食用油中脂肪酸甲酯检测方案(气相色谱仪)

thermoscientific 快速分析脂肪酸甲酯的应用 孙薇，金琦芸，赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 脂肪酸甲酯，快速，分离度 摘要 2.实验部分 本文通过赛默飞Trace 1300系列气相色谱仪器，在国标GB/T5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》的基础上建立了快速检测方法。使37种脂肪酸甲酯的分离在40min内完成，且保证37种化合物的分离度均大于1.25，满足国标需求。运用本方法对食品中脂肪酸甲酯的分析，有效提高了分析速度。最终确认了50M的TG-FAME色谱柱满足实验需求。并在MS上对各组分进行了初步定性。 2.1仪器与试剂 2.1.1 Thermo Fisher Trace1300气相色谱仪 2.1.2 Thermo Fisher ISQ质谱仪 2.1.3二氯甲烷(色谱纯，美国Thermo Fisher公司)； 2.1.437种脂肪酸甲酯混合标准品购自SIGM-ALDRICH公司 2.2化合物信息及溶液配制 1.引言 脂肪作为人体的三大供能营养素之一，对人体有许多重要的生理作用。油脂中90%以上是脂肪酸，而脂肪酸又分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。多不饱和脂肪酸中含有的n-6和n-3脂肪酸属必需脂肪酸，是人体无法合成而必须从食物中获取的。2016年发布国标GB/T 5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》，规定了脂肪酸的检测方法，本方法依据并改进了该标准方法对食品中的脂肪酸进行了测定。 表一37种脂肪酸甲酯信息： ( 注： 上 表来源于Sigma-Aldrich公司标准品附带的COA报告。 ) 2.2.2储备液：精确称取37种脂肪酸甲酯混合标准品适量(总浓度10000ppm)，，二氯甲烷溶解，配制储备液总浓度为 1000pg/mL，具体单个组分浓度详见上表。 2.2.3样品溶液：取食用由样品适量，移入到250mL平底烧瓶中，加入约100 mg 焦性没食子酸，加入几粒沸石，再加入2mL95%乙醇和4mL水，混匀。加入2%氢氧化钠甲醇溶液8mL，连接回流冷凝器，80℃水浴上回流，直至油滴消失。从回流冷凝器上端加入7mL15%三氟化硼甲醇溶液，在80℃水浴中继续回流2min。用少量水冲洗回流冷凝器。停止加热，从水浴上取下烧瓶，迅速冷却至室温。准确加入15 mL二氯甲烷，振摇2 min，再加入饱和氯化钠水溶液，静置分层。吸取上层二氯甲烷提取溶液大约5mL， 至25mL试管中，加入大约5g无水硫酸钠，振摇1min， 静置5min， 吸取上层溶液到进样瓶。 2.3色谱条件 2.3.150M色谱柱条件 色谱柱： TG-FAME (50mx0.25mm， 0.25pm) (P/N：26054-5920) 载气 Nitrogen 分流比 100：1 柱流速 0.63 mL/min 升温程序 80℃(保持1min)，以20℃/min速率升高到160℃ (保持1.5min)， 再以3℃/min的速率升高到250℃ (保持3min) 进样口温度 270°C 检测器类型 FID 检测器温度 280C 空气流量 300 mL/min 氢气流量 30ml/min 尾吹 40ml/min 3.实验结果与讨论 3.1实验结果 3.1.1标准品检测结果 采用上述仪器分析方法，使用TG-FAME 50m色谱柱分析37种脂肪酸甲酯，在39.5分钟内均可获得良好的色谱峰，且分离度大于国标要求的1.25。图1为混标测试图谱。 图1.37种脂肪酸甲酯混标在50m色谱柱上的测试图谱 3.1.2样品检测结果 在相同仪器分析条件下，甲酯化后的食用油样品中脂肪酸甲酯与基质分离效果良好，峰形尖锐对称，且分离度大于国标要求的1.25。图2为样品测试图谱。 图2.样品在50m色谱柱上的测试图谱 表3：食用油样品的检测结果： 峰顺序 目标物 出峰时间min 1 C16：0 15.043 2 C16：1[cis-91 16.123 3 C17：1[cis-10] 17.650 4 C18：0 17.968 5 C18：1[cis-9] 18.998 6 C18：2[cis-9，12] 20.563 7 C18：3[cis-9，12，15] 22.398 8 C23：0 25.922 3.1.3MS定性分析： 重复上面方法条件，载气为He气，扫描范围50-350，传输线260℃，离子源280℃。从全扫图上看，总浓度为1000ppm的标准品，仅分析出36个峰，重复试验，均为36个峰。