16种塑化剂的高效液相色谱分析方法

16种塑化剂的高效液相色谱分析方法 上海伍丰科学仪器有限公司 塑化剂是邻苯二甲酸酯类化合物，塑化剂超标会损害男性生殖能力、促使女性性早熟、伤害免疫和消化系统，对人体造成很大的危害。塑化剂进入人们的视野最初是2011年的台湾“昱伸香料有限公司”的“起云剂”事件，当时他们是在产品中恶意添加了邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯（DEHP）。自酒鬼酒中检测出塑化剂含量超标以来，陆续出现多个品牌白酒的塑化剂超标，其中包括茅台、五粮液等知名品牌，许多品牌塑化剂超标甚至高达200%以上，引起人们对食品安全的担忧和恐慌。对此次白酒中塑化剂超标事件上海伍丰科学仪器有限公司高度关注，开发出检测16种常见塑化剂的分析方法。 本方法分为两个部分：第一部分用于定性分析，可以检测在样品中是否含有16种塑化剂的某些成份，检出限为1ug/ml，并根据可能的存在成份选择第二部分中的定量分析方法；第二部分用于定量分析，定量分析方法具有分离度好、基线平稳、重现性好等特点，可满足定量分析的要求。 需要指出的是，此方法是兼顾16种塑化剂的条件下开发的，主要目的是要将所有的塑化剂完全分开，因此检出限在此次方法开发中并非主要的考虑因素，如果无需检测所有的塑化剂或只需检测几种塑化剂，则方法经过调整后检测灵敏度可大幅提升，本公司提供方法开发或调整的服务。此外，酒中塑化剂的检测方法通常会做前处理，用固相萃取小柱等对酒中的塑化剂进行浓缩，将几十～数百毫升的白酒浓缩至1ml，浓缩幅度往往高达数十、数百倍，因此，在做好前处理的条件下，根据浓缩的倍数不同本方法不经改动亦可达到极低的检测限，检测限为1 ug/ml /（浓缩倍数）。 一.定性分析方法 液相色谱仪：LC100 二元高压梯度系统（上海伍丰科学仪器有限公司） 色谱柱：BP-C18, 5um, 4.6×250mm 流动相：梯度 时间（min） A相：水/乙腈＝60/40 B相：甲醇/乙腈＝60/40 0 100 0 3 100 0 21 50 50 45 30 70 60 0 100 67 0 100 68 100 0 波 长：UV, 242 nm 温 度：柱温30℃ 进样量：20ul 标准溶液的配制： 准确称量16种邻苯二甲酸酯标准品，用乙腈配制成浓度为100ug/ml的标准溶液。 流动相A的配制：准确量取200ml乙腈和300ml水，混合均匀，超声脱气5min。 流动相B的配制：准确量取200ml乙腈和300ml甲醇，混合均匀，超声脱气5min。 按出峰顺序： 序号 出峰时间(min) 中文名 英文名 英文缩写 1 11.24 邻苯二甲酸二-(2-甲氧基)乙酯 Bis(2-methoxyethyl) phthalate DMEP 2 11.81 邻苯二甲酸二甲酯 Dimethyl phthalate DMP 3 18.60 邻苯二甲酸二-(2-乙氧基)乙酯 Bis(2-ethoxyethyl) phthalate DEEP 4 19.18 邻苯二甲酸二乙酯 Diethyl phthalate DEP 5 33.42 邻苯二甲酸二苯酯 Diphenyl phthalate － 6 37.59 邻苯二甲酸二异丁酯 Diisobutyl phthalate DIBP 7 38.13 邻苯二甲酸丁基苄基酯 Benzyl butyl phthalate BBP 8 39.08 邻苯二甲酸二丁酯 Dibutyl phthalate DBP 9 39.62 邻苯二甲酸二-(2-丁氧基)乙酯 Bis(2-n-butoxyethyl)phthalate DBEP 10 51.10 邻苯二甲酸二戊酯 Dipentyl phthalate DPP 11 52.02 邻苯二甲酸二环己酯 Dicyclohexyl phthalate DCHP 12 56.08 邻苯二甲酸二-(4-甲基-2-戊基)酯 Bis(4-methyl-2-pentyl)phthalate BMPP 13 58.34 邻苯二甲酸二己酯 Dihexyl phthalate DHXP 14 64.35 邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯 Bis(2-ethylhexyl) phthalate DEHP 15 65.64 邻苯二甲酸二正辛酯 Di-n-octyl phthalate DNOP 16 邻苯二甲酸二壬酯 Dinonyl phthalate DNP 注意事项： 1. 色谱柱的维护（本方案仅针对做该样品时的维护）：分析完成后用B相以1.0ml/min 冲洗45min。 