牛乳中有机氯农药检测方案(测漏仪)

北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：1891184992315 2014， Vol.37No.4 乳业科学与技术 ※分析检测 北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：189118499232014， Vol.37 No.4 16※分析检测Journal of Dairy Science and Technology 气相色谱法测定牛乳中15种有机氯农药 刘丽君，赵 贞*，于海静，刘春霞，高 敏，李翠枝 (内蒙古伊利实业集团股份有限公司，内蒙古呼和浩特 010010) 摘 要：建立牛乳中15种有机氯农药残留量气相色谱法检测的方法。本方法用丙酮及石油醚提取样品中的有机氯农药，用RTX-1701毛细管柱进行分离，电子捕获检测器 (electron capture detector， ECD) 测定，外标法定量。该方法具有良好的准确度和精密度，在牛乳中加标平均回收率范围为60.6%~101.8%，相对标准偏差为4.3%~10.8%，该方法检出限为0.0020~0.009 5 mg/kg. 关键词：气相色谱法；牛乳；有机氯农药 Determination of 15 Organochlorine Pesticides in Milk by Gas Chromatography LIU Li-Jun， ZHAO Zhen*， YU Hai-jing， LIU Chun-xia， GAO Min， LI Cui-zhi (Inner Mongolia Yili Industrial Group Co. Ltd.， Hohhot 010010， China) Abstract： A method for the determination of organochlorine pesticides in milk by gas chromatography(GC) was developed. Extraction of organochlorine pesticides in samples was performed with acetone andpetroleum ether .The extract was separated on capillary column RTX-1701， detected with an electron capturedetector (ECD) and quantified by external standard method. The method had good accuracy and precision.The average recovery of organochlorine pesticides in spiked milk was 60.6%-101.8%，with relative standarddeviations of 4.3%-10.8%. The detection limits of organochlorine pesticides was 0.002 0 -0.0095 mg/kg. Key words： gas chromatography； milk； organochlorine pesticides 中图分类号：TS252.7 文献标志码：A 文章编号：1671-5187(2014) 04-0015-03 有机氯农药是一类广谱杀虫剂，属于神经毒物，可致癌1-31。该类农药性质稳定，不易分解，能在水域、土壤和生物体内长期贮存，经植物富集后会导致严重污染4-91。目前，有机氯常用的前处理方法有索式提取法19-121、固相萃取法113-15]、微波辅助提取法16-17和液液萃取法118-22等，本实验采用丙酮及石油醚提取样品中的有机氯农药，用RTX-1701毛细管柱进行分离，采用电子捕获检测器(electron capture detector， ECD) 检测，用气相色谱法测定牛乳中15种有机氯农药的残留量。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 石油醚(沸程30~60℃)、丙酮、正己烷均为色谱纯；无水硫酸钠为分析纯；α-HCH、y-HCH、β-HCH、p，p'-DDE、o，p'-DDT、p，p'-DDT、艾氏剂、狄氏剂、α-硫丹、β-硫丹、环氧七氯、反式氯丹、顺式 氯丹、七氯、硫丹硫酸酯标准溶液 上海安谱科学仪器有限公司。 1.2 仪器与设备 17A型气相色谱仪(带ECD检测器) 日本岛津公司；AB265-S型分析天平 瑞士Mettler-Doledo公司；RV 10 digital旋转蒸发仪、MS 3 basic涡旋混合器 德国Ika公司；3K30台式高速冷冻离心机 德国Sigma公司。 1.3 方法 1.3.1 气相色谱条件 色谱柱：RESTEK RTX-1701 (30m×0.25 mm.0.25 um)；进样温温度280℃；检测器ECD；检测器温度300℃；电流0.2mA；柱温120℃以15℃/min的速率升到220℃保持1min， 再以10℃/min的速率升到230℃保持30 min；载气N(纯度99.999%)；柱压100kPa；尾吹气流量40 mL/min；分流比1：6；进样体积1.0pL。 