离心机在多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法中的应用

WIGGENS BIOCEN 22R低温微量台式离心机-多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法中的应用（根据中华人民共和国国家标准GB/T30988-2014）一、原理在液氮条件下，通过物理研磨方法破碎多酚类植物叶片的细胞，利用抗氧化剂防止多酚类化合物氧气褐变。适用于茶树、马铃薯、樱桃、葡萄以及其他富含多酚类的植物的植物基因组DNA提取及纯化。二、 使用仪器1. 冷冻研磨机（样品冷冻，研磨都处于液氮条件下）2. 离心机（可以在4℃下进行离心，离心转速10000r/min以上）3. 水浴锅（工作范围60℃～70℃）4. 涡旋器5. 平板电泳仪6. 凝胶成像系统7. 可调移液器8. 紫外分光光度计9.天平（精度为0.1mg）                                   WIGGENS BIOCEN 22R 低温微量台式离心机                       WIGGENS WA8 通用水浴槽                     SOCOREX Stepper 416连续注射移液器                          WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪 三、 分析步骤1. 取植物新鲜嫩叶，用无菌超纯水冲洗1皿，70%乙醇消毒2min，最后用无菌超纯水冲  洗2min，无菌吸水纸吸干水分，称取约0.5g（精确至0.1mg）。2. 将干净的样本放于灭菌的样品研磨瓶中，使‍用WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪 将样品研磨成粉状，迅速用无菌玻璃棒将磨碎的样品用SOCOREX Stepper 416连续注射移液器转移至预冷的含有5mlDNA提取液的15ml离心管中，加入0.09gNa2S2O5,02gPVP,500ul巯基乙醇，颠倒混匀，放入WIGGENS BIOCEN 22R 低温微量台式离心机于4℃下5000r/min离心5min。3. 去上清液，加入5ml预热65℃的DNA提取液，温和颠倒混匀，使‍用WIGGENS WA8 通用水浴槽于65℃温浴1h，期间每10min摇动一次。4. 离心管放在冰上冷却，加入1ml预冷的NaAc溶液。5. 混匀后加入5mL氯仿：异戊醇:乙醇溶液,温和颠倒混勾(需带手套,防止损伤皮肤),冰上静置5~10 min,使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。在4℃10000r/min离心10min，移取上清液至-无菌15mL离心管中,重复该步骤。6. 将絮状DNA沉淀转入含有600ulTE的无菌离心管中。7. 加入RNaseA溶液至浓度为10ug/ml，37℃温浴30min，加入0.1gPVP,加入等体积的氯仿：异戊醇:乙醇溶液，温和颠倒混匀，10000r/min离心10mi。8. 取上清液于1.5ml的灭菌离心管内，充抽提一次，加入1/10体积的NaAc溶液，加入2倍体积预冷的无水乙醇，混匀，-20℃放置20min左右。9. 在4℃10000r/min离心10min，弃上清液，加1ml70%乙醇，温和颠倒离心管数次，洗涤沉沦，重复2次。10.向沉淀中加入500ul预冷的无水乙醇，在4℃10000r/min离心5～8s。11.弃去乙醇溶液，将离心管开盖放置于室温下，待乙醇挥发干后将DNA重溶解于200ulTE缓解液。四、注意事项1.使用离心机时，注意规定的温度和转速。2.制作试样时，要将水分完全吸干，重量精准到0.1mg。3.使用仪器时注意规范使用WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪SOCOREX Stepper 416 连续注射移液器 离心机在多酚类植物基因组 DNA提取纯化及测试方法中的应用 (根据中华人民共和国国家标准 GB/T30988-2014) 一、原理 在液氮条件下，通过物理研磨方法破碎多酚类植物叶片的细胞，利用抗氧化剂防止多酚类化合物氧气褐变。适用于茶树、马铃薯、樱桃、葡萄以及其他富含多酚类的植物的植物基因组DNA 提取及纯化。 二、使用仪器 1.冷冻研磨机(样品冷冻，研磨都处于液氮条件下) 2.离心机(可以在4℃下进行离心，离心转速10000r/min以上) 3.水浴锅(工作范围60℃~70℃) 4.涡旋器 5.平板电泳仪 6.凝胶成像系统 7.可调移液器 8.紫外分光光度计 9.天平(精度为0.1mg) WIGGENS BIOCEN 22R 低温微量台式离心机 WIGGENS WA8 通用水浴槽 三、分析步骤 1.取植物新鲜嫩叶，用无菌超纯水冲洗1皿，70%乙醇消毒 2min， 最后用无菌超纯水冲洗 2min， 无菌吸水纸吸干水分，称取约0.5g(精确至0.1mg)。 2.将干净的样本放于灭菌的样品研磨瓶中，使用 WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪将样品研磨成粉状，迅速用无菌玻璃棒将磨碎的样品用 SOCOREX Stepper 416连续注射移液器转移至预冷的含有5mlDNA提取液的15ml离心管中，加入0.09gNa2S2O5，02gPVP，500ul 巯基乙醇，颠倒混匀，放入 WIGGENS BIOCEN 22R 低 温微量台式离心机于4℃下 5000r/min 离心 5min。 3.去上清液，加入5ml预热65℃的 DNA 提取液，温和颠倒混匀， 使用 WIGGENS WA8通用水浴槽于65℃温浴 1h， 期间每 10min 摇动一次。 4.离心管放在冰上冷却，加入1ml预冷的 NaAc 溶液。 5.混匀后加入5mL 氯仿：异戊醇：乙醇溶液，温和颠倒混勾(需带手套，防止损伤皮肤)，冰上静置5~10 min，使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。在4C10000r/min离心10min， 移取上清液至-无菌15mL 离心管中，重复该步骤。 6.将絮状 DNA 沉淀转入含有 600ulTE 的无菌离心管中。 7.加入 RNaseA 溶液至浓度为 10ug/ml， 37℃温浴30min， 加入0.1gPVP，加入等体积的氯仿：异戊醇：乙醇溶液，温和颠倒混匀， 10000r/min 离心 10mi。 8.取上清液于1.5ml的灭菌离心管内，充抽提一次，加入1/10 体积的 NaAc 溶液，加入2倍体积预冷的无水乙醇，混匀，-20℃放置 20min 左右。 9.在4℃10000r/min 离心 10min， 弃上清液，加1ml70%乙醇，温和颠倒离心管数次，洗涤沉沦，重复2次。 10.向沉淀中加入500ul 预冷的无水乙醇，在4℃10000r/min 离心5~8s。 11.弃去乙醇溶液，将离心管开盖放置于室温下，待乙醇挥发干后将 DNA 重溶解于200ulTE 缓解液。 四、注意事项 1.使用离心机时，注意规定的温度和转速。 2.制作试样时，要将水分完全吸干，重量精准到0.1mg。 3.使用仪器时注意规范使用