蜂王浆中甲砜霉素检测方案(液相色谱仪)

应用简讯 Agilent食品检测与农业Trusted Answers 使用固相萃取结合 HPLC-MS-MS 对蜂王浆中残留的氯霉素类药物进行分析 张聪聪，吴翠玲安捷伦科技(中国)有限公司 周金慧 本文开发出一种对蜂王浆中的氯霉素类药物残留进行分析的方法。该方法使用 AgilentBond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱与高灵敏度 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统相结合，分别采用负离子、正离子模式检测蜂王浆中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留。 氯霉素类药物是一类广谱抗生素，主要包括氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考，用于防治畜禽和水产动物的细菌性疾病。氟苯尼考胺是氟苯尼考的主要代谢物，通常以氟苯尼考胺作为动物体内氟苯尼考的残留标示物。氯霉素存在严重的毒副作用，且化学性质稳定，因此被我国、美国和欧盟许多国家禁止用于可食用动物。甲砜霉素毒性小于氯霉素，效果好，是氯霉素的理想替代药物。欧盟和我国均规定动物性食品中甲砜霉素的最高残留限量为50 pg/kg。 氟苯尼考又名氟甲砜霉素，是第三代氯霉素类广谱抗菌药，毒性较小，药效优于甲砜霉素和氯霉素。欧盟规定氟苯尼考及主要代谢物折算成氟苯尼考胺计算总和，最高残留限量为 1000 pg/kg。日本肯定列表中氟苯尼考在畜禽组织中的限量也均大于100 ug/kg。 仪器和设备 采用 Agilent 1290 Infinity ll 高效液相色谱系统与 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统。 样品前处理 称取2±0.1g蜂王浆样品，加入0.25g胰蛋白酶和2mL水，充分混匀后于40℃下避光振荡2h。用8mL2%氨化乙腈涡旋提取1min， 低温离心10 min，移上清液于另一试管中，于40°℃条件下氮吹剩水，用超纯水定容至5mL，备用。固相萃取流程如下图所示。 图1.蜂王浆中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的固相萃取流程 负离子模式 色谱柱： Poroshell 120 EC-C18， 3.0×100 mm，2.7 um柱温： 40°℃进样量： 5 pL流动相A： 水流动相B： 乙腈流速： 0.4 mL/min梯度条件： 0-2 min，10%-30%B；2-4 min， 30%-75%B；4-4.1 min， 100%B；4.1-7 min， 100%B；7.1 min， 10%B后运行时间： 3 min 正离子模式 色谱柱： Poroshell 120 EC-C18， 3.0×100mm， 2.7 um 柱温： 35°C进样量： 5pL流动相A： 0.2%甲酸水溶液流动相B： 甲醇流速： 0.4mL/min梯度条件： 0-1min， 5%B；1-3min， 5%-60%B；3-3.1 min，95%B；3.1-7 min，95%B；7.1 min， 5%B 后运行时间：]：3 min 负离子模式 干燥气温度： 250°C 干燥气流速： 7 L/min 雾化器压力： 40 psi 鞘气温度： 370°C℃ 鞘气流速： 12L/min 毛细管电压： 2500V(-) 正离子模式 干燥气温度： 250°C 干燥气流速： 7 L/min 雾化器压力： 35 psi 鞘气温度： 325°C 鞘气流速： 11L/min 毛细管电压： 3500V(+) 表1.MRM 参数 分析物 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 碎裂电压(V) 碰撞能量(eV) 离子模式 氯霉素 321.0 257.0 100.0 10.0 负 321.0 152.0 100.0 15.0 氟苯尼考 356.0 335.9 100.0 8.0 负 356.0 184.9 100.0 15.0 甲砜霉素 353.9 289.9 120.0 10.0 负 353.9 184.9 120.0 15.0 氟苯尼考胺 248.1 230.1 70.0 4.0 正 248.1 130.1 70.0 20.0 如图2-3和表2-3所示，本文所述的方法适用于分析王浆中残留的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺。该方法负离子模式的3种化合物和正离子模式的氟苯尼考胺的定量限分别为 1 pg/kg 和2 ug/kg。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考在1-100 ng/mL 范围内表现出良好的线性(基质校准曲线)，氟苯尼考氟在 2-200 ng/mL 范围内表现出良好的线性(基质校准曲线)。在1、2、5 pg/kg 和2、4、10 pg/kg 3个加标水平下，蜂王浆中各种化合物的加标回收率分别为72.0%-116.9%和80.2%-87.7%， RSD≤ 6.9%。 图2.氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考 10 ng/mL标品(蓝色)、蜂王浆空白样品(黑色)、10 ng/mL 基质加标样品及 5 pg/kg 加标样品的色谱图 图3.氟苯尼考胺 20 ng/mL标品(蓝色)、蜂王浆空白样品(黑色)、20 ng/mL 基质加标样品及5 pg/kg 加标样品的色谱图 表2.氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的线性方程 分析物 线性方程 相关系数R? 氯霉素 Y=21410.1*X+218067.9 0.9997 甲砜霉素 Y=2322.4*X-2608.1 0.9991 氟苯尼考 Y=18627.1*X-14290.1 0.9997 氟苯尼考胺 Y=41481.1*X-56700.2 0.9995 表3.氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺在不同加标水平下的回收率 加标 1 pg/kg 加标2 pg/kg 加标 5 pg/kg (氟苯尼考胺2pg/kg)(氟苯尼考胺 4 pg/kg)(氟苯尼考胺 10 pg/kg) 目标分析物 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 氯霉素 100.5 1.0 115.0 4.3 116.9 0.6 甲砜霉素 85.0 3.0 72.0 5.7 78.7 3.7 氟苯尼考 93.7 4.9 96.7 6.4 105.9 6.9 氟苯尼考胺 87.7 1.8 83.0 4.8 80.2 4.1 结论 本文采用 Agilent Bond Elut Plexa PCX (500 mg，6mL)固相萃取柱，利用其反相和离子交换两种保留机理，同时净化蜂王浆中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺，使用 AgilentPoroshell 120 快速分析柱并结合 Agilent 6470 分别采用正负两种模式获得较高的灵敏度。该方法适用于分析蜂王浆中的氯霉素类药物残留。 消耗品订购信息 消耗品 部件号 Agilent Bond Elut Plexa PCX， 500 mg， 6mL 12258506 Agilent Poroshell 120 EC-C18，3.0×100 mm， 2.7 pm 695975-302 Agilent VacElut 20 固相萃取装置 12234104 Agilent Captiva 过滤膜， PES， 0.2 pm， 13 mm 170113023 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 ( 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 ) ·Agilent◎安捷伦科技(中国)有限公司，，中国出版Trusted AnswersHCN 本文开发出一种对蜂王浆中的氯霉素类药物残留进行分析的方法。该方法使用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱与高灵敏度 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统相结合，分别采用负离子、正离子模式检测蜂王浆中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留。