中药材及饮片中农药残留量检测方案

EZsep SPE Application Note 中药材及饮片中多种农药残留量的测定 SPE-UPLC-MS/MS 法 1、适用范围 本方案适用于药材及饮片中氨基甲酸酯、有机磷等30种农残检测。(按药典2020版第四部2341农药残留量测定法，第五法药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法， P275)。 2、标准品配制 表1：30种混标储备液的组分及浓度表 序号 中文名称 英文名称 CAS 浓度 (ug/mL) 1 甲胺磷 Methamidophos 10265-92-6 100 2 苯线磷 Fenamiphos 22224-92-6 40 3 苯线磷砜 Fenamiphos-sulfone 31972-44-8 40 4 苯线磷亚砜 Fenamiphos-sulfoxide 31972-43-7 40 5 地虫硫磷 Fonofos 944-22-9 40 6 治螟磷 Sulfotep 3689-24-5 40 7 克百威 Carbofuran 1563-66-2 100 8 3-羟基克百威 Carbofuran-3-hydroxy 16655-82-6 100 9 胺苯磺隆 Ethametsulfuron 97780-06-8 100 10 甲磺隆 Metsulfuron-methyl 74223-64-6 100 11 氯磺隆 Chlorsulfuron 64902-72-3 100 12 硫线磷 Codusafos 95465-99-9 40 13 氯唑磷 Isazophos 42509-80-8 20 14 甲拌磷 Phorate 298-02-2 40 15 甲拌磷亚砜 Phorate sulfoxide 2588/3/6 40 16 甲拌磷砜 Phorate sulfone 2588/4/7 40 17 蝇毒磷 Coumaphos 56-72-4 100 18 硫环磷 Phosfolan 947-02-4 60 19 磷胺 Phosphamidon 13171-21-6 100 20 涕灭威 Aldicarb 116-06-3 100 21 涕灭威砜 Aldicarb-sulfone 1646-88-4 100 22 涕灭威亚砜 Aldicarb-sulfoxide 1646-87-3 100 23 久效磷 Monocrotophos 6923-22-4 60 24 内吸磷(O+S) Demeton(O+S) 8065-48-3 40 25 灭线磷 Ethoprophos 13194-48-4 40 26 特丁硫磷砜 Terbufos-sulfone 56070-16-7 40 27 特丁硫磷亚砜 Terbufos-sulfoxide 10548-10-4 40 28 水胺硫磷 Isocarbofos 24353-61-5 100 29 杀虫脒 Chlordimeform 6164-98-3 40 30 甲基异柳磷 Isofenphos-Methyl 99675-03-3 40 (2)混标中间液以甲胺磷计5pg/mL：吸取 0.5 mL 混标储备液，用乙腈定容至 10mL， 配制成 5 ug/mL的混标中间液。 (3) 基质混合对照品溶液：取空白基质溶液1mL(6份)，40℃氮吹至约0.6mL， 按照下表加标，用乙腈稀释至1mL，加入0.3mL水，混匀，过 PTFE膜，即得基质混合对照品溶液。 表2标准曲线配制方法 级别 标曲浓度 ng/mL 混标中间液浓度，以甲胺磷计 ug/mL 吸取体积 1 0 -- 不加标 2 5 0.1 ug/mL 50 uL 3 10 1.0 ug/mL 10 uL 4 25 1.0 ug/mL 25 uL 5 50 5.0 ug/mL 10 uL 6 100 5.0 ug/mL 20 uL 7 200 5.0 ug/mL 40 uL 3、提取 3.1金银花和当归样品 (1)取5.0 g样品于100mL烧烧中，加入1gNaCl， 加入 50 mL 乙腈，15000 r/min 均i质11min，6000 rpm 离心5 min； (2) 将上清液转移至150 mL旋蒸瓶中，残渣用50 mL 乙腈按照步骤(1)提取一次。 (3)合并两次上清液，40℃减压蒸至低于3-5mL，冷却后，用乙腈定至10mL， 取出5mL待净化。 3.2陈皮和枸杞样品 (1)取 3.0 g样品于50mL离心管中，加入15 mL1%乙酸水，浸泡半小时。 (2)加入15mL乙，振荡5 min， 加入萃取盐包，振荡3 min， 6000 rpm 离心 2 min；(3)取出上清液9 mL待净化。 4、净化 4.1金银花和当归样品 EZsep HLB 200mg/6 mL (Cat#： PZ12609)SPE小柱不活化，直接上样5mL， 接收全部流出液，混匀后，取出1mL流出液加入 0.3 mL 水，混匀，过 PTFE 膜，上机分析。