二.定量分析方法 上述定性分析方法虽然可以同时分析16中塑化剂，但白酒中塑化剂的含量相对浓度并不是很高（国标规定可允许上限约为0.3mg/kg），据此特开发出基线更平稳、检出灵敏度更高、更适合定量的分析方法。 本方法开发之初是想要同时分析所列的16种塑化剂，开发过程中发现两个问题，一是有四个组分靠得太近，要同时确保它们基线分离甚至分离度大于1.0都非常困难，尝试过上百个方案也未能实现； 二是最后面出来的两个化合物DNOP和DNP在常规条件下难以分离，因此，不得已放弃同时分析16种的方案，开发出一个总的分析方法和两个补充方法。总方法可以对12种塑化剂同时进行定性和定量使用，具有流动相配制简单、基线平稳、方法稳定、重现性好等优点，两个补充方法是总方法的谱图中所指出的重叠峰位置有峰出现时才使用。  液相方法条件（主定量方法） 液相色谱仪：LC100 二元高压梯度系统（上海伍丰科学仪器有限公司） 色谱柱：BP-C18, 5um, 4.6×250mm 流动相：梯度 时间（min） A相：水 B相：100%乙腈 0 60 40 14 42 58 35 30 70 45 0 100 55 0 100 56 60 40 波 长：UV, 242 nm 温 度：柱温30℃ 进样量：10ul 标准溶液的配制： 准确称量16种邻苯二甲酸酯标准品，用乙腈配制成浓度为100ug/ml的标准溶液。 谱图和数据（主定量方法） 按出峰顺序： 序号 出峰时间(min) 中文名 英文名 英文缩写 1 9.97 邻苯二甲酸二-(2-甲氧基)乙酯 Bis(2-methoxyethyl) phthalate DMEP 2 10.52 邻苯二甲酸二甲酯 Dimethyl phthalate DMP 3 15.79 邻苯二甲酸二-(2-乙氧基)乙酯 Bis(2-ethoxyethyl) phthalate DEEP 4 16.59 邻苯二甲酸二乙酯 Diethyl phthalate DEP 5 31.62 邻苯二甲酸二苯酯 Diphenyl phthalate － 6 35.82 邻苯二甲酸二异丁酯 Diisobutyl phthalate DIBP 7 36.94 邻苯二甲酸丁基苄基酯 Benzyl butyl phthalate BBP 8 37.72 邻苯二甲酸二丁酯 Dibutyl phthalate DBP 9 邻苯二甲酸二-(2-丁氧基)乙酯 Bis(2-n-butoxyethyl)phthalate DBEP 10 45.62 邻苯二甲酸二戊酯 Dipentyl phthalate DPP 11 46.27 邻苯二甲酸二环己酯 Dicyclohexyl phthalate DCHP 12 48.26 邻苯二甲酸二-(4-甲基-2-戊基)酯 Bis(4-methyl-2-pentyl)phthalate BMPP 13 49.15 邻苯二甲酸二己酯 Dihexyl phthalate DHXP 14 54.69 邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯 Bis(2-ethylhexyl) phthalate DEHP 15 56.44 邻苯二甲酸二正辛酯 Di-n-octyl phthalate DNOP 16 邻苯二甲酸二壬酯 Dinonyl phthalate DNP 注意事项： 1. 色谱柱的维护（本方案仅针对做该样品时的维护）：分析完成后用B相以1.0ml/min 冲洗45min。  补充定量方法一（样品中含有DPP或DCHP时使用） 注：本补充方法与前面的定性方法所用流动相相同，梯度相近。 液相方法条件： 液相色谱仪：LC100 二元高压梯度系统（上海伍丰科学仪器有限公司） 色谱柱：BP-C18, 5um, 4.6×250mm 流动相：梯度 时间（min） A相：水/乙腈＝60/40 B相：甲醇/乙腈＝60/40 0 100 0 3 100 0 21 60 40 45 40 60 50 20 80 60 0 100 67 0 100 68 100 0 波 长：UV, 242 nm 温 度：柱温30℃ 进样量：20ul 标准溶液的配制： 准确称量16种邻苯二甲酸酯标准品，用乙腈配制成浓度为100ug/ml的标准溶液。 