 30 pm) 6cc (200 mg， 60 um) 12 cc 20 cc 35 cc 上样量(mL水*) (基质与稀释液之和) 50mL 200mL 500 mL 1000mL 1000 mL 2000mL 5000mL 表3.使用Oasis PRiME HLB小柱进行多残留污染物分析时的样品提取物推荐过柱体积 小柱 小柱尺寸/吸附剂质量 3cc/60mg 3cc/150 mg 6cc/200mg 6cc/500 mg Plus轻型小柱/ 100mg Plus短柱/ 335mg 样品 一般用量 0.5mL 1.3 mL 1.7 mL 4.2mL 0.8 mL 2.8mL 提取物体积 最大体积 1.0 mL 2.5mL 3.3mL 8.0mL 1.7 mL 5.7mL 注：上表列出的体积适用于用乙腈提取的食品样品或含水性缓冲溶液的混合物。 V.使用OASIS HLB提取酸性、中性和碱性化合物的固相萃取方案 1. 将Oasis HLB小柱或提取板安装到弦空萃取装置上，并将真空度设置为5"汞柱。 2.使用甲醇进行活化(使用Oasis HLB时该步骤为可选步骤，并非必须执行)。 3.使用水进行平衡(使用Oasis HLB时该步骤为可选步骤，并非必须执行)。a.在上述两个步骤中(活化和平衡)，都要在抽真空之前加入溶剂。 4.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空(关闭真空泵之前，请将真空度降至最低设定值)。 5.上样稀释后的样品。 6.在最低真空度下启动或打开阀门，根据需要逐渐提高真空度，将全部样品上样至吸附床上。 7.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空。 8.加入5%甲醇水溶液作为清洗溶剂。 9.开始抽真空，使真空度达到5"汞柱(休据需要进行调节/升高)。 10.继续抽真空30s~1min以去除残留的清洗溶剂。 11.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空(关闭真空泵之前，请将真空度降至最低)。 12.释放真空并弃去废液，插入收集装置并更换盖子。 13.加入100%有机洗脱溶剂，并在启动真空泵之前等待溶剂在重力作用下通过小柱/提取板。 14.在尽可能最低的真空度下启动或打开阀门，并根据需要逐渐提高真空度。 15.继续抽真空30s~1min(以收集所有的洗脱溶剂)。 16.取下收集装置。 17.根据需要挥干/复溶或稀释样品。 18.将样品转移到样品瓶或样品板中以待分析。 19.如果使用样品板，在分析之前须加盖。 ( 注：建议上样和洗脱步骤的流速不要超过1.0 mL/mi n 。所有其它步骤 允许采用的最高流速为5 mL/min。 ) ( 注：您可能需要临时提高真空度以使水性溶液开始流动。 ) A. OASIS HLB SPE通用方法 请勿使用基于C，或其它硅胶基质小柱开发的方法(参见下文注释)。 快速Oasis HLB通用方法是LC-MS/MS分析的理想之选。 如果需要更纯净的样品背景以达到更高的灵敏度或选择性，可使用全面的方法开发策略对通用方案进行优化。 该策略应用整个pH范围(pH1~14)并改变有机溶剂的含量。 ( 注：为C.或其它硅胶基质吸附剂开发的清洗和洗脱步骤可能不适用于 Oasis HLB聚合物吸附剂。 ) 甲醇/水溶液 清洗2 5%NH，OH的 甲醇/水溶液 配制样品溶液 洗脱 2%甲酸的 甲醇/水溶液 用酸或碱配制 活化 甲醇 平衡 水 上样 样品溶液 清洗1 5%甲醇水溶液 要想获得更纯净的提取物，可从通用方法的第一个清洗步骤开始应用优化策略。 道通过调节附加清洗液的pH可提高分析物的保留性，从而可使用较高浓度的有机溶剂去除干扰物。 对于酸性分析物，降低pH(降至化合物的pKa以下)以提高分析物的保留性。 又对于碱性分析物，提高pH(提高到化合物的pKa以上)以提高分析物的保留性。 然后改变pH以洗脱分析物。在每个pH值条件下，通过以10%的增量改变甲醇百分含量来确定“清洗2”和“洗脱”步骤的溶剂百分比。 通过分析“清洗2”和“洗脱”步骤得到的样品确定最佳的甲醇百分含量。 ( 为“清洗2”步骤选择不会去除任何分析物的最高甲醇百分含量。 ) Oasis HLB 20瓶优化方法 可应用化学和色谱原理对Oasis HLB方法进行优化。通过调节流动相的pH以及其中有机溶剂与水的比率可以控制保留性能，从而显著提高选择性。 如果分析物或干扰物可电离，那么这类物质在带有电荷的状态下具有很强的极性，可通过弱流动相洗脱。如果通过改变pH使它们转化为中性状态，则主要利用它们与吸附剂表面之间的疏水相互作用对其进行保留。在这种情况下，必须使用有机溶剂浓度更高的强流动相才能成功完成洗脱。 沃特世化学家发表的研究结果清晰地展示了应用这种2-D(二维)方案优化Oasis HLB净化方法的优势。下文的图中汇总了阿普洛尔的保留理论、清洗-洗脱研究，以及通过优化Oasis HLB方法连续实现的选择性提升。 清洗/洗脱步骤： Oasis HLB的20瓶优化方法 Oasis HLB的20瓶优化方法的第一步是将分析物加入盐溶液，然后将其上样至96孔板或20个Oasis HLB小扣中。按照如下步骤配制20瓶溶剂。首先，我们使用含5%甲醇的碱性清洗溶液去除蛋白质，以防止孔被堵塞，并使碱性化合物处于中性状态以增强反相保留性能。 通用Oasis HLB方法中的5%甲醇清洗步骤(去除盐和蛋白质)所用的溶剂非常弱，不会洗脱分析物。使用有机溶剂百分比逐渐升高的清洗液对重复样进行淋洗。 绘制响应-有机容剂百分比曲线，并据此确定用于清洗和洗脱步骤的有机溶剂百分比。运行2-D优化(“20瓶优化”)后，选择强度不太高(否则将可能损失分析物)并能最有效地去除不必要组分的清洗步骤很重要。 另外，建议选用强度合适的洗脱有机溶剂比率，使其恰好足以洗脱分析物并使疏水性最强的干扰物保留在吸附剂上。 Oasis HLB的20瓶优化方法：示例 清洗1：含5%甲醇的碱性溶液(去除蛋白质，防止孔堵塞；碱性化合物处于中性状态以增强保留性能)。 ( 清洗2：含40%甲醇的碱性溶液(去除亲水性碱性化合物、中性化合物以及所有的酸)。 ) ( 清洗3：100%水(去除残留的氢氧化铵)。 ) 洗脱：含70%甲醇的酸性溶液(大鼠血浆样品获得了101%的回收率)。 ( 注：根据不同的基质和灵敏度要求，可能需要进行额外的清洗。 ) a.通过调节优化回收率 向适当体积的试剂水中加入所有分析物和内标/替代标准品。执行第II节中的步骤4a-4e，但使用样品架将上样(4c)、清洗(4d)和洗脱(4e)步骤中的洗脱液收集到单独的收集容器中。此外，另使用一份甲醇重复步骤4e并收集洗脱液。分析收集到的四种馏分。根据下表确定调节方案(如有必要)，优化样品回收率。 如果该步骤得到的馏分中 包含分析物： 进行如下调节以获得最佳样品回收率： 上样(4c) 已知Oasis HLB吸附剂对离子化分析物的保留性比硅胶基质反相吸附剂更强。不过，抑制分析物 电离可进一步提高回收率。对于酸性分析物，将样品pH值调节为低于该酸pK至少两个pH单位。 对于碱性分析物，将样品pH值调节为高于共轭酸pK，至少两个pH单位。 清洗(4d) 仅使用水(而非5%的甲醇水溶液)作为清洗溶液可提高强极性分析物的回收率。 首次洗脱(4e) 如果所得馏分中的分析物已达到可接受的回收率(通常为>90%)，则无需进行调节。 二次洗脱(重复4e) 对于非极性分析物，甲醇的洗脱强度可能不够。可采用乙腈或乙酸乙酯等更强的溶剂来代替甲醇， 或依次使用这些溶剂。此外，对于可电离的分析物，可能需要向甲醇中加入2%的酸或2%的碱对 其进行改性(视情况而定)。如果使用比甲醇或乙腈更强的溶剂进行洗脱，那么应在甲醇活化步骤 之前增加初步活化步骤(参见步骤4a)。 例如，如果使用乙酸乙酯作为洗脱剂，应先用乙酸乙酯活化小柱，再依次用甲醇(4a)和水(4b)进行 活化。 ⅥI.使用OASIS PRIME HLB提取酸性、中性和碱性化合物的固相萃取方案 3步(保留与洗脱)方案 1.*将Oasis PRiME HLB小柱或提取板安装到真空萃取装置上并将真空度设置为3"汞柱。 2.上样稀释后的样品。 3.在最低真空度下启动或打开阀门，根据需要逐渐提高真空度，将全部样品上样至吸附床上。 4.