同方法制备空白基质溶液(SPE柱净化后的流出液)。 4.2陈皮和枸杞样品 EZsep QuE 15 mL Tube(Cat#： PZ13036)(300 mg PSA/ 300 mg C18 /90 mg Carb / 900 mgMgSO4/300 mg Silica)将待净化液加入到15mL EZsept QuEChERS净化管，涡旋混合均匀，振荡5 min， 6000rpm 离心5 min，准确取出5mL上清液于5mL氮吹管中，40℃水浴中氮吹至约 0.4 mL，用乙腈定容至1mL，加入0.3mL水，混匀，过PTFE膜，上机分析。 5、分析条件 UPLC条件 色谱柱： Leapsil C18， 100×2.1 mm， 2.7 um 流 速：0.3mL/min 进样量：2uL 柱温：40℃ 流动相： A：0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L 甲酸铵) B：乙腈—0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)：=95：5 梯度设置 时间/Min. 0 1 12 14 16 20 A(%) 70 70 0 0 70 70 B(%) 30 30 100 100 30 30 质谱条件： 电离模式： ESI扫描方式：正离子扫描检测方式：多反应监测电喷雾电压：5500V雾化气压力：50 psi辅助气压力：50 psi气帘气压力：20psi离子源温度：500℃ 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表 药物名称 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量/eV 去簇电压/V (m/z) (m/z) 6、添加回收结果 药材及饮片中多种农药残留的的测定添加回收结果(%) 回收率% 添加水平定量限 加标量：混标中间液加250 uL 基质 金银花 当归 陈皮 枸杞 甲胺磷 84.2 100.3 72.8 77.4 苯线磷 84.9 93.0 96.1 101.2 EZsep SPE Application Note 苯线磷砜 89.2 99.4 90.7 96.8 苯线磷亚砜 101.6 96.5 86.2 87.3 地虫硫磷 83.1 81.2 102.8 86.2 治螟磷 100.0 91.6 108.6 82.8 克百威 91.8 94.5 106.0 98.4 3-羟基克百威 92.0 97.4 87.3 88.1 胺苯磺隆 85.3 87.9 101.3 86.0 甲磺隆 86.3 99.2 91.0 86.8 氯磺隆 87.0 100.0 88.6 87.9 硫线磷 86.5 89.8 95.9 86.9 氯唑磷 91.5 101.4 97.3 98.5 甲拌磷 91.6 90.3 101.2 89.9 甲拌磷亚砜 95.4 97.7 102.8 101.9 甲拌磷砜 78.5 97.6 111.8 92.3 蝇毒磷 84.7 104.3 93.3 83.6 硫环磷 91.2 96.4 73.8 96.4 磷胺 92.0 95.3 92.1 99.0 涕灭威 135.0 83.3 83.1 104.5 涕灭威亚砜 85.0 106.9 82.1 88.9 涕灭威砜 93.4 101.1 82.4 90.8 久效磷 87.6 114.7 80.2 88.5 内吸磷 82.2 94.0 95.4 87.7 灭线磷 95.4 98.3 96.5 95.4 特丁硫磷砜 88.8 96.2 102.8 90.7 特丁硫磷亚砜 95.2 108.5 105.2 95.6 杀虫脒 72.4 95.5 65.3 67.2 甲基异柳磷 88.7 80.2 87.7 76.4 水胺硫磷 72.6 94.2 86.4 88.1 药材及饮片中多种农药残留的的测定基质效应结果(%) 基质效应% 金银花 当归 陈皮 枸杞 甲胺磷 56.8 59.4 23.0 65.6 苯线磷 111.2 99.0 97.8 112.6 苯线磷砜 112.1 117.1 132.9 104.8 苯线磷亚砜 96.9 118.0 126.4 120.1 地虫硫磷 102.6 73.4 90.0 102.7 治螟磷 106.8 73.0 88.6 108.3 克百威 106.4 87.9 91.7 105.3 3-羟基克百威 110.8 99.0 95.4 96.9 胺苯磺隆 107.0 88.4 79.1 113.2 甲磺隆 99.7 94.3 62.1 130.9 氯磺隆 113.8 91.0 74.9 126.6 硫线磷 111.4 65.1 96.9 113.2 氯唑磷 100.7 85.7 99.0 103.4 甲拌磷 88.7 89.5 96.8 104.8 甲拌磷亚砜 106.9 73.7 69.4 100.7 