谱图和数据（补充定量方法一） 按出峰顺序： 序号 出峰时间(min) 中文名 英文名 英文缩写 1 11.24 邻苯二甲酸二-(2-甲氧基)乙酯 Bis(2-methoxyethyl) phthalate DMEP 2 11.96 邻苯二甲酸二甲酯 Dimethyl phthalate DMP 3 19.57 邻苯二甲酸二-(2-乙氧基)乙酯 Bis(2-ethoxyethyl) phthalate DEEP 4 20.26 邻苯二甲酸二乙酯 Diethyl phthalate DEP 5 39.97 邻苯二甲酸二苯酯 Diphenyl phthalate － 6 45.25 邻苯二甲酸二异丁酯 Diisobutyl phthalate DIBP 7 45.69 邻苯二甲酸丁基苄基酯 Benzyl butyl phthalate BBP 8 46.90 邻苯二甲酸二丁酯 Dibutyl phthalate DBP 9 47.78 邻苯二甲酸二-(2-丁氧基)乙酯 Bis(2-n-butoxyethyl)phthalate DBEP 10 55.76 邻苯二甲酸二戊酯 Dipentyl phthalate DPP 11 56.32 邻苯二甲酸二环己酯 Dicyclohexyl phthalate DCHP 12 58.54 邻苯二甲酸二-(4-甲基-2-戊基)酯 Bis(4-methyl-2-pentyl)phthalate BMPP 13 60.05 邻苯二甲酸二己酯 Dihexyl phthalate DHXP 14 64.79 邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯 Bis(2-ethylhexyl) phthalate DEHP 15 66.01 邻苯二甲酸二正辛酯 Di-n-octyl phthalate DNOP 16 邻苯二甲酸二壬酯 Dinonyl phthalate DNP 注意事项： 1. 色谱柱的维护（本方案仅针对做该样品时的维护）：分析完成后用B相以1.0ml/min 冲洗45min。  补充定量方法二（样品中含有DNOP或DNP时使用） 注：本补充方法与前面的主定量方法所用流动相相同，但所用色谱柱和梯度不同。 液相方法条件： 液相色谱仪：LC100 二元高压梯度系统（上海伍丰科学仪器有限公司） 色谱柱：PntulipsTM BP-C8, 5um, 4.6×250mm（上海谱宁分析技术有限公司） 流动相：梯度 时间（min） A相：水 B相：100%乙腈 0 60 40 5 60 40 10 20 80 30 0 100 35 0 100 36 60 40 波 长：UV, 242 nm 温 度：柱温30℃ 进样量：20ul 标准溶液的配制： 准确称量16种邻苯二甲酸酯标准品，用乙腈配制成浓度为100ug/ml的标准溶液。 谱图和数据（补充定量方法二） 按出峰顺序： 序号 出峰时间(min) 中文名 英文名 英文缩写 1 10.66 邻苯二甲酸二-(2-甲氧基)乙酯 Bis(2-methoxyethyl) phthalate DMEP 2 10.97 邻苯二甲酸二甲酯 Dimethyl phthalate DMP 3 12.76 邻苯二甲酸二-(2-乙氧基)乙酯 Bis(2-ethoxyethyl) phthalate DEEP 4 13.05 邻苯二甲酸二乙酯 Diethyl phthalate DEP 5 15.63 邻苯二甲酸二苯酯 Diphenyl phthalate － 6 16.62 邻苯二甲酸二异丁酯 Diisobutyl phthalate DIBP 7 17.17 邻苯二甲酸丁基苄基酯 Benzyl butyl phthalate BBP 8 邻苯二甲酸二丁酯 Dibutyl phthalate DBP 9 邻苯二甲酸二-(2-丁氧基)乙酯 Bis(2-n-butoxyethyl)phthalate DBEP 10 19.81 邻苯二甲酸二戊酯 Dipentyl phthalate DPP 11 20.30 邻苯二甲酸二环己酯 Dicyclohexyl phthalate DCHP 12 22.32 邻苯二甲酸二-(4-甲基-2-戊基)酯 Bis(4-methyl-2-pentyl)phthalate BMPP 13 22.87 邻苯二甲酸二己酯 Dihexyl phthalate DHXP 14 29.03 邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯 Bis(2-ethylhexyl) phthalate DEHP 15 29.55 邻苯二甲酸二正辛酯 Di-n-octyl phthalate DNOP 16 30.52 邻苯二甲酸二壬酯 Dinonyl phthalate DNP 注意事项： 1. 色谱柱的维护（本方案仅针对做该样品时的维护）：分析完成后用B相以1.0ml/min 冲洗45min。