如图3所示： 图3.37种脂肪酸甲酯混标在MS上TIC图 对比氮气的分析图，发现34号峰后面的位置峰丢失(图3红圈内位置)。由于脂肪酸甲酯提取离子比较相似，无法直接提取出丢失的目标物。调整方法为恒压模式，柱头压为100kPa，其他条件不变，在推测的丢失位置出现目标峰，如图4所示： 图4.恒压模式下37种脂肪酸甲酯混标TIC图 对37种物质进行NIST谱库对比，对应处相应化合物，出峰顺序如下： 表4.化合物出峰顺序 峰顺序目标物 出峰时间min 标准品浓度 (He做载气) ug/ml 1 C4：0 4.19 40.4 2 C6：0 5.12 40.4 3 C8：0 6.43 40.4 4 C10：0 7.69 40.8 5 C11：0 8.43 20.4 6 C12：0 9.22 40.4 7 C13：0 10.11 20.3 8 C14：0 11.12 40.4 9 C14：1[cis-9] 12.07 20.4 10 C15：0 12.24 20.3 11 C15：1[cis-101 13.33 20.4 12 C16：0 13.51 61.2 13 C16：1[cis-9] 14.51 20.4 14 C17：0 14.90 21.0 15 C17：1[cis-10L 15.98 20.4 16 C18：0 16.39 40.8 17 C18：1 trans-9] 11.70 20.2 18 C18：1| [cis-91 17.40 40.4 19 C18：2[trans-9，12] 18.26 20.2 热线8008105118 www.thermofisher.com ( 仅用于研究目的。不可用于 诊 断目的。 ◎2019 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留 所 有权利。所有商标均为Thermo Fisher Scientifi c Inc. 及其子公司的资产，除 非 另有指明。 ) 峰顺序 E目标物 出峰时间min 标准品浓度 (He做载气) ug/ml 20 C18：2[cis-9，12] 18.96 20.2 21 C20：0 19.62 40.8 22 C18：3[cis-6，9，12] 20.14 20.3 23 C20：1[cis-111 20.67 20.2 24 C18：3cis-9，12，15] 20.81 20.4 25 C21：0 21.92 20.3 26 C20：2[cis-11，14] 22.31 20.4 27 C22：0 22.98 40.5 28 C20：3[cis-8，11，14] 23.50 20.4 29 C22：1|cis-13 24.04 20.4 30 C20：3[cis-11，14，17] 24.19 20.4 31 C23：0 24.42 20.3 32 C20：4cis-5，8，11，14| 24.67 20.2 33 C22：2[cis-13，16] 25.68 20.4 34 C24：0 26.34 40.4 35 Methyl cis-5，8，11，14，17- 26.40 20.4 eicosapentaenoate 36 C24：1[cis-15] 27.38 20.4 37 Methyl cis-4，7，10，13，16-docosahexenoate 30.77 20.3 注：此表出峰时间是以恒压模式运行，仅供出峰顺序定位。在恒流模式下保留时间略有不同。 3.2讨论 在国标中，100m色谱柱对化合物的分离效果良好，但分析时间较长，通常在60-80min之间，选择50m的TG-FAME色谱柱，在保证分离的同时，缩短分析时间在39.5min以内，实现了分析速度的提升。TG-FAME为脂肪酸甲酯分析专用柱，可以有效提高分析速度的同时保证分离效果，是快速分析37种脂肪酸甲酯的最佳选择。 ( 色谱柱信息： ) 货号 色谱柱描述26054-5920TG-FAME色谱柱， 50mx0.25mm，0.25um 参考文献： Separation of 37 Fatty Acid Methyl Esters Utilizing aHigh-Efficiency 10m Capillary GC Column with Optimization in ThreeCarrier Gases S CIENTIFIC SCIENTIFIC 口赛默飞口 官方微信电话 在国标中，100m色谱柱对化合物的分离效果良好，但分析时间较长，通常在60-80min之间，选择50m的TG-FAME色谱柱，在保证分离的同时，缩短分析时间在39.5min以内，实现了分析速度的提升。TG-FAME为脂肪酸甲酯分析专用柱，可以有效提高分析速度的同时保证分离效果，是快速分析37种脂肪酸甲酯的选择。