甲拌磷砜 117.4 125.8 11.1 103.6 蝇毒磷 173.7 94.9 132.4 122.7 硫环磷 107.6 82.0 88.2 117.0 磷胺 107.8 96.2 61.3 103.5 涕灭威 83.1 92.0 80.8 85.5 涕灭威亚砜 72.2 75.9 48.3 108.5 涕灭威砜 146.3 115.5 78.1 106.3 久效磷 70.7 85.4 65.2 116.3 内吸磷 101.1 95.5 26.0 115.1 灭线磷 102.4 86.0 97.2 96.8 特丁硫磷砜 98.6 111.0 89.2 122.9 特丁硫磷亚砜 108.3 114.6 94.0 103.0 杀虫脒 101.7 90.4 46.7 98.4 甲基异柳磷 134.3 44.9 110.9 111.0 水胺硫磷 127.0 74.6 32.9 119.3 XIC of +MRM (72 pairs)： 142.100/94.100... 图130种农药标准品 50 ug/L 的 MRM 色谱图 88008000 7000- 60005000 c400013000- 2000- 1000- Max. 8800.0 cps. 地虫硫磷 1XIC of +MRM (72 pairs)： 336.000/266.200 ... 2.3e4 2.0e41.8e41.6e4·1.4e41.2e41.0e43000.06000.04000.02000.0 0.01.02.03.04.0 IXIC of +MRM (72 pairs)： 411.100/196.300 ... Max. 1.1e5 cps. 1.10e51.00e5 胺苯磺隆9.00e48.00e47.00e46.00e45.00e44.4.00e43.00e42.00e41.00e4 0.01.02.03.04.05.06.07.08.0 Max. 2.3e4cps. 苯线磷砜 5.0 6.07.0 8.0 9.0 10.011.012.013.014.015.0 I XIC of +MRM (72 pairs)： 142.100/94.100 ... Max. 6.3e4 cps. 甲胺磷 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.010.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0 1.6e41 1.4e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 6000.0 4000.0 2000.0 Time， min I XIC of +MRM (72 pairs)： 323.000/97.100... 2.4e4- 2.2e4 2.0e4 1.8e4 1.6e4·1.4e41.0e4 I XIC of +MRM (72 pairs)： 222.000/123.000 ... 3.5e4 3.0e4 2.5e42.0e41.5e41.0c4 5000.0 1.0：2.03.04.0 克百威 Max. 2.5e4 cps. 治螟磷 I XIC of +MRM (72 pairs)：382.000/167.300... 2.0e4 1.8e4 1.6e41.4e41.2e41.0e4 氯唑磷 甲拌磷 甲拌磷亚砜 1XIC of +MRM (72 pairs)： 314.000/162.300 ... Max. 4.6e4 cps. I XIC of+MRM (72 pairs)： 260.900/75.100 ... Max.2500.0 cps. IXIC of +MRM (72 pairs)： 277.000/171.100 ... Max. 1.7e4 cps. 蝇毒磷 硫环磷 甲拌磷砜 200- 1.09e4： 1.00e4+ 9000.00- 8000.00-7000.00-6000.00505000.00-4000.003000.002000.00 1000.00- 1.8e4 1.6e4+1.4e41.2e4sd1.0e43qB000.06000.04000.02000.0 XIC of +MRM (72 pairs)： 321.100/171.20... Max.5600.0 cps.5500 5000 久效磷4500100D00-3500-300025002000-1500 1000- 500 6010203.0 4.0 5.0 6.07.08.09.0 001020 3.0Time min 1 XIC of +MRM (72 pairs)： 224.100/193.100 ... Max. 8.0e4 cps. 