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空。 5.加入5%甲醇水溶液作为清洗溶剂。 6.开始抽真空，使真空度达到3"汞柱(根据需要进行调节/升高)。 7.继续抽真空30 s~1min以去除残留的清洗溶剂。 8.3关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空(关闭真空泵之前，请将真空度降至最低设定值)。 9.释放真空并弃去废液，插入收集装置并更换盖子。 10.加入乙清/甲醇(90/10)作为洗脱溶剂，并在启动真空泵之前等待溶剂在重力作用下通过小柱/提取板。 11.在尽可能最低的真空度下启动或打开阀门，并根据需要逐渐提高真空度。 12.继续抽真空30 s~1min(以收集所有的洗脱溶剂)。 13.取下收集装置。 14.根据需要挥干/复溶或稀释样品。 15.如有必要，将样品转移到样品瓶或样品板中以待分析。 16.如果使用样品板，在分析之前须加盖。 ( 注：建议上样和洗脱步骤的流速不要超过1.0 mL/mi n 。所有其它步骤允许采用的最高流速为5 mL/min。 ) ( 注：您可能需要暂时提高真空度以使水性溶液开始流动。 ) 2步(通过式)方案 注：2步方案非常适用于含高浓度有机溶剂并且无需进行浓缩和/或除盐的样品(例如肉类或组织的乙腈提取物)。 1.将Oasis PRiME HLB小柱或提取板安装到真空萃取装置上并将真空度设置为大约3"汞柱。如果使用Plus规格的小柱，请在Plus小柱顶端加装合适的载样容器。 2.在装置下方放置合适的样品收集容器。 3.上样含高浓度有机溶剂的样品。 4.在最低真空度下(约3"汞柱，可根据需要进行调节)启动或打开阀门，根据需要逐渐提高真空度，使全部样品通过吸附床，并收集洗脱液。 5.向吸附剂中额外加入一些溶剂(与上样操作相同)并使其通过吸附床，将装置中剩余的保留体积洗出。将洗脱出的液体收集到同一收集容器中。 6.继续抽真空30 s~1 min(以收集所有溶溶)。 7.取下收集装置。 8.根据需要挥干/复溶或稀释样品。 9.如有必要，将样品转移到样品瓶或样品板中以待分析。 10.如果使用样品板，在分析之前须加盖。 Plus小柱的手动操作 注： Plus轻型小柱/Plus短柱可在无真空或正压装置的情况下使用。将Oasis PRiME HLB小柱连接到注射器底部，然后推入样品使其通过小柱即可。 根据表3从样品容器中吸取戏量样品提取物。 2.将Plus小柱连接到注射器顶端。推动活塞，将净化后的样品收集到样品瓶中。 3.如有必要，用适当的溶剂稀稀样品提取物用于LC或GC分析。 优化 清洗步骤：根据目标分析物的疏水性，可通过提高甲醇水溶液的浓度来优化清洗步骤。选择不会洗脱目标分析物但能洗脱疏水性较弱的干扰物的最高甲醇百分比。 洗脱步骤：乙腈/甲醇(90/10)洗脱溶剂是既能彻底洗脱大多数目标分析物，又能让基质干扰物保留在吸附剂上的最佳洗脱溶剂。如果需要使用更大体积的质子溶剂进行洗脱，。F可将甲醇浓度增加至大约30%来优化该步骤。 如需更多信息，请从www.waters.com网站下载《Oasis样品萃取产品手册》(文献编号720001692ZH)。 VI.使用OASIS MCX提取碱性化合物以及使用OASIS WAX提取强酸性化合物的固相萃取方案 1.将Oasis MCX或Oasis WAX小柱或提取板安装到真空萃取装置上并将真空度设置为5"汞柱。 2.使用甲醇进行活化。 3.用水平衡。 a.在上述两个步骤中(活化和平衡)，都要在抽真空之前加入溶剂。 注：由于Oasis HLB具有水浸润性，因此可省去活化和平衡步骤。如有需要，可比较执行和不执行这些步骤的方案所得的结果，以评估它们对最终分析结果的影响。 4.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空(关闭真空泵之前，请将真空度降至最低)。 5.上样稀释后的样品。 6.在最低真空度下启动或打开阀门，根据需要逐渐提高真空度，将全部样品上样至吸附床上。 7.关关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空。 ( 8.加入2%甲酸水溶液或其或合适的酸(例如0.1 N HCI)作为清洗溶剂。 ) ( 9.开始抽真空，使真空度达到5"汞柱(根据需要进行调节/升高)。 ) 10.继续抽真空30s~1min以去除残留的清洗溶剂。 ( 11.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空。 ( 关闭真空泵之前， 请将真空度降至最低). ) 12.加入100%有机洗脱溶剂，并在启动真空泵之前等待溶剂在重力作用下通过小柱/提取板。 13.开始抽真空，使真空度达达5"汞柱(根据需要进行调节/升高)。 14.继续抽真空30 s~1 min以去除残留的清洗溶剂。 15.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空。(关闭真空泵之前，请将真空度降至最低)。 16.释放真空并弃去废液，插入收集装置并更换盖子。 17.加入5%氢氧化铵的甲醇溶液作为洗脱溶剂，并在启动真空泵之前等待溶剂在重力作用下通过小柱/提取板。 18.在尽可能最低的真空度下启动或打开阀门，并根据需要逐渐提高真空度。 19.继续抽真空30 s~1 min(以收集所有的洗脱溶剂)。 20.取下收集装置。 21.根据需要挥干/复溶或稀释样品。 22.将样品转移到样品瓶或样品板中以待分析。 23.如果使用样品板，在分析之前须加盖。 24.注：建议上样和洗脱步骤的流速不要超过1.0 mL/min。所有其它步骤允许采用的最高流速为5 mL/min。 ( 注：您可能需要临时提高真空度以使水性溶液开始流动。 ) ⅥII.使用OASIS MAX提取酸性化合物以及使用OASIS WCX提取强碱性化合物的固相萃取方案 1. 将Oasis MAX或Oasis WCX小柱或提取板安装到真空萃取装置上并将真空度设置为5"汞柱。 2.使用甲醇进行活化。 3.用水平衡。 a.在上述两个步骤中(活化和平衡)，都要在抽真空之前加入溶剂。 注：由于Oasis HLB具有水浸润性，因此可省去活化和平衡步骤。如有需要可比较执行和不执行这些步骤的方案所得的结果，以评估它们对最终分析结果的影响。 4.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空(关闭真空泵之前，请将真空度降至最低)。 5.上样稀释后的样品。 6.在尽可能最低的真空度下启动或打开阀门，并根据需要逐渐提高真空度。 7.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空。 8. 加入5%氢氧化铵水溶液作为清洗溶剂。 9.开始抽真空，使真空度达到5"汞柱(根据需要进行调节/升高)。 10.继续抽真空30 s~1 min以去除残留的清洗溶剂。 11.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空(关闭真空泵之前，请将真空度降至最低)。 12.加入100%有机洗脱溶剂，并在启动真空泵之前等待溶剂在重力作用下通过小柱/提取板。 13.开始抽真空，使真空度达到5"汞柱(根据需要进行调节/升高)。 14.继续抽真空30 s~1 min以去除残留的清洗溶剂。 15.关闭真空泵或通过关闭阀门停止抽真空。(关闭真空泵之前，请将真空度降至最低)。 16.释放真空并弃去废液，插入收集装置并更换盖子。 17.加入2%甲酸的甲醇溶液作为洗脱溶剂，并在启动真空泵之前等待溶液在重力作用下通过小柱/提取板。 18.在尽可能最低的真空度下启动或打开阀门，并根据需要逐渐提高真空度。 19.继续抽真空30 s~1 min(以收集所有的洗脱溶剂)。 20.取下收集装置。 21.根据需要挥干/复溶或稀释样品。 22.样样品转移到样品瓶或样品板中以待分析。 23.如果使用样品板，在分析之前须加盖。 24.注：建议上样和洗脱步骤的流速不要超过1.0 mL/min。所有其它步骤允许采用的最高流速为5 mL/min. ( 注：您可能需要临时提高真空度以使水性溶液开始流动。 ) VIII.OASIS吸附剂选择和方案图 Oasis 2x4方法是一套简单而富有逻辑性的方案，用于SPE吸附剂和净化方案的选择。