1.3.2 标准储备液配制 标准储备溶液(1 g/mL)：准确吸取α-HCH、 基金项目： “十二五”国家科技支撑计划项目(2012BAK17B16) ( 作者简介：刘 丽 君(1972一)，女，高级工程师，本科，研究方向为乳制品品质安全监控。E-mail： liulijun@yili.com ) * y-HCH、β-HCH、p.p'-DDE、o，p'-DDT、p，p'-DDT、艾氏剂、狄氏剂、α-硫丹、β-硫丹、环氧七氯、反式氯丹、顺式氯丹、七氯、硫丹硫酸酯标准溶液0.5 mL于50mL容量瓶中，分别用正己烷定容至刻度，一20℃冷冻保存。 1.3.3 标准工作液配制 标准工作溶液：将标准储备液用正己烷稀释，配制成所需质量浓度的混合标准工作溶液，分析前临时配制。 1.3.4 样品处理 称取试样10g牛乳样品(精确到0.1 mg) 于60mL离心管中，加入30mL丙酮，漩涡振荡3 min， 以10 000 r/min， 离心5 min。转移上清液于250mL分液漏斗中，加5 mL无水硫酸钠溶液摇匀。加入40mL石油醚反复振摇，静置分层后，将下层液体放入另一分液漏斗中，再用40 mL石油醚振提提取。合并2次的醚液，经无水硫酸钠干燥于250mL圆底烧瓶中，在40℃旋转蒸发仪上浓缩至近干，用正己烷溶解残留物并定容至5mL， 摇匀。溶液经0.45 um有机滤膜过滤，，-上机。 1.4 结果计算 式中：C为试样中有机氯农药的含量/( g/g)；A为样品中各残留有机氯农药对应峰面积；p为标准样中各标样质量浓度/((g/mL)；V为待测样品的定容体积/mL；4，为标准工作液中各标样的峰面积；m为样品的质量/g。 2 结果与分析 2.1 上机条件的选择 有机氯农药属于非极性或弱极性物质，选用DB-5和RTX-1701两种不同极性毛细管色谱柱进行分离检测，其中RTX-1701可使15种有机氯农药残留完全分离不受干扰， DB-5分离效果不好，不能使15种农药残留全部分离，所以最终选择RTX-1701毛细管柱。 2.2 前处理条件选择 牛乳中加入丙酮可以起到沉淀蛋白提取的作用，比较加入10、20、30mL丙酮，发现加入30mL丙酮时沉淀和提取效果最好。在分液漏斗中加入无水硫酸钠，可使石油醚和水相分层清晰，也可使农药残留更好的溶解到石油醚中，比较氯化钠和无水硫酸钠2种盐溶液，氯化钠分层不清晰，所以选择无水硫酸钠溶液。 2.3 气相色谱分析结果 在上述的气相色谱条件下有机氯农药混合标准溶液的色谱图如图1所示，15种有机氯农药残留可以完全分离， α-HCH、y-HCH、七氯、艾氏剂、β-HCH、环氧七氯、α-硫丹、反式氯丹、顺式氯丹、p.p'-DDE、狄氏剂、 o，p'-DDT、β-硫丹、p.p-DDT、硫丹硫酸酯的出峰时间分别为10.46、11.65、12.31、13.34、14.68、16.95、18.39、18.7、19.17、19.87、23.84、28.19、30.00、40.31 min。牛乳样品的气相色谱图如图2所示，样品经过处理后无杂峰干扰。 1. a-HCH； 2. y-HCH； 3.七氯；4.艾氏剂； 5.B-HCH；6.环氧七 氯：7.a-硫丹：8.反式氯丹；9.顺式氯丹： 10.p.p'-DDE： 11.狄氏剂；12.o，p'-DDT； 13. B-硫丹； 14. p.p'-DDT； 15.硫丹硫酸酯。 图1 15种有机氯农药标准溶液气相色谱图 Fig.1 GC chromatograms of mixed standard solution of15 organochlorine pesticides 图2 牛乳的气相色谱图 Fig. 2 GC chromatograms of milk 2.4 回收率实验 表1 牛乳添加回收率结果 (n=5) Table 1 Results of spiked recovery for mils (n=5) 组分 标样质量浓度/ (ug/mL) 回收率/%相对标准偏差/% a-HCH 0.04 77.2 4.6 y-HCH 0.04 78.8 7.6 七氯 0.03 80.7 8.2 艾氏剂 0.03 77.1 6.9 B-HCH 0.04 71.8 8.1 环氧七氯 0.03 82.9 5.9 a-硫丹 0.03 60.6 7.9 反式氯丹 0.02 66.3 9.2 顺式氯丹 0.02 61.9 5.6 p.p'-DDE 0.04 63.4 5.7 狄氏剂 0.03 64.7 6.8 o.p'-DDT 0.04 92.8 6.3 B-硫丹 0.03 84.6 5.1 p.p'-DDT 0.04 101.8 4.3 硫丹硫酸酯 0.04 73.9 10.8 由表1可知，本方法的加标平均回收率为60.6%~101.8%，测定结果的相对标准偏差为4.3%~10.8%，说明本方法的准确度和精密度良好，能满足有机氯农药残留分析的要求。 