食品中新红检测方案(液相色谱柱)

「应用纪要WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要 食品中10种合成着色剂同时检测的方法 贺小蔚 沃特世科技(上海)有限公司 应用优势 利用OasisWAX小柱可以同时进行10种合成着色剂的净化，相较于国标方法更简单、快速、高效； 该方案能够同时检测食品中常用的10种合成着色剂，并可以将新红和柠檬黄达到极好的分离； 合成着色剂对很多类型的过滤膜都比较敏感，尤其是赤藓红。本应用用PTFE的滤膜成功解决了这个问题。 沃特世解决方案 Alliancee2695高效液相色谱仪 PDA二极管阵列检测器 SymmetryC色谱柱 简介 人工合成着色剂因其色彩亮丽、性质稳定、价格低廉，成为食品工业常用的添加剂之一，它们通常以苯、甲苯、萘等化工原料合成，长期食用对人体健康具有一定毒性。 我国规定允许使用的人工合成色素有11种。国标GB/T 21916-2008和GB/T5009.35-2016只检测了9种色素，本文实现了10种着色剂的同时检测。 Waters Symmetry色谱柱 实验步骤 仪器条件 高效液相色谱条件 液相系统： Alliance e2695配光电二极 管矩阵检测器2998 柱温： 30°℃ 进样量： 20mL流速： 1.0mL/min流动相A： 含有20mM乙酸铵的水溶液流动相B： 甲醇色谱柱： SymmetryC4.6x150mm， 5 pm (货号： WAT045905) 检测波长： 254nm 梯度： Time (min) Flow (mL/min) A% B% Curve 0.0 1.0 90 10 6 5.0 1.0 90 10 6 10.0 1.0 75 25 6 15.0 1.0 55 45 6 20.0 1.0 2 98 6 25.0 1.0 2 98 6 35.0 1.0 90 10 1 提取： 液体样品(饮料、酒等)：取样品10mL(含二氧化碳样品加热或超声驱除二氧化碳)，pH调节至6后， 待OASISWAX小柱(6cc，150 mg，部件号186002493)净化。 固体样品(肉)：取样品1g，加8mL的80℃热水，振荡提取10 min， 在4000 rpm下离心5 min，收集上清液，剩余固体样品加入2mL的1%氨水乙醇溶液，振荡提取10 min， 在4000rpm下离心5 min，合并两次上清液， pH调节至6后，待OASISWAX小柱(6 cc， 150 mg， 部件号186002493)净化。 净化： 先将OASIS WAX小分分别用5mL甲醇和5mL超纯水进行活化。取10mL待净化的样品溶液过柱，弃去滤液。再分别用5 mL超纯水和5mL甲醇溶液清洗OASISWAX小柱。最后用5 mL 5%氨化甲醇溶剂洗脱SPE小柱，收集洗脱液，在50℃水浴下，氮气吹干后，用1mL的5%甲醇水溶液复溶，过0.45 um PTFE滤膜(部件号： WAT200536)过滤，待HPLC上机分析。 图1.10种色素混标在254nm下的色谱图(浓度为5 pg/mL)。 10种合成色素在0.5 mg/L-10 mg/L浓度之间，相关系数R²>0.999. 名称 英文名称 保留时间 线性方程 相关系数R2 新红 New red 6.07 Y=3.03e+004X-2.89e+003 0.999874 柠檬黄 Tartrazine 7.22 Y=2.28e+004X-4.53e+003 0.999871 苋菜红 Amaranth 9.15 Y=2.74e+004X-1.38e+003 0.999891 胭脂红 Ponceau 4R 12.20 Y=2.70e+004X-8.31e+002 0.999883 喹啉黄2 Quinolone yellow 12.58 Y=5.96e+003X-227e+002 0.999003 日落黄 Sunset yellow FCF 13.54 Y=2.27e+004X-2.20e+002 0.999862 诱惑红 Allura res AC 15.39 Y=1.67e+004X-2.13e+002 0.999847 亮蓝 Brilliant blue FCF 18.16 Y=4.57e+003X-1.95e+003 0.999994 酸性红 Carmosine 18.45 Y=1.11e+004X+1.99e+003 0.999419 赤藓红 Erythroseine 20.59 Y=3.26e+003X+1.67e+003 0.999985 表1.10中色素的保留时间，线性方程和相关系数R2。 图2.碳酸饮料的色谱图。 