右旋酮洛芬氨丁三醇中氨丁三醇检测方案(离子色谱仪)

2 回收率 引言 氨丁三醇，别名三羟甲基氨基甲烷，在药物中的应用非常广泛。氨丁三醇本身具有药理活性，其注射液可用于治疗急性呼吸性、代谢性酸中毒及碱化尿液。氨丁三醇作为有机胺，还可以与有酸性基团的难溶性药物形成易溶于水的复盐，代表药物有：右旋酮洛芬氨丁三醇、酮咯酸氨丁三醇、卡前列素氨丁三醇、磷霉素氨丁三醇、卡明列素氨丁三醇等。此外，氨丁三醇还是药用辅料，作为酸碱平衡调节剂使用，代表药物有：碘佛醇注射液、碘普罗胺注射液等。 由于氨丁三醇不具备产生紫外-可见吸收的官能团，现行质量标准中对氨丁三醇的质量控制相对薄弱，多数品种质量标准中缺少对氨丁三醇的质量控制，例如右旋酮洛芬氨丁三醇、磷霉素氨丁三醇、酮咯酸氨丁三醇、碘普罗胺注射液等，另外还有少数品种采用酸碱滴定法、紫外法、示差折光检测器法对氨丁三醇进行检测，如氨丁三醇注射液、卡前列素氨丁三醇注射液和碘佛醇注射液。 目前，氨丁三醇定量的相关文献也很少，仅秦香芹等11.2]采用分光光度法测定了氨丁三醇注射液的含量；张勉等采用HPLC-RID法对碘佛醇注射液中的氨丁三醇进行了测定；周洁等采用HPLC-CAD法完成了对卡前列素氨丁三醇注射液中氨丁三醇的检测。上述分析方法中，酸碱滴定法受其它组分和辅料的干扰较大；紫外法测定前需要进行衍生化，程序复杂、重现性较差； HPLC-IRD法和HPLC-CAD法的重复性和稳定性均较好，但通用性较差，变更其他药物组分或辅料，需要重新摸索方法，以实现与氨丁三醇的分离。 离子色谱法具有灵敏准确、操作简便、分析速度快、专属性高等特点同。氨丁三醇，属低分子量烷完胺，水溶性好，在酸性溶液中以阳离子形态存在，可选用较强的酸作流动相，阳离子交换分离，电导检测器检测。另外，目前商品化的固相萃取小柱，可以实现其他药物组分在小柱中的保留，排除对氨丁三醇的测定干扰。但离子色谱法测定氨丁三醇存在一个技术瓶颈，即氨丁三醇与钠离子较难分离，由于系统中或药物中钠离子的普 遍存在，干扰测定。这也是目前离子色谱法测定氨丁三醇鲜有报道的原因。本研究首次建立了一种通用的离子色谱法测定氨丁三醇的含量。该方法可用于多种成盐药物中氨丁三醇的检测、不同药物中氨丁三醇辅料的检测，同时还可为药物中低分子烷基胺类的测定提供新思路。 ( 仪器 ) ( Thermo ScientificTM Dionex TM ICS-离子色谱系统， 包括： ) ( -ICS-5000 DP色谱泵 ) ( - ICS-5000 DC检测器 ) Thermo ScientificTM Dionex TM AS-AP自动进样器 ( Thermo ScientificTM DionexTM ChromeleonT M 色谱工作站 ) 耗材 ( T hermo ScientificTM Dionex OnGuardII R P Cartridges( 1cc， P/N 057083) ) ThermoFisher Thermo ScientificTM Target2TM Nylon Syring Filters(0.45um，30mm， P/NF2500-1) 一次性使用无菌注射器，1mL(上海治宇医疗器械有限公司) 去离子水(18.2 MQ-cm， Thermo ScientificTMgenPure ProTM UV-TOC， P/N 50131948) 氨丁三醇，中国食品药品检定研究院，批号：100643-200501； 钠单元素标准溶液(1000pg/mL)，中国计量科学研究院； 钙单元素标准溶液(1000pg/mL)，中国计量科学研究院； 甲烷磺酸， Tokyo Chemical Industry， 批号：6ZIOC； 右旋酮洛芬氨丁三醇，中国食品药品检定研究院，批号：101296-201401； 磷霉素氨丁三醇，中国食品药品检定研究院，批号：130552-200501； 碘佛醇注射液，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：15020737。 标准溶液的制备 精密称取氨丁三醇适量，加水溶解制成含氨丁三醇1000 pg/mL的溶液，作为氨丁三醇标准溶液。再分别精密量取氨丁三醇标准溶液(1000pg/mL)适量，加水稀释制成含氨丁三醇分别为20、40、60、80、100、150、200ug/mL的溶液，作为氨丁三醇线性标准溶液. 样品前处理 精密称取右旋酮洛芬氨丁三醇(批号：101296-201401)适量，加水溶解并定量稀释，制成约含氨丁三醇300ug/ml的溶液，作为右旋酮洛芬氨丁三醇储备液。