尿液中四氢大麻酚代谢物检测方案(固相萃取仪)

//莱伯帕兹#EM0004 撰稿人：张海生审 核：马忠强 EmporeTM 膜式固相萃取柱通过密封压环将固相萃取膜料固定在医用聚丙烯柱管的底部。同时，在固相萃取膜之上集成了8层过滤网，此过滤网由不同孔径的聚丙烯微纤维层组成。EmporeTM 盘式固相萃取柱的设计完全消除了沟流和孔洞现象的产生，也没有吸附剂粉末脱落现象。本实验使用美国CDS公司膜式固相萃取柱 (EmporeM， 4215SD-C18)提取尿液中△-四氢大麻酚(THC，大麻)代谢物(-)11-nor-9-羧基-△-四氢大麻酚 (THCCOOH)，并以GC-MS分析定量[1，2]。 1，9实验过程 1.1仪器与试剂 所有试剂均为分析纯或更高。 THCCOOH (100.0±0.6 ug/mL) 和 MSTFA+1% TMCS 硅烷化试剂，均购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司； 人工尿液(PH： 5.7-500mL)，购自福州飞净生物科技有限公司； EmporeTM膜式固相萃取柱用于尿液中四氢大麻酚代谢物的提取 乙酸乙酯(色谱纯)，购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司； 甲醇(色谱纯)，购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司； 关键词： 正己烷(色谱纯)，购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司； 四氢大麻酚， THCCOOH， 外标法， GC-MS EmporeM 膜式固相萃取柱： 7mm/3mL.4215SD-C18，购自美国 CDS公司； 前言： EmporeTM 固相萃取膜料是通过将吸附剂颗粒捕获在聚四氟乙烯(PTFE)纤维上而制成的基于色谱原理的薄膜，其外观看起来与过滤膜非常相似， EmporeTM 固相萃取膜集提取、分离、净化、富集功能于一体。 气质联用仪：7890B-5977B安捷伦气质联用仪， Agilent 公司。 1.22工作液配制 THCCOOH标准使用溶液：0.1ug/mL， 溶剂体系为甲醇； 1.3实验部分 1.3.1样品制备 量取3mL尿液样品置于20mL样品管中，加入200uL四氢大麻酚标准使用液(加标量为20ng)， 然后加入300uL氢氧化钾溶液(10mol/L)，在60℃水浴环境下水解15min取出冷却至室温，接着以冰醋酸酸节 pH到4.0-4.5。 EmporeM膜式固相萃取柱(C18，7mm/3mL， 4215SD-C18)预先用150uL甲醇进行活化，然后进行上样(在重力作用下使样品自然流下)，上样结束后用 750uL 甲醇-水溶液(50：50)淋洗萃取柱，在抽真空状态下干燥 5min， 最后用 800uL正己烷-乙酸乙酯溶液((75：25)进行洗脱。 洗脱液加入50pL内标溶液1(1ug/mL)后经40℃氮吹近干，然后加入100uL衍生试剂 (MSTFA+1%TMCS)， 在60℃条件下衍生 20min， 转移至样品瓶待 GC-MS 分析。 1.3.2净化与浓缩 1.3.3 GC 方法： 进样口温度：290℃；进样模式：不分流进样；流速：1.0mL/min； 柱温：100℃保持1min，然后以30℃的速度升至300℃，保持 5min。 表1四氢大麻酚和四氢大麻酚-d3定性、定量离子 序 化合物 定量、定性 保留时间 号 离子 (min) 四氢大麻 374/476/49 12.218 酚-d3 2 四氢大麻 371/473/488 12.233 酚 2，实验结果(内标法) 图1四氢大麻酚总离子流图(含含标) 3， 结果与讨论 实验展示了一种使用 CDS公司EmporeM 固相萃取柱 (4215SD-C18)，对尿液中四氢大麻酚代谢物 (THCCOOH)进行富集提取的简单有效方法。实验中，尿液加标样品经水解、固相萃取净化、浓缩以及衍生等前处理步骤后，经GC-MS分析得到 四氢大麻酚代谢物 (THCCOOH)的加标回收率，回收率>75.0，结果较好。实验表明，CDS-EmporeM 固相萃取柱(4215SD-C18)适用于尿液中四氢大麻酚代谢物(THCCOOH)的萃取净化。 Delta(9)-THCCOOH plasma or sserumntowholeblood concentrations distributionratios in blood samples taken from livingand dead people."" ftorensic scienceinternational 123.2-3(2001)：159. 4， 参考文献 [1] Marilyn， et al. "Blood Cannabinoids. I.Absorptionn ooffTHC and Formation of11-OH-THC and THCCOOH During andAfterrSmoking Marijuana*. JJournalofAnalytical Toxicology (1992). 2?]Giroud， C. ， et al. "Delta(9)-THC， 11-OH-Delta(9)-THC and 表2加标回收率结果 序号 化合物名称 加标量 回收率 均值 ng % % 1 2 1 四氢大麻酚 20 81.5 78.0 79.8 北京莱伯帕兹检测科技有限公司网址： www.labparts. cn电话： Empore™ 固相萃取膜料是通过将吸附剂颗粒捕获在聚四氟乙烯（PTFE）纤维上而制成的基于色谱原理的薄膜，其外观看起来与过滤膜非常相似，Empore™ 固相萃取膜集提取、分离、净化、富集功能于一体。Empore™ 膜式固相萃取柱通过密封压环将固相萃取膜料固定在医用聚丙烯柱管的底部。同时，在固相萃取膜之上集成了8层过滤网，此过滤网由不同孔径的聚丙烯微纤维层组成。Empore™ 盘式固相萃取柱的设计完全消除了沟流和孔洞现象的产生，也没有吸附剂粉末脱落现象。本实验使用美国CDS公司膜式固相萃取柱（Empore™，4215SD-C18）提取尿液中△9-四氢大麻酚（THC，大麻）代谢物（-）11-nor-9-羧基-△9-四氢大麻酚 (THCCOOH)，并以GC-MS分析定量[1,2]。