ELISA检测试剂盒中ELISA检测方案(试剂盒)

人铜蓝蛋白ELISA检测试剂盒操作流程： （1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。  （2）酶标板置4℃，包被过夜。 （3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。 （4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。  （5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。  （6）洗板，同（4）。  （7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。  （8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。  （9）洗板，同（4）。  （10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。  （11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。  （12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。 （13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。产品仅用于科研 人铜蓝蛋白ELISA检测试剂盒操作流程：（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 （2）酶标板置4℃，包被过夜。（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 （5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 （6）洗板，同（4）。 （7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 （8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 （9）洗板，同（4）。 （10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 （11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 （12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。产品仅用于科研