植物叶片中叶绿体色素检测方案(紫外分光光度计)

美析仪器MACYLAB INSTRUMENT 叶绿体色素含量的测定―一分光光度法 关键词：叶绿体色素分光光度法 引言叶绿体色素溶液夜组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。因此，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度，；根据经验公式即可计算出色素溶液中各色素浓度，不同溶剂所提取的色素吸收光谱有差异，因此，应使用不同的计算公式。 叶绿体色素的提取常用丙酮和乙醇有机溶剂。叶绿体色素80%丙酮提取液中叶绿素a和b及类胡萝卜素分别在 663nm、646nm 和470nm 波长下有最大吸收峰，据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式(见结果计算)，计算出叶绿体色素丙酮提取液中叶绿素a和b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织(鲜重、干重或面积)，求算出色素的含量。 实验目的 掌握分光光度法对植物叶绿体色素提取液中叶绿素a和b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝I素的总浓度测定与计算方法，，以及植物材料中各种色素含量的求算方法。 器材和试剂 v1300pc 可见分光光度计、天平、研钵、剪刀、漏斗、滤纸、棕色容量瓶、吸水纸、擦察纸和滴管。 植物材料新鲜(或烘干)植物叶片，如菠菜叶片等。 实验试剂80%丙酮、石英砂和碳酸钙粉。 操作步骤 1色素的提取 ①称取新鲜(或干材料)的洗净擦于的植物叶片0.5g(或一定面积)，去中脉、剪碎后放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及 2~3ml80%丙酮(或95%乙醇!))，冰浴中研磨至组织变白，再加丙酮10ml，研成匀浆，暗处静置约 10min 。 ②将提取液过滤到 50ml 棕色容量瓶中，用丙酮反复冲洗研体与研棒数次并用少量丙酮反复冲洗滤纸和残渣，直至无绿色为止，以使色素全部转移入容量瓶。最后用丙酮定容至50ml，摇匀，并保存于暗处备用待测。每一材料要做35份，重复提取测定，以期获得准确的色素含量值。 2.吸光度的测定 ①将色素提取液重新混匀。 ②取光径 1cm 的比色杯，注入上述色素丙酮提取液，以80%丙酮注入另一同样的比色杯内作为空白对照，在波长 663、646和 470nm下测定吸光度。 结果计算公式 80%丙酮提取液中色素浓度的计算 Ca(叶绿素 a)=12.2A663-2.81A646Cb(叶绿素b)=20.13A646-5.03A663C(叶绿素)=Ca+Cb=17.32A646+7.18A663Cxc(类胡萝卜素)=(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229 色素浓度(mg.L1)x提取液体积(L)x稀释倍数叶绿体色素含量=样品鲜重(或干重、面积， g或m²) 分别计算出叶绿素 a上的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。 注意事项 1光对叶绿素有破坏作用，实验操作应在弱光下进行，且应尽量在短时间内研磨。 2色素提取液若混有其他物质而造成浑浊，将影响吸光度的测定，应重新过滤或离心。 3色素吸光度测定前，应按仪器说明及标准叶绿素a、b对分光光度计的波长进行校正，否则影印叶绿素含量的测定精度。 仪器参数 PROFESSIONAL SPECTRUM INSTRUMENT MANUFACTURER V-1300 V-1300PC 可见分光光度计 上海美仪器有限公司 03 TEL：400-616-4686|http：//www.macylab.com 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的仓业理念"科技-：——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，L，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 掌握分光光度法对植物叶绿体色素提取液中叶绿素a和b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度测定与计算方法，以及植物材料中各种色素含量的求算方法。