图3.熏肠的色谱图。 图4.红酒的色谱图。 图5.熏肠在10mg/kg添加浓度的色谱图。 下表是10种着色剂三种添加浓度下，不同样品的回收率结果。 名称 0.5 mg/L 2mg/L 5mg/L 回收率 RSD% 回收率 RSD% 回收率 RSD% % n=3 % n=3 % n=3 新红 87.6 5.4 88.2 1.6 88.7 2.5 柠檬黄 92.0 5.1 87.8 1.8 97.6 5.8 苋菜红 77.5 3.8 86.6 2.4 87.3 6.2 胭脂红 67.4 4.0 73.2 6.1 76.1 4.8 喹啉黄2 100.2 2.4 89.4 1.2 93.2 4.4 日落黄 90.4 6.5 88.2 1.8 88.6 5.6 诱惑红 89.6 6.3 88.5 2.7 88.0 3.4 亮蓝 88.8 2.4 88.5 2.5 87.0 5.0 酸性红 86.3 7.3 83.6 2.3 81.0 3.6 赤藓红 46.2 7.4 50.1 5.9 51.4 5.6 表2.碳酸饮料在不同添加浓度的回收率。 名称 2mg/Kg 5mg/Kg 10 mg/Kg 回收率 RSD% 回收率 RSD% 回收率 RSD% % n=3 % n=3 % n=3 新红 75.4 2.6 75.0 4.0 77.5 4.3 柠檬黄 65.8 1.8 74.3 7.4 60.8 5.7 苋菜红 47.2 3.3 74.4 5.2 69.6 2.5 胭脂红 46.1 3.5 64.6 3.0 47.7 5.7 喹啉黄2 65.4 3.8 84.7 7.8 78.8 2.7 日落黄 61.9 3.0 76.8 2.4 80.1 2.2 诱惑红 - 一 - 90.1 4.0 亮蓝 69.9 9.2 84.5 1.4 80.6 6.1 酸性红 82.6 2.0 93.9 2.4 85.9 2.3 赤藓红 24.1 1.9 28.5 5.2 24.3 5.4 表3.熏肠在不同添加浓度的回收率。 名称 1mg/L 2.5 mg/L 10 mg/L 回收率 RSD% 回收率 RSD% 回收率 RSD% % n=3 % n=3 % n=3 新红 93.3 4.6 96.4 4.5 96.8 5.0 柠檬黄 105.7 5.6 86.5 5.6 100.1 4.8 苋菜红 - - - - 胭脂红 103.7 4.8 101.9 4.1 100.0 2.9 喹啉黄2 87.9 7.6 102.7 5.7 111.7 6.1 日落黄 97.7 3.8 97.6 3.2 97.0 2.6 诱惑红 98.4 4.0 101.7 3.3 99.1 2.3 亮蓝 95.9 3.8 91.3 4.0 91.1 4.8 酸性红 103.6 3.6 97.3 3.9 94.3 4.8 赤藓红 50.9 4.0 52.9 3.3 51.3 5.1 表4.红酒在不同添加浓度的回收率。 结论 ( 本方法应用Symmetry C18色谱柱实现了10种色素的同时检测。10种色素达到很好的分离度。食品中喹啉 黄在国内尚无相应的检测标准，喹啉黄有四个组分，本方法使用其中一个组分峰进行定量； ) ( 对于不同基质样品，采用OASIS WAX小柱进行样品净化，选择性好，能够有效去除杂质干扰，除赤藓红回收率偏低以外，其他9种色素在饮料和红酒中的回收率在67.4-111.7%。熏肠样品因基质复杂，加标回收率某些组分偏低； ) ( 赤藓红为四碘荧光钠盐，易溶于水，其溶解性与溶液的pH有关，样品在最后定容时有有色色淀产生，因此 回收率不高。同时赤藓红在滤膜过滤易产生吸附，故过滤样品溶液时应选择吸附作用小的PTFE的滤膜。 ) 扫一扫，关注沃特世微信 Waters 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 上海：021-61562666 广州：020-28296555 成都：028-67653588 香港：852-29641800 Waters， Oasis，Symmetry和The Science of What’s Possible是沃特世公司的注册商标。 免费售后服务热线：800(400) 820 2676Www.waters.com 关键词合成着色剂、OASIS WAX、 SymmetryC， 食品中合成着色剂同时检测的方法 人工合成着色剂因其色彩亮丽、性质稳定、价格低廉，成为食品工业常用的添加剂之一，它们通常以苯、甲苯、萘等化工原料合成，长期食用对人体健康具有一定毒性。本文献应用Symmetry C18色谱柱实现了10种色素的同时检测。