两套方案和四种吸附剂的组合为酸性、碱性和中性化合物的提取带来了极大的灵活性，能够在去除干扰分析的基质组分的同时实现高SPE回收率。 按照右侧流程图中的简单步骤操作，即可实现高回收率并获得最纯净的提取物： 酸性化合物 对分析物进行定性[中性化合物、酸性或碱性化合物， pK，] pK 2-8 OASIS MAX 从四种Oasis吸附剂中选择一种 应用指定的方案[1或2] 通过LC分析测定SPE回收率 *所有酸性、碱性和中性化合物的回收率都在85%以上且RSD小于5%。 中性化合物 酸性化合物 IX.针对uELUTION提取板的OASIS 2x4方法学 经验证的Oasis 2x4方法洗脱溶剂专门针对小洗脱体积的洗脱要求进行了优化。甲醇是一种良好的通用洗脱溶剂，但对于25uL的洗脱体本而言通常强度不够。推荐用于uElution提取板的洗脱溶剂必须具有足够高的洗脱强度，能够以小体积将分析物完全洗脱下来，还必须适用于各种分析物。 针对pElution提取板优化的Oasis 2x4方法的推荐洗脱溶剂为含改性剂的60% CH，CN：40% CH，OH。该洗脱齐剂能够满足上述所有标准，可作为起始选择。 注：为确保处理血浆样品时获得最佳性能，上样之前应在吸附床顶部保留少量平衡溶液。 X.针对治疗性肽生物分析优化的OASIS PSTuELUTION方法 目前在制药行业中，对5，000 Da以下的治疗性肽进行生物分析极具挑战性。通常，要求合规性生物分析方法能够在生物基质的常规分析中获得低至pg/mL水平的LLOQ，并且必须在几个数量级范围具有线性响应。沃特世的新型PST治疗性肽方法开发套件和方案可简化血浆中治疗性肽分析的样品制备方法和LC方法开发过程。该套件包含Oasis PST pElution方法开发板、PST反相色谱柱和详细的筛选方案。请参阅PST治疗性肽方法开发套件中的详细方案，获取必需的详细信息，以筛选出能够灵敏且准确地定量5，000 Da以下的治疗性肽的生物分析方法。 ( 如需更多信息，请从www .waters.c om网站下载《治疗性肽的生物分析方法开发策略》(文献编号7200 03055ZH ) 或下载《Oasis样品萃取产品手册》(文献编号72000 1692ZH)。 ) XI. OASIS 96孔板 所有Oasis 96孔板(包括uElution提取板)都经过专门设计，既可单独使用，也可与其它自动化系统配合使用。 具体尺寸为： Oasis 96孔板： 长=5.030英寸 宽=3.365英寸 高=2.015英寸 uElution提取板： 卡长=5.030英寸 宽=3.365英寸 高=1.501英寸 所有沃特世Oasis 96孔板和pElution提取板都满足ANSI(美国国家标准学会)微孔板指导原则的要求。 扫一扫，关注沃特世微信 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters、The Science of What's Possible、UPLC和Oasis是沃特世公司的注册商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 XII.注意事项 某些产品使用过程中或使用之后可能会被归类为危险品，应当由经过培训、有能力处理此类物质的专业实验室人员使用。产品的安全使用完全由采购方和用户负责。如需这些产品的安全数据表(SDS)，请访问www.waters.com。 ( 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 ) 成都：028-67653588 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)8202676www.waters.com Oasis小柱和板 Oasis系列固相萃取(SPE)产品将适用的吸附剂填料、产品规格和操作方法相结合，专为简化和改进您的样品制备方案而设计。我们提供六种Oasis吸附剂填料，可满足您的各种样品制备需求。这些填料都基于独特的水浸润性Oasis HLB(亲水亲脂平衡)共聚物，可获得优异的结果。