精密量取氨丁三醇标准溶液(1000pg/mL ) 4、5、6mL各三份，分别置50mL量瓶中，再分别加入右旋酮洛芬氨丁三醇储备液5mL，加水稀释至刻度，摇匀，过0.22um滤膜及1.0cc OnGuard RP柱。 分析柱： Thermo Scientific Dionex CS16.5x250mm (P/N 057573) 保护柱： Thermo Scientific Dionex CG16，5x250mm (P/N 057574) 淋洗液： 水-0.05 mol/L甲烷磺酸-50%乙腈(60：20：20)， 进样体酥： 10pL 柱温： 30℃ 检测器： 抑制型电导检测 检测池温度：35℃ 抑制器： CSRS300(4mm) 运行时间： 25min 结果与讨论 常规阳离子柱中，，可以检测氨丁三醇的有：DIONEX lonPac CS12A(4x250mm)、DIONEXIonPac CS16(5x250mm)和DIONEX lonPac CS17(4x250Vmm)等。经试验考察，结果表明：采用lonPac CS16色谱柱，等度洗脱即可较好的检测氨丁三醇，峰形较好，与钠离子分离良好，分析时间较快，与其它阳离子柱相比，有明显优势(见图1)。 图1.离子色谱法专属性考察图谱 Fig. 1 The exclusion inspection of IC detective method 色谱条件的优化 选择分离度(氨丁三醇与钠离子峰)和峰高(氨丁三醇)作为两个评价指标，对乙腈浓度和甲烷磺酸浓度分别进行优化。 以甲烷磺酸浓度为0.010mol/L， 调节乙腈浓度，结果表明乙腈浓度大于5%时，氨丁三醇与钠离子能够完全分离，但随着乙腈浓度的升高，氨丁三醇的峰高变小，灵敏度变差，最终选选乙腈浓度为10%。 以乙腈浓度为10%，调节甲烷磺酸浓度，结果表明甲烷磺酸浓度小于0.012mol/L时，氨丁三醇与钠离子能够完全分离，但随着甲烷磺酸浓度的降低，氨丁三醇的峰高变小，灵敏度变差，最终选择甲烷磺酸浓度为0.010mol/L。 以浓度(C， ugm_")对峰面积(A)作线性回归，得回归方程： A=0.1386C+1.8346， r=0.999。结果表明，氨丁三醇在20~200pgmL'的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。 精密称取右旋酮洛芬氨丁三醇(批号：101296-201401)适量，加水溶解并定量稀释，制成约含氨丁三醇300 pg/mL的溶液，作为右旋酮洛芬氨丁三醇储备液。精密量取氨丁三醇标准溶液(1000pg/mL ) 4、5、八6mL各三份，分别置50mL量瓶中，再分别加入右旋酮洛芬氨丁三醇储备液5mL，加水稀释至刻度，摇匀，经RP小柱预处理后测定，采用标准曲线法，计算回收率分别为：104.6%、99.7%、104.8%、100.8%、101.1%、99.2%、98.7%、96.5%、98.3%(n=9)，均值为100.4%， RSD为2.8%。 精密量取碘佛醇注射液(批号：15020737)适量，加水溶解并定量稀释，制成约含氨丁三醇300 pg/ml的溶液，作为碘佛醇储备液。精密量取氨丁三醇标准溶液(1000pg/mL) 4、5、6mL各三份，分别置50mL量瓶中，再分别加入碘佛醇储备液5mL，加水稀释至刻度，摇匀，经RP小柱预处理后，进样测定，采用标准曲线法，计算回收率分别为：101.7%、98.9%、101.3%、97.1%、96.4%、96.3%、102.2%、100.3%、98.1%(n=9)，均值为99.1%， RSD为2.3%。 本研究首次建立了一种通用的离子色谱法测定氨丁三醇的含量。该方法可用于多种成盐药物中氨丁三醇的检测、不同药物中氨丁三醇辅料的检测，同时还可为药物中低分子烷基胺类的测定提供新思路。 ( [1]秦香芹，葛炳艳.分光光度法测定氨丁三醇注射液含量 [].黑龙江医药，2012，25(3)：346 ) ( [2]潘爱萍.分光光度法测定酸碱调节剂中氨丁三醇的含 量[J].海峡药学，2010，22(9) ： 58 ) ( [3 ] 张勉，程辉跃，李超.HPLC测定碘佛醇注射液中的氨丁 三醇[J]. 华西药学杂志，2012，27(6)：722 ) ( [4]周洁，姜宏，姚静等. HPLC-UV-CAD同时测定卡前列 素氨丁三醇注射液中主要成分含量[J].中国新药杂 志，2015，24(1) ： 22 ) ( [5] 李婕，韩春霞，黄海伟等.离子色谱法测定炎琥宁原料药中碳酸盐[J].现代药物与临床，2014，29(9)：1 ) SCIENTIFIC 免费服务热线：支持手机用户)ThermoFisherSCIENTIFIC