表2 方法检出限 Table 2 Detection limits of 15 organochlorinepesticides mg/kg 组分 -HCH y-HCH 七氯 艾氏剂 B-HCH 环氧七氯 a-硫丹 反式氯丹 顺式氯丹 pp-DDE 狄氏剂 o，p-DDT β-硫丹 pp-DDT 硫丹硫酸酯 检出限 0.0050 0.0050 0.0030 0.0050 0.0060 0.0030 0.0030 0.0020 0.0030 0.0050 0.0040 0.0060 0.0040 0.0095 0.0030 2.5 方法的检出限 通过加标回收率实验，以10倍信噪比计算各被测组分的检出限，如表2所示，15种有机氯农药残留的检出限在0.0020~0.009 5 mg/kg之间。 3 结 论 实验结果表明，采用气相色谱法测定牛乳中15种有机氯农药的残留量，平均回收率60.6%~101.8%，测定结果的相对标准偏差为4.3%~10.8%，检出限0.0020~0.0095mg/kg， 该方法测定结果准确，实用，可以有效的监控牛乳中有机氯农药的残留。 ( 参考文献： ) ( 1] 余建新，胡小钟，邵俊杰，等.大口经毛细管气相色谱法测定油脂、 果蔬中20种有机氯农药的残留量[].色谱，2000，18(4)：346-349. ) ( [2] 李继革，宁静恒，周凯.凝胶色谱净化-毛细管气相色谱法同时测定 蔬菜中23种农药残留[].理化检验：化学分册，2008，44(7)：637-639. ) ( 3] 阎正，封棣，李申杰，等.固相萃取-毛细管气相色谱法测定中草药中 13种有机氯农药的残留量[].色谱，2005，23(3)：304-311. ) ( 4] 赵立达，龚文杰，马建明.固相萃取源水中有机氯农药的测定方法 探讨[J].中国卫生检验杂志，2005，15(10)：1206-1207. ) ( 5] 曾鸣，曾凡刚.鸡肉中24种有机氯农药残留的测定方法[J].食品科 技，2006，30(6)：119-121. ) ( [6] 侯圣军，郝向洪，申丽，等 . 基质固相萃取-气相色谱电子捕获检测器同时测定大米中12种有机氯农药残留量[J].分析试验室，2007， 26(5)：115-118. ) ( 7] 胡恩宇，杨丽莉，母应锋，等.气相色谱法测定地表水中17种有机氯 农药[J].现代科学仪器，2010(2)：83-86. ) ( [8] 苏静华.气相色谱法测定甘草药材中9种有机氯农药的残留量[J].中国医院用药评价与分析，2013，13(5)：451-453. ) ( [9] 朱萱萱，茅咏雯，邱召娟，等.气相色谱法测定人参中残留有机氯农 药的含量[J].药品检验，1997，32(8)：484-486. ) ( [10] 李艳霞，邹图德，万益群.气相色谱法测定中药材中有机氯农药的 残留量[J].南昌大学学报，2005，29(6)：514-517. ) ( 11| 宋宝安，蒋木庚，金林红，等.毛细管气相色谱法分析中药半夏中有 机氯农药的残留[].农药，2004， 43(2)：92-93. ) ( [12] 张曙明，郭怀忠，陈建民.甘草中有机氯类农药残留量的毛细管气 相色谱测定[].药学学报，2002，35(8)：596-600. ) ( |13| 刘长武，刘凤枝，翟广书，等.蔬菜水果中25种有机氯农药残留快速 检测方法[J].环境科学学报，2003，23(4)：499-502. ) ( |14| 宋春满，和智君，田丽梅，等.有机氯农药残留气相色谱法测定中的 基质效应[].农药，2013，52(10)：745-747. ) ( [15] 郝丽丽，薛健.有机氯农药的多残留分析及其在中草药中的应用[]. 中国中药杂志，2005，30(6)：405-409. ) ( [16] 奉夏平，陈卫国，王志元，等 . 一种快速测定蔬菜水果中多种有机氯农药的简易新方法[].中国卫生检验杂志，2004，14(6)：701-702. ) ( 17] 曲茉莉.有机氯农药的固相萃取实验条件研究[].环境科学与管理， 2012，37(7)： 1 45-149. ) ( [18] 关泽明，郭晓玲，梁汉明，等.中药罗汉果中9种有机氯农药残留的 测定[].广东 药 学院学报，2010，26(4)：351-354. ) ( 19] 张磊，李敬光，赵云峰，等.凝胶渗透色谱法在分析食品中多氛联苯 的应用[].环境化学，2007，26(2)：197-201. ) ( 20 PAGLIUCA G， GAZZOTTI T， ZIRONI E， et al， Residue analysis of organophosphorus pesticides in animal matrices by dual columncapillary gas chromatography with nitrogen-phosphorus detection[J].Journal of Chromatography A，2005，1071(1/2)：67-70. ) ( 21] LEHOTAY SJ， de KOK A， HIEMSTRA M， et al. 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