婴幼儿配方奶粉中1,3- 二油酸 -2- 棕榈酸甘油三酯和棕榈酸甘油三酯检测方案(气相色谱仪)

吕建霞余天赛默飞世尔科技(中国)有限公司 氢火焰检测器；婴幼儿配方奶粉；高温色谱柱 目标 建立高效的气相色谱检测方法，灵敏、快速测定婴幼儿配方奶粉中 OPO的含量奶粉中的油脂经过石油醚提取后，用正己烷复溶过膜后气相色谱仪采用氢火焰离子化检测器进行定量检测 引言 婴幼儿配方奶粉作为婴幼儿主要的营养摄入来源，其营养成分和安全指标一直备受关注。众所周知，母乳是婴儿的首选营养，因此，婴幼儿配方奶粉也经历着模仿和接近母乳的发展历程。 婴幼儿配方奶粉通常选用牛乳为原料，虽然牛乳的脂肪含量与母乳相似，但其脂肪酸组成差异很大。为了满足婴幼儿的生长发育需求，以牛乳为基质的婴幼儿配方奶粉不断发展变化，添加了花生四烯酸、α-亚麻酸、y-亚麻酸、DHA等不饱和脂肪酸，使其更接近母乳的营养成分特征。 1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(1，3-dioleoyl-2-palmitoyltriglyceride； C52：2， 简称OPO)是一种营养强化剂，是以植物油为原料，在脂肪酶催化酯交换下，脂肪酸在丙三醇分子上的位置重新排列而得。它作为一种基本脂肪配料，模仿母乳的构成和母乳脂肪的特性，从而能最佳的帮助钙和能量的吸收“。2010年上海举行的第六届亚洲及太平洋地区母胎医学大会上，众多知名专家均认同配方奶粉引入OPO达到了迄今为止最为接近母乳的喂哺效果。o2008年中华人民共和国卫生部第13号公告批准了 OPO作为营养强化剂可用于婴幼儿配方奶粉的生产，并于2010年中华人民共和和卫生部第1号公告中明确规定了 OPO扩大适用范围及使用量。然而国内尚无任何关于 OPO 的检测标准和检测方法，无法衡量婴幼儿配方奶粉中是否 添加OPO，添加量如何以及添加范围是否合理安全等问 题。因此，急需建立婴幼儿配方奶粉中OPO定量检测方法。 本研究建立了婴幼儿配方方粉中OPO含量的测定方法，旨在为保障婴幼儿配方奶粉安全和质量提供技术支持。 ( 仪器 Trace1310气相色谱仪，配 F ID检测器 (Thermo Scientific) ； AS1310自动进样器 (The r mo Scientific)数据处理系统： Chromeleon7.2 ) ( 试剂与标准品 棕榈酸甘油三酯、十七碳酸甘油三酯、1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO)标准品，纯度>99%，购自美国NU CHEK Prep， I nc. ) 氨水：国药集团；乙醇，石油醚，正己烷：：：色谱纯(Thermofisher) 超纯水 标准储备溶液 十七碳酸甘油三酯溶液：称取十七碳酸甘油三酯标准品10mg 加入适量的正己烷溶解，并定容至10mL， 得到浓度为 1g/L 的标准储备溶液。 棕榈酸甘油三酯溶液：称取棕榈酸甘油三酯标准品10mg加入适量的正己烷溶解，并定容至10mL，得到浓度为1g/L的标准储备溶液。 1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO)溶液：称取1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO)标准品25mg加入适量的正己烷溶解，并定容至5mL，得到浓度为 5g/L的标准储备溶液。 标准工作溶液：上述三种标准储备溶液各取100pL，加入700pL正己烷，混匀得到混合标准工作溶液。 样品前处理 称取奶粉样品1.0-2.0g于50mL试管中，加入8mL水，溶解后加2mL氨水，充分摇匀；用氨水调溶液呈碱性，转移至150mL分液漏斗中，加10mL乙酒摇匀；加入15mL石油醚，振荡1min；静置直至上层溶液澄清。重复萃取三次，将醚溶液合并至圆底烧瓶中，氮气保护下45℃旋转蒸发至干。 将提取出的油脂中加入十七烷酸甘油三酯(C51：0)内标溶液1mL，加正己烷定容至10mL。