保健食品中免疫球蛋白IgG的提取与检测

实验结果及讨论由图1、2、3可知，SelectCore Protein G亲和柱可以特异性的结合免疫球蛋白IgG，并且BioCore SEC-300色谱柱可以有效分离杂蛋白与IgG；由表格可以看出，三种保健食品的加标回收率均在90%以上。经过测试，SelectCore Protein G 1mL亲和柱的柱容量为5mg/支，对于IgG含量较高的样品，推荐IgG最佳上样的物质的量为1 mg，为了避免亲和柱过载，可以通过减少样品称样量和上样体积来进行适当调整。保健食品中免疫球蛋白 IgG的提取与检测 背景 免疫球蛋白是指具有抗体活性或化学结构，与抗体分子相似的球蛋白，其中，免疫球蛋白 IgG 是初级 免疫应答中最持久、最重要的抗体，它在抗感染过程中起到主力军的作用，它能够促进单核巨噬细胞的吞 噬作用、中和细菌毒素的毒性、与病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力。 因免疫球蛋白 IgG 特定的功能活性，将免疫球蛋白 IgG 添加到食品中以期获得提高人体免疫力的方式 成为保健食品发展的新趋势，一般情况下保健食品中免疫球蛋白 IgG添加量较大，参照团体标准 T /SSFS0002-2021乳及乳制品中免疫球蛋白 IgG的测定(高效液相色谱法)可以完成对保健食品中免疫球蛋白 I gG 的 定性与定量，但需要对提取方法进行适当调整，本文选择了3种免疫球蛋白 IgG 含 量 较高的样品，使用 Sel ectCore Protein G亲和柱对样品进行亲和固相萃取，再使用 BioCore SEC-300 色谱柱对样品进行含量与加 标回收率的测定，为保健食品中免疫球蛋白 IgG 含 量 测定的方法提供参考。 适用范围 本方法参照 T/SSFS0002-2021 团体标准乳及乳制品中免疫球蛋白 I gG的测定(高效液相色谱法)，适用于 保健食品中免疫球蛋白 IgG 的提取与检测。 实验步骤 1、试剂配制 0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶液(pH6.5)：称取 4.11g无水磷酸二氢钠， 2.23g无水磷酸氢 二 钠，加水溶解并定 容至1L，摇匀备用。 乙酸溶液(pH3.0)：准确吸取3mL冰乙酸，加水定容至1L，摇匀备用。 150 mmol/L 氯化钠溶于 20 mmol/L PBS 缓冲溶液中 (pH7.0)：称取0.91 g 无水磷酸二氢钠，，11.76 g 无水磷 酸氢二钠， 8.77g氯化钠，加水1000 mL溶解，摇匀过膜备用。 2、样品制备 称取样品0.5 g(精确到0.001g)置于50mL离心管中，用 0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶液适量溶解，常温充分 震荡提取5分钟，将溶液转移到50mL容量瓶中，用少量0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶洗涤离心管至少2次，定容至刻度，摇匀，将溶液转入离心管中，于4℃ 1000 r/min 离心 10 min， 去除脂肪，重复操作1次，取 下层澄清液备用。 3、样品前处理 SelectCore Protein G 亲和柱： (1)活化：依次使用 5 mL 水、10 mL 0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶液活化； (2)上样：取2中制备好的下层澄清液 5 mL 上样至亲和柱上，弃去流出液； (3)淋洗：使用5 mL 0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶液淋洗，弃去流出液； (4)洗脱：用4mL乙酸溶液洗脱，收集全部流出液，用乙酸溶液定容至 5.0mL， 过 0.22 um滤膜，供高 效液相色谱检测分析用。 4、高效液相色谱法测定 Column： BioCore SEC-300， 5um Dimension： 4.6×250mm Mobile Phase： 150 mmol/L 氯化钠溶于 20 mmol/L PBS 缓冲溶液中(pH7.0) Flow rate： 0.35 mL/min Temperature： 30°℃ Injection： 10 uL Detection： UV 214 nm 实验谱图 Time [min] 图1免疫球蛋白 IgG标准品、样品1、样品1加标对比图 图2免疫球蛋白IgG 标准品、样品2、样品2加标对比图 图3免疫球蛋白IgG 标准品、样品3、样品3加标对比图 加标回收率数据 样品名称 免疫球蛋白 IgG 含量 mg/100g 加标量 mg/100g 加标回收率 样品1 1873.117 1000 98.31% 样品2 1850.832 1000 97.28% 样品3 2096.325 1000 91.49% 实验结果及讨论 由图1、2、3可知， SelectCore Protein G 亲和柱可以特异性的结合免疫球蛋白 IgG， 并且 BioCore SEC-300色谱柱可以有效分离杂蛋白与 IgG； 由表格可以看出，三 种保健食品的加标回收率均在90%以上。 经过测试， SelectCore Protein G 1mL 亲和柱的柱容量为 5mg/支，对 于 IgG 含量较高的样品，推荐 IgG 最佳 上样的物质的量为1mg，为了避免亲和柱过载，可以通过减少样品称样量和上样体积来进行适当调整。 样品前处理/SPE柱 PTG065-030001-1M SelectCore Protein G 亲和柱 1mL；20/pkg 盒 分析柱/生物柱 B213-050030-04625S BioCore SEC-300色谱柱 5 u m， 4.6×250mm 支