涕灭威 9.0Time.min T XIC of +MRM (72 pairs)： 293.000/247.100 ... I XIC of +MRM (72 pairs)： 259.200/89.100... Max. 6.9e4 cps. 6.9e4： 6.5e4] 6.0e4 涕灭威亚砜5.5e45.0e44.5e44.0e413.5e4c3.0e42.5e42.0e41.5e41.0e4] 5000.01 0.0 1.02.03.0 4.0 5.06.0 7.08.09.010.011.0 12.0 13.0 14.0 15.0Time， min Max. 1.7e4 cps. 硫环磷 Max.2500.0 cps. 930 蝇毒磷 10.011.012.013.0 14.015.0 1.0e48000.0-6000.04000.0-2000.0 00.010 20 3.0 40 5.0 6.0 I XIC of +MRM (72 pairs)：363.000/227.20... Max. 1.1e4 cps. 磷胺 9.0 10.0 11.0 12.0 13.014.015.0 Max. 1.8e4 cps. 磷胺 01.02.0 3.0 4.0 5.0 6.07.08.09.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.015.0Time，min 7.9e4： 7.5e47.0e4 涕灭威砜6.5e46.0e45.5e415.0e44.5e44.0e43.5e43.0e42.5e4 3.2e4： 3.0e4·2.5e4-2.0e41.5e41.0e4 IXIC of +MRM (72 pairs)： 243.200/97.000 ... 1.3e411.2e41.1e4-1.0e4 9000.08000.07000.016000.015000.01 I XIC of +MRM (72 pairs)： 305.100/187.200 ... Max. 2.2e4 cps. 2.2e4 2.0e4- 内吸磷 1.8e41.6e41.4e41.2e4c1.0e48000..00-6000.1.00+ 4000.0- 2000.0- 00010203.0 4.0 5.0 6.07.08.0 Max. 1.3e4 cps. 1XIC of +MRM (72 pairs)： 256.000/140.100 ... Max.3.2e4 cps. 涕灭威亚砜 0.01.02.03.0 4.05.06.07.08.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.014.015.0Time， min 1 XIC of +MRM (72 pairs)： 206.900/132.100 ... Max. 8.8e4 cps. 内吸磷 4000.0- 2000.0 01.02.03.04.05.06.0 7.0 8.09.0 10.011.012.013.0 14.0 15.0 6010203.0 4.0 5.0 6.07.08.0 10.011.0 12013.0 14.015.0 00010203.0 4.0 5.0 6.07.08.09.0 10.0 11.0 12.013.014.0 15.0 ime， min XIC of +MRM (75pairs)： 306.900/273.000 ... Max. 1.7e4 cps. 1 XIC of +MRM (72 pairs)： 197.200/46.200... Max. 5700.0 cps. IXIC of +MRM (72 pairs)： 332.200/273.100 ... Max. 1.5e4 cps. 1.7e4 水胺硫磷 55001 杀虫脒 1.5e4 85 1.6e4 5000- 1.4e4 甲基异柳磷 1.3e4- 1.4e4 4500- 1.2e4 1.2e4 4000- 1.1e4 1.0e4 31.0e4 3500 9000.0 3000 8000.0- 8000.0 2500 7000.0- 兰6000.0 6000.0 2000 5000.01 4000.0 1500 4000.0- 1000- 3000.0 2000.0 500 2000.0 1000.05 26810 12 14 16 18 20 01.0203.0405.0*6.0 7.08.09.010.0 11.012013.0 14.015.0 000 1.0 2.0 3.0 4.0 5.06.0 7.0 80 9.0 10.011.0 12.0 13.014.015.0 图230种农药标准品50 ug/L 的 XIC 色谱图   SPE-UPLC-MS/MS 法 1、适用范围 本方案适用于药材及饮片中氨基甲酸酯、有机磷等 30 种农残检测。（按药典 2020 版第四部 2341 农药残留量测定法，第五法 药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法，P275）。