转移溶液至进样小瓶中，待上机分析。 实验条件 色谱柱： TG-5 HT， 15 m， 0.25 mm，0.1 pm； 柱温：300 (3min)， 20℃ /min 到 380℃ (10 min)； 进样模式： split，分流比20：1，进样口温度：320℃； 载气：氮气，恒流模式， 1.5 mL/min； FID检测器，，温度：370℃；氢气：35mL/min；空气：350mL/min；尾吹气，氮气：40mL/min。 结果与讨论 按照上述色谱条件，十七烷酸甘油三酯、棕榈酸甘油三酯、OPO的混合标准溶液谱图见图1， 其中 7.4min 为棕榈酸甘油三酯(100mg/L)， 8.2min 为内标物十七烷酸甘油三酯(100mg/L)， 8.5min 为 OPO (500mg/L)。定量以十七烷酸甘油三酯为内标物，采用内标法定量。方法检出限棕榈酸甘油三酯为 25mg/kg， OPO 为 50mg/kg。 回收率及精密度实验：用标准添加法，在奶粉样品中，添加棕榈酸甘油三酯和OPO混合标准溶液，做加标回收实验，按上述方法进行提取和测定，样品添加浓度为1.0mg/g，做3个平行，棕榈酸甘油三酯的平均回收率为82.4%，三次平行测定的重复性为 RSD=3.1%；OPO的平均回收率为78.8%，三次平行测定的重复性为 RSD=1.8% 图1.混合标准溶液的色谱图，按出峰先后顺序依次为棕榈酸甘油三酯、十七烷酸甘油三酯、OPO 实际样品测定：按上述方法测定了两个奶粉样品中的棕榈酸甘油三酯和OPO的含量，测定结果见表1。 图2.实际样品测定谱图，上图为实际样品，下图为标准品溶液 表1.实际样品测定结果(mg/kg) 样品 棕榈酸甘油三酯 1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO) 01 409 9466 02 540 2200 奶粉中 OPO的测定一直是一个难点问题，由于其特殊性，通常水解之后再测定。本方法采用直接测定的方法，奶粉中的棕榈酸甘油三酯和OPO经提取后，采用赛默飞世尔新型的气相色谱仪检测，内标法定量。结果表明，两种目标物的平均回收率为78.8-82.4%，3次平行测定的RSD 值≤3.1%，方法检出限棕榈酸甘油三酯为 25mg/kg，OPO 为 50mg/kg。该方法操作简单，重复性好，准确性高，能够满足奶粉样品中的测定要求。 ( [1] Kennedy K ， F ewtrell MS， Morley R， et al. Do u ble-blind，randomized trial of a s ynthetic t riacylglycerol in formula-fedterm in f ants： e ffects on s t ool b i ochemistry， stool char a cteristics，and b one m i neralization [ J ]. T he A m erican Journal of C li n icalNutrition， 1999，70(5) ： 920-927. ) ( [2]中外专家探讨配方奶粉的重大创新突破配方奶粉可以变的更易吸收.2010年11月11日14：04.来源：人民网- 健康 卫 生频道， http：//health.people.com.cn/GB/13189069. html. ) ThermoFisherS CIENTIFIC AN_C_GC- 奶粉中 OPO 的测定一直是一个难点问题，由于其特殊性， 通常水解之后再测定。本方法采用直接测定的方法，奶 粉中的棕榈酸甘油三酯和 OPO 经提取后，采用赛默飞世 尔新型的气相色谱仪检测，内标法定量。结果表明，两 种目标物的平均回收率为 78.8-82.4%，3 次平行测定的 RSD 值≤ 3.1%，方法检出限棕榈酸甘油三酯为 25mg/kg， OPO 为 50mg/kg。该方法操作简单，重复性好，准确性高， 能够满足奶粉样品中的测定要求。