快速分析猪尿液中的21种β-受体激动剂

「应用纪要1THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要] Waters ACQUITY UPLC/Xevo TQ-S快速分析猪尿液中的21种β-受体激动剂 耿霞 沃特世科技(上海)有限公司 应用优势 提供了一种猪尿液基质中21种β-受体激动剂的快速检测方法 ■高灵敏度定量的同时实现定性确认 沃特世解决方案 QUANPEDIAIMPICsTM ACQUITY UPLC/XevoTQ-S系统 关键词 21种β-受体激动剂 QUANPEDIA PICs Xevo TQ-S 前言 瘦肉精：一类动物用药的统称，任何能够促进瘦肉生长、抑制动物脂肪生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。目前，能够实现这种功能的物质是一类叫做β-受体激动剂的药物，将其混入猪饲料进行饲养，能促进猪的生长速度、提高瘦肉率，同时使肉色鲜红，卖相更好。与传统瘦肉精盐酸克伦特罗同属“肾上腺受体激动剂”的莱克多巴胺等同类药物同样也能提高猪的瘦肉率。 盐酸克伦特罗的检测方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体金免疫层析法、高效液相色谱法、气质联用法及液质联用法。国家标准GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定中规定方法为气相色谱-质谱法(GC-MS)、高效液相色谱法、酶联免疫法，其方法检出限均为0.5 ug/kg。 SN/T 1924—2007进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法采用LC-MS-MS法，该方法因具有高灵敏度等优点被普遍使用。本文使用UPLC@/Xevo TQ-S对猪尿液中的21种β-受体激动剂进行了分析。 超高效液相色谱分离条件 色谱系统： ACQUITY UPLC 运行时间： 10 min 色谱柱： ACQUITYBEHC。 1.7 um， 2.1mmx100mm 流动相： A： 0.1%甲酸水 B：乙腈 流速： 0.40 mL/min 进样体积： 10pL 流动相梯度表： Time Flow %A %B Curve 0 0.400 99.0 1.0 Initial 0.50 0.400 99.0 1.0 6 2.00 0.400 90.0 10.0 6 4.50 0.400 80.0 20.0 6 6.50 0.400 70.0 30.0 6 7.00 0.400 50.0 50.0 6 8.00 0.400 30.0 70.0 6 8.50 0.400 1.0 99.0 6 9.00 0.400 1.0 99.0 6 10.00 0.400 99.0 1.0 1 质谱条件 质谱系统： Xevo TQ-S 离子模式： ESI+ 毛细管电压： 3.5 kv 源温度： 150℃ 雾化气温度： 500℃ 雾化气流速： 900L/hr MRM条件： QUANPEDIA数据库 QUANPEDIA是沃特世特有的一种可扩展和可搜索的数据库，提供LC-MS-MS定量方法信息，目前数据库已有超过1200种化合物，包括色谱方法、质谱方法、定量方法等，可以自由选择其中的任意化合物或化合物种类自动形成所需的方法，不需要再进行手动方法开发过程。 下图为数据库得到的方法信息： 自动生成MRM方法： 样品制备 样品制备备照GB/T22286-2008《动源性食品中多种β-受体激动剂留留量的测定》进行。 1.量取2.0mL猪尿液样品，加入8 mL 0.2M的pH5.2的乙酸钠缓冲液，充分混匀。 2.加入50LB-Glucuronidase/aryl sulfatase混匀，于37℃水浴水解过夜。 3.水解液振荡15min， 在5000r/min条件下离心分离10min后，取4mL上清液中添加100 uL 10 ng/mL的内标溶液混匀，加入5 mL0.1M高氯酸混合均匀，并调节溶液pH值到1±0.3。以5000 r/mim条件下离心分离10 min后，移取上清液并用10M的氢氧化钠溶液调节pH值到11。 4.加入10mL饱和氯化钠溶液和10mL异丙醇-乙酸乙酯(6：4)混合溶液，离心分离后取有机相，在40℃水浴下用氮气将其吹干。 5.提取残渣中加入5 mL 0.2M乙酸钠缓冲液(pH5.2)，超声混匀溶解残渣。 6.样品净化(如下图所示)，使用Oasis@MCX(3 cc/60mg)小柱。 7.净化后的洗脱液用氮气吹干，用流动相溶解定容至1.0mL，过0.22um滤膜，待进样分析。 固相提取净化过程Oasis MCX(3 cc/60mg)： 活化/平衡： 结果与讨论 本方法采用一次进样同时监测猪尿液样品中的21种β-受体激动剂进行检测，在灵敏度、分离度等方面均获得满意的结果。 图1.21种β-受体激动剂总离子流图。 图2.猪尿液基质中0.01 ng/mL克伦特罗连续7针进样重复性(峰面积RSD=0.42%)。 与常规串联四匹杆质谱仪不同的是， Xevo TQ-S在提供最好的定量数据的同时，还可以提供高质量的光谱MS/MS信息。对猪尿液中含0.5 ng/mL的受体激动剂样品，启用PICs(子离子确认扫描)功能，可在不影响MRM定量的同时得到各化合物子离子扫描图，与标样子离子图进行匹配，对样品中阳性结果定性起到帮助判断的作用。 图3.猪尿液基质中0.5 ng/mL沙丁胺醇子离子扫描图。 图4.猪尿液基质中0.5 ng/mL克伦特罗子离子扫描图。 图5.猪尿液基质中0.5 ng/mL莱克多巴胺子离子扫描图。 结论 ( 本方法采用多离子反应监测(MRM)方式对21种β-受体激动剂进 行检测，具有快速、准确、灵敏度高、分析周期短、适用范围广等优点，适用于各类动物组织或动物源性食品等的测定。 ) IntelliStartTM技术可以使得开发分析方法过程变成流线型工作流程。这意味着需要更少的时间来开发方法，大大提高工作效率。强大的QUANPEDIA数据库包含上千种化合物的方法，自动生成方法文件让您轻松简单快速应对各种突发事件。PICs(子离子确认扫描)功能提供最好的定量数据的同时，还可以提供高质量的光谱MS/MS信息，对样品中阳性结果定性起到帮助判断的作用。 Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. ACQUITY UPLC， ACQUITY， UPLC， Xevo， Oasis， Waters和The Science of What’s Possible是沃特世公司的注册商标。QUANPEDIA，PICs和IntelliStart沃特世公司的商标。其标所有商标均归各自的拥有者所有。 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)8202676www.waters.com CQUITY UPLC/Xevo TQ-S快速分析猪尿液中的β-受体激动剂