婴幼儿配方乳粉中营养成分检测

本文采用在线二维色谱分离法，一维和二维分离均基于反相色谱，样品经过皂化、萃取后，直接进样分析，样品净化在线完成，一次进样完成all-trans 和13-cis 维生素A 和α- 维生素E 的测定，提高了方法的准确性和样品分析效率。

本实验采用中心切割方法，利用第一维色谱柱在分析 VA 和VE 的同时对 VD 进行净化，再将初步进化后的 VD 在线引入第二维色谱柱进行分离、测定，整个分析过程只需一次进样即可完成样品中 VA、VE 及微量 VD 的测定。该方法不仅可以节省大量的制备工作，而且稳定性良好. 整个 HPLC 方法为中心切割的二维液相方法 (heart-cutting 2DLC)，包含三个阶段：第一阶段为进样/分析维生素 A，此时阀的位置为 1-2；第二阶段为净化/捕获维生素 D，阀在维生素 D 出峰前切换到位置 1-6；第三阶段第一维继续分析维生素 E，第二维则分离检测维生素 D，阀在第一维维生素 D出峰结束后切回位置 1-2，具体见下图 1。本方法第一维采用高效短柱（Zorbax RRHT Extend-C18，4.6 × 50 mm ×1.8 μm）进行快速分析，第二维采用 PAH 专用柱（Zorbax Eclipse PAH，2.1 × 100 mm × 3.5 μm）以提高 VD2 和 VD3的分离.

本文首次采用在线二维柱切换-高效液相色谱紫外检测法，样品经过皂 化、萃取后，直接进样，同时完成维生素A、D和E的分析测定，提高了方法的准确性和样品分析效率。

有关食品中维生素 A、D、E 分析的新国家标准方法[1] 从 2017 年 6 月 23 日起实施，覆盖 了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质。 但是该标准方法中规定的样品前处理过程极其复杂、测定方法多样（同一成分有不同的检 测方法）、检测周期长、目标化合物回收率低且重复性差，极大降低了分析效率。为解决 该国标方法所存在的难点和不足，需要开发一种同时测定维生素 A、D、E 的稳定高效的 二维液相色谱方法。 本方法参照现有的文献方法[2-4]，基于二维液相色谱并串联在线固相萃取 (online SPE) 技 术，成功建立了食品中维生素 A (VA)、维生素 D (VD) 及三种维生素 E (VE) 异构体的中心切 割快速分析方法。此方法将前处理皂化液直接进样，省去了液液萃取等复杂的前处理过 程。第一维液相色谱对 VA 和 VE 进行分析，同时对 VD 进行初步净化；第二维液相色谱对 VD 进一步分离，整个分析过程只需一次进样，即可完成样品中 VA、VD 和 VE 的测定。该 方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可以避免复杂的样品前处理过程导致的回 收率不稳定现象。实验结果准确、重现性好，表明该方法可以用于多种食品基质中脂溶性 维生素的常规快速检测。 实验结果表明，新的维生素检测方法具有以下优势： – 样品分析通量大幅提高。皂化液直接进样方法与国标方法相比，样品前处理时间由原来的 2–3 小时缩短为 30 分钟左右，分析通量 提高 5 倍以上 – 省去了前处理提取步骤，溶剂使用量大大减少，降低了实验成本，也避免有机试剂对实验人员造成危害。阀切换方法代替繁琐 的净化、浓缩等过程，自动化程度大幅提高 – 按照国标方法的检测低限浓度，考察方法的灵敏度，分析图谱表 明所有物质在最低限均有良好响应

用UtraPerformance Convergence Chromatography™（UPC2™）同时测定婴儿配方奶粉中维生素A和E的可行性确定。

本文基于二维色谱原理，利用双梯度泵系统，结合两个切换阀，构建了全自动在线二维液相色谱分析方法，通过紫外检测器和荧光检测器的串联，一次进样同时完成脂溶性维生素 A，D2，D3 及其 α，β，γ 和 δ-VE 的定量分析，方法验证结果表明，本法能够准确测定婴幼儿配方奶粉中各待测营养素的含量。且 4 种 VE 异构体的拆分和定量，对于产品的质量控制具有重要意义。另外本法自动化程度高，操作简便快速，可用于日常奶粉样品的检测工作中。

相比于现有方法关于婴幼儿配方奶粉中脂溶性 VA、VE 和 VD 的测定，本文中心切割法具有自动化程度高、操作简单、成本低等特点。对于样品中微量 VD 的检测，该方法灵敏度高、专属性强，样品中杂质不会干扰 VD 的测定。实验数据表明，本文方法可用于乳品企业 QC 部门关于奶粉中 VA、VE和微量 VD 的同时测定。

本文基于赛默飞Vanquish Core全新液相色谱系统，针对婴幼儿配方奶粉中维生素A、D和E检测，建立了离线固相萃取和在线二维液相色谱结合的快速分析定量方法。

高效准确的自动萃取婴幼儿配方奶粉中的维生素结合LC-MS/MS分析. 可重复性高，奶粉样品和重构的配方奶平均RSD为1.24% 和 1.14 % ；奶粉样品和重构的配方奶中维生素的平均回收率为99.3%和99.2%； 线性高，所有目标维生素的线性回归分析R2 大于 0.999。

本文建立了一种采用在线固相萃取-二维液相色谱法同时测定配方奶粉中维生素A、D2、D3和维生素E的5种异构体（α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚）含量的方法。样品经皂化后直接上机进样，仪器自动完成样品的富集、SPE净化、目标组分的分离及测定过程，并通过对该方法的线性、重现性和加标回收率等性能指标进行了测试。结果表明：各组分线性关系良好，重现性好，回收率高，满足测定要求，适用于奶粉中维生素A、D和E的含量测定。

纳谱分析推出的SelectCore vADE维生素专用柱是一种新型的单分散聚合物填料的固相萃取柱，相比市场上常见的聚合物产品，滴速更快，回收率更稳定。另本法允许大体积进样，以满足VD含量较低的样品基质的分析要求。

在本应用报告中，采用固相支撑液液萃取（SLE）技术，结合MRM定量的方法，采用LCMS-8045（配置APCI离子源）定量测定婴儿配方奶粉中的脂溶性维生素。