elisa试剂盒中大鼠Smad同源物7 (Smad7)检测方案(试剂盒)

大鼠Smad同源物7 (Smad7) elisa试剂盒操作步骤 1  在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照； 2  在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照； 3  取100μl经1:100稀释好的待检样品加入相应孔中，并做好记录； 4  37℃孵育30min； 5  将各孔的液体弃入废液桶，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复5次，每次30s； ﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果，尽量将孔内洗涤液抛甩干净； 6  每孔加100μl酶标结合物； 7  37℃孵育30min；重复步骤3.5； 8  每孔加100μl底物液； 9  37℃孵育10min（避光显色）； 10 每孔加100μl的终止液； 11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD450值。 试验有效性判断 ​阴性对照：正常情况下，阴性对照OD450值≤0.2； 阳性对照：正常情况下，阳性对照OD450值≥0.4； 临界值(C.O.)的计算：临界值=0.18+阴性对照均值；阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃，如所有阴性对照OD450值都大于0.2时须重复实验；阴性对照于0.05时以0.05计算。 结果判定：检测样品OD450值≥临界值，判定该检测样品为阳性；检测样品OD450值＜临界值，判定该检测样品为阴性。 （﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀，所有试剂应平衡至室温） 大鼠Smad同源物7 (Smad7) elisa试剂盒操作步骤 1  在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照；2  在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照；3  取100μl经1:100稀释好的待检样品加入相应孔中，并做好记录；4  37℃孵育30min；5  将各孔的液体弃入废液桶，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复5次，每次30s；﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果，尽量将孔内洗涤液抛甩干净；6  每孔加100μl酶标结合物；7  37℃孵育30min；重复步骤3.5；8  每孔加100μl底物液；9  37℃孵育10min（避光显色）；10 每孔加100μl的终止液；11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD450值。试验有效性判断阴性对照：正常情况下，阴性对照OD450值≤0.2；阳性对照：正常情况下，阳性对照OD450值≥0.4；临界值(C.O.)的计算：临界值=0.18+阴性对照均值；阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃，如所有阴性对照OD450值都大于0.2时须重复实验；阴性对照于0.05时以0.05计算。结果判定：检测样品OD450值≥临界值，判定该检测样品为阳性；检测样品OD450值＜临界值